紫外辐射和水杨酸浸渍对离体桑树枝条韧皮部中桑皮苷A水平的影响

【摘要】本实验以桑树栽培品种842（Octoploidvariety，即八倍体桑品种）的桑树枝条韧皮部（简称桑枝皮）为实验材料，先采用醇-水提取，后经过大孔树脂(D101)、葡聚糖凝胶(SephadexLH-20)的吸附与分离进一步提纯，再利用半制备HPLC-DAD技术提取出主要活性单体成分，经过高效液相色谱二极管阵列(HPLC-DAD)检测和与标准品紫外光谱比对分析，最后鉴定分离到的高纯单体为桑皮苷A(mulberrosideA)。以制备的桑皮苷A绘制线性方程定量分析待测样品中桑皮苷A的含量，线性方程为y=7535.64716+1508590x，相关系数R2=0.997。因此，在0.1-2.0μg范围内桑皮苷A浓度与其吸光度具有很好的线性关系。本文以此HPLC-DAD检测技术为基础，对紫外辐射和水杨酸处理对离体桑枝条皮层中桑皮苷A的水平变化进行了系统分析。首先，本文对桑皮苷A的毒性进行了动物实验。用桑皮苷A处理正常ICR小鼠，采用尾静脉每天注射的方式，研究了桑皮苷A对小鼠生长与发育的影响。动物实验表明，桑皮苷A处理(50mg/kg)后，样品处理组小鼠体重增加减缓，肝脏系数增大，但统计分析表明与正常对照组的差异不显著；而样品处理组小鼠血清中SOD和GSH-PX水平均有所上升，与正常组没有显著差异；肝脏中SOD和GSH-PX水平均略有下降，但与正常组的差异不显著；而样品处理组小鼠血清与肝脏中总蛋白含量明显增高，统计分析表明与正常组差异显著，但是仍在正常波动范围内；观察肝脏HE染色切片，发现桑皮苷A处理后肝脏细胞出现轻微损伤。综合以上结果显示，桑皮苷A对体重的增长和肝脏系数无明显影响；对血液和肝组织中各项氧化指标无明显影响，但是对肝脏细胞有轻微损伤作用。其次，我国蚕区每年会产生大量的桑枝，研究这些废弃桑枝的活性成分及其高效利用具有重要的现实意义。桑皮苷A是一种氧化白藜芦醇二糖苷，是一种桑树的次生代谢产物，在桑根和桑枝中都存在，具有多种生物活性和药理作用。为了研究提高离体桑枝中桑皮苷A含量的方法，并且保证实验的准确性，所以以桑树栽培品种842的桑枝为试验材料，选用相同位置的枝条，分别用紫外线辐射和水杨酸进行处理。用三种不同波长范围的紫外线（紫外ultravioletC(UVC)、ultravioletB(UVB)、ultravioletA(UVA)）对刚剪下来的新鲜842桑枝条进行辐射处理。结果显示，用UVC辐射处理8分钟时，桑皮苷A的含量达到最大(0.72μg/mg)，达到处理前的2.2倍；用UVB处理仅2分钟后，桑皮苷A的含量最大(0.61μg/mg)，达到处理前的2.7倍；而用UVA处理6分钟时，桑皮苷A的含量达到最大(0.48μg/mg)，达到处理前的1.2倍。这些结果表明，三种紫外光辐射都能明显刺激桑枝皮层的细胞，促使皮层细胞分泌桑皮苷A增加。其中紫外波长290-320nm范围的UVB辐射处理对桑皮苷A含量增加的效果最显著。分别以不同浓度的水杨酸浸泡不同时间对刚剪下来的新鲜842桑枝条进行处理。当在60μg/mL浓度的水杨酸中浸泡80s，其桑皮苷A含量升高最快(0.64μg/mg)，达到处理前的2.1倍。当缩短浸泡时间(20s)和提高浓度(80μg/mL)同样可以提高桑皮苷A的含量2.0倍(0.62μg/mg)。这说明水杨酸处理对桑枝皮层的细胞也有显著的刺激作用，从而促使皮层细胞分泌桑皮苷A增多。