CD40信号联合细胞因子体外制备过继免疫治疗细胞的实验研究

CD40信号联合细胞因子体外制备过继免疫治疗细胞的实验研究

作者:师大云端图书馆 时间:2018-04-30 分类:参考文献 喜欢:3595
师大云端图书馆

【摘要】恶性肿瘤严重危害人类的健康,虽然手术、化疗和放疗等治疗手段不断改进提高,但是仍有很多患者遭罹肿瘤的复发。从肿瘤生物/免疫治疗方面来打开突破口,寻找优化的综合治疗方案,是现代肿瘤治疗的新途径。肿瘤疫苗、单克隆抗体治疗、细胞因子等佐剂治疗和过继性细胞免疫治疗是近来比较常用的肿瘤免疫治疗方法。肿瘤过继性细胞免疫治疗(Adoptivecellularimmunotherapy,ACI或AIT)是指将体外扩增的具有抗肿瘤活性的免疫细胞(包括特异性的和非特异性的)向肿瘤患者回输,直接或间接激发机体免疫应答以杀伤肿瘤细胞,这对细胞免疫功能低下的患者特别适用,其主要的原理是在体外分离得到患者外周血单个核细胞,经过特异性抗原作用和实验室培养后具备了特异性或非特异性杀伤肿瘤的能力,之后将这种细胞扩增到一定数量再回输到患者体内,以预防肿瘤的复发和转移,这在一定程度上解决了患者放、化疗后免疫力差,生活质量低的严重问题,延长了患者的生存时间。目前,多种细胞因子诱导的杀伤性细胞(cytokinesinducedkillers,CIK)已经用于多种恶性肿瘤的辅助治疗,因其兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤特点,被认为是肿瘤过继免疫治疗的希望,但其临床应用依然存在着一些亟待解决的问题,进一步发掘过继免疫治疗细胞潜在的抗肿瘤优势,对于提高肿瘤过继性细胞免疫治疗在肿瘤综合治疗中的地位意义深远,因此本研究运用本所自主研制的CD40激发型抗体5C11联合细胞因子IFN-α和IL-7体外制备一种新型过继免疫治疗细胞,从细胞增殖、细胞生物学特性和细胞的杀伤效应等方面探讨其过继免疫治疗的作用,以期为肿瘤过继性细胞免疫治疗开辟一种新的方案。目的:比较新型方法(CD40激发组)与传统方法(CD3激发组)培养的过继免疫治疗细胞在增殖速度、细胞亚群和生物学特性(T细胞、NK-T细胞、单核细胞、Treg/ICOS+Treg细胞和表达PD-1、CXCR-4的T细胞等)以及体外趋化能力和杀伤肿瘤细胞能力等方面的差异,以期建立体外培养过继免疫治疗细胞的优化方案。方法:常规经Ficoll分离正常人外周血得到外周血单个核细胞(PBMC),于6孔板和24孔板中加入相应细胞因子(CD40激发组:CD40激发型单抗5C11,IFN-α,IL-7;CD3激发组:IFN-γ,IL-2,anti-CD3mAb,IL-1α)后放入培养箱中培养,每隔两天补一次细胞因子液。(1)在培养的不同时间点(第6、9、12天)记录细胞形态并用台盼蓝染色法进行活细胞计数以检测细胞增殖;(2)在培养的不同时间点,运用免疫荧光标记和流式细胞仪分析检测T细胞、NK细胞、NKT细胞、CD14+CD56+CD11c+细胞比例,检测T细胞表达CD62L、CCR7、CXCR-4以及PD-1的变化以及Treg和ICOS+Treg细胞的表达比例;(3)收集培养第9天的细胞,利用Transwell板检测体外培养的过继免疫治疗细胞的体外趋化能力;(4)在培养的第9天收集两组体外培养的过继免疫治疗细胞,将其与人肺癌细胞株A549按照不同的效靶比共同培养72小时后,用CCK-8法检测体外培养的过继免疫治疗细胞杀伤肿瘤细胞的能力。结果:(1)CD3激发组和CD40激发组细胞都出现明显的集落样生长,CD40激发组细胞增殖速度略慢,但二者没有显著性差异;(2)CD3激发组和CD40激发组细胞在T淋巴细胞组成上无显著差异,CD40激发组的NK-T细胞表达显著上调,中央型记忆CD8+T细胞(CD8+TCM)的比例增加,并且在培养的特定时间出现了独特的CD14+CD56+CD11c+细胞群体;(3)和CD3激发组相比,CD40激发组的Treg细胞、ICOS+Treg细胞和表达PD-1的T细胞比例显著降低;(4)CD40激发组培养的过继免疫治疗细胞在第9天时,体外趋化能力强,并且对人肺癌细胞株A549细胞的杀伤活性不亚于CD3激发组。结论:本实验所建立的新型过继免疫治疗细胞体外培养方法能提高培养细胞中NK-T细胞的比例,显著减少Treg细胞的数量,并且在培养的特定时间出现了独特的CD14+CD56+CD11c+细胞群体,为肿瘤过继免疫治疗新方案的开拓做了有益的探索。
【作者】高腾飞;
【导师】张学光;
【作者基本信息】苏州大学,免疫学,2014,硕士
【关键词】过继免疫治疗细胞;CIK;CD40激发型单抗5C11;IFN-α;IL-7;Treg;

【参考文献】
[1]朱小骏.参数配对组合的软件测试方法研究与实现[D].上海师范大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[2]刘桢.数字化营销中的数据挖掘[D].华北电力大学(北京),技术经济及管理,2004,硕士.
[3]王凤天.EGR及喷射参数对工程机械柴油机性能影响的研究[D].吉林大学,动力机械及工程,2014,硕士.
[4]程文莉,何闻伟.退市压力下ST公司摘帽绩效的实证研究[J].会计之友,2014,02:53-59.
[5]杜秀丽.现存预应力对混凝土桥梁性能的影响及CFRP加固效果研究[D].青岛理工大学,建筑与土木工程,2013,硕士.
[6]李小坚.外部扰动下VCSELs的偏振开关及双稳特性研究[D].西南大学,光学,2013,硕士.
[7]莫君飞.基于Sip的Android音视频通信系统研究与设计[D].广东技术师范学院,系统理论,2013,硕士.
[8]张文茹.《灌装许可协议》翻译报告[D].中南民族大学,翻译(专业学位),2013,硕士.
[9]孟小琼.具有能量集成的用水网络优化设计方法研究[D].大连理工大学,化学工程,2003,