此外，同一根枝条上下不同部位皮层中桑皮苷A的含量差异非常明显，枝条顶部嫩皮层含量很低(0.14μg/mg)，越到下部含量越高，含量高达15倍。桑枝条剪伐的时期对紫外辐射和水杨酸处理的效果也有很大的影响，剪伐的时期越晚，桑树枝条生长时间延长，其韧皮部细胞对处理条件的敏感性变得越差，因而刺激细胞合成桑皮苷A的速度变得越慢。综上所述，本文利用HPLC-DAD技术建立了一套完整的桑枝皮中桑皮苷A的分离、纯化、鉴定和快速分析检测的方法，为大量废弃桑枝中桑皮苷A的医用开发提供了良好的检测手段。动物毒性试验表明桑皮苷A不会影响正常小鼠生长与发育，对小鼠没有毒性作用。紫外辐射和水杨酸浸渍均能激活离体桑枝皮层细胞，促进桑皮苷A合成。这些试验方法和实验结果为今后桑枝皮中桑皮苷A的分离与高级保健品或生物药物的开发奠定了良好的基础，为促进桑枝生物资源的高效和充分利用作出有益的尝试。
【作者】赵丽君；
【导师】张雨青；
【作者基本信息】苏州大学，生物物理学，2014，硕士
【关键词】桑皮苷A；离体桑枝；毒性；紫外辐射；水杨酸；

【参考文献】
[1]郝运伟.16-24周孕龄人胎肝细胞核蛋白质表达谱的构建[D].中国人民解放军军事医学科学院,细胞生物学,2004,硕士.
[2]李曼琳.基于整合营销传播的城市品牌建设研究[D].北京印刷学院,传播学,2013,硕士.
[3]朱琳.2011-2012中国男子篮球职业联赛北京金隅队外援比赛表现的研究[D].首都体育学院,体育教学,2013,硕士.
[4]顾琳琳.遗产特留份制度研究[D].河北经贸大学,民商法学,2014,硕士.
[5]钟崇武,严幸.新钢24m~2烧结机扩容改造及效果[J].炼铁.2003(03)
[6]彭天乾.热连轧无活套轧钢的控制[J].冶金自动化,1982,01:11-18.
[7]王飞.怀素草书笔势与体势研究[D].中国艺术研究院,美术学,2012,硕士.
[8]祝列克.关注长江流域湿地[J].中国三峡建设.2007(04)
[9]王金凤.《竹书纪年》与《春秋》比较研究[D].山东师范大学,中国古典文献学,2013,硕士.
[10]何光裕,侯景会,黄静,孙小强,陈海群.ZnO/氧化石墨烯复合材料的制备及其可见光催化性能[J].高校化学工程学报,2013,04:663-668.
[11]李达义,杨凯,孙玉鸿,熊博.一种新型串联混合型有源电力滤波器[J].电力系统自动化,2015,06:82-87.
[12]郭海锋,彭起涛,程君,张珏.干线协调控制方案的快速平滑过渡方法[J].西南交通大学学报,2014,05:882-887.
[13]王佳鑫.中国当代水彩风景画意象性研究[D].东北师范大学,美术学,2012,硕士.
[14]马迪.妇女卵巢功能衰退过程中骨密度的变化及健步走运动对绝经过渡期及绝经早期妇女骨密度的影响[D].北京协和医学院,护理学,2014,博士.
[15]坑继超.七、八年级地理教材范例研究[D].内蒙古师范大学,教育（专业学位）,2013,硕士.
[16]张岚.新高校会计制度下的高校财务管理研究[J].中国总会计师,2014,12:58-59.
[17]阿睦（AhmadMuradBinAbdulHalim）.马来西亚政府出口支持计划的实证研究[D].对外经济贸易大学,国际贸易学,2014,博士.
[18]刘楚,吴才茂.孤灯冷泪与家庭责任:清代清水江流域的寡妇及其生活[J].原生态民族文化学刊,2014,01:35-43.
[19]王惠.幼儿教师情绪调节方式与工作倦怠的关系研究[D].郑州大学,应用心理学,2013,硕士.
[20]刘承军,陈东兴.首钢矿业烧结厂余热锅炉激波吹灰效益显著[J].冶金自动化,2006,03:68.
[21]王丹.会计稳健性对我国民营上市公司债务融资影响的实证研究[D].兰州理工大学,会计学,2014,硕士.
[22]辛妍.改变我们生活的集成电路[J].新经济导刊,2014,04:37-42.
[23]吴忠伟.基于滑模变结构的输入成形控制方法研究[D].长春工业大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[24]胡可云,陆玉昌,石纯一.粗糙集理论及其应用进展[J].清华大学学报(自然科学版),2001,01:64-68.
[25]蔡花.银行信息系统的数据保护问题研究[D].西安电子科技大学,控制理论与控制工程,2012,硕士.
[26]金铃.铁氧体材料的合成及其微波吸收的应用研究[D].华东理工大学,2013.
[27]张淳鎏.成都平原农业景观美学评价研究[D].西南交通大学,园林植物与观赏园艺,2014,硕士.
[28]赵民德.我所知道的一点DataMining[J].中国计算机用户,2003,03:35.
[29]李倩.拮抗细菌L5的鉴定及其生防相关因子初步分析[D].扬州大学,植物病理学,2012,硕士.
[30]张峰,徐建刚.位置:GIS在CRM中的应用探讨[J].微型电脑应用,2003,01:11-13.
[31]黄昕昕.大鼠不同部位来源脂肪源性干细胞的增殖能力比较及CM-Dil体外标记研究[D].大连医科大学,整形外科学,2012,硕士.
[32]杨攀.李东垣方药配伍规律研究及其验案数据库查询系统的构建[D].湖南中医药大学,方剂学,2013,硕士.
[33]王建定.实施AA制教师评价方案的定性研究[D].华东师范大学,教育管理,2001,硕士.
[34]黄永健.基于ZigBee技术的无线传感器网络平台[D].广西科技大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[35]路冰.钢板—混凝土组合悬臂梁拟静力试验研究[D].哈尔滨工业大学,防灾减灾工程及防护工程,2014,硕士.
[36]王雅琳,陈斌,王晓丽,桂卫华.基于密度调整的改进自适应谱聚类算法[J].控制与决策,2014,09:1683-1687.
[37]阎春荣.絮凝剂磁化研究[D].大连理工大学,环境工程,2003,硕士.
[38]王月.德国媒体中中国形象的呈现[D].吉林大学,新闻与传播,2014,硕士.
[39]王玮.吴均文学思想研究[D].华侨大学,中国语言文学,2013,硕士.
[40]董先茹.蟹味菇菌株离子束诱变选育及油菜秸秆栽培研究[D].安徽大学,生态学,2013,硕士.
[41]刘亮.论禁止篡夺公司机会[D].北京交通大学,2014.
[42]刘海龙.《吕氏春秋》中的“气”思想研究[D].安徽大学,中国哲学,2013,硕士.
[43]赵紫纯.车架结构轻量化设计研究[D].中北大学,车辆工程,2013,硕士.
[44]赵艳艳.一种新的人工结香沉香质量评价及白木香植物资源多样性研究[D].广东药学院,中药学,2013,硕士.
[45]李鹏.国产动画广告发展策略研究[D].山东大学,设计艺术学,2013,硕士.
[46]杨开红,季海波.一类高阶线性系统的分层控制[J].自动化学报,2015,01:176-179.
[47]田蜜.当前农村医疗卫生保障现状及运行评价分析[D].山东大学,工业工程（专业学位）,2012,硕士.
[48]李婷.新疆柯尔克孜族《玛纳斯》保护与传承的管理策略研究[D].中国音乐学院,音乐学,2014,硕士.
[49]杨海燕.中等职业学校德育课教学艺术研究[D].广东技术师范学院,教育学,2014,硕士.
[50]谢霏.筒体—桩筏基础共同作用的研究[D].武汉理工大学,结构工程,2003,硕士.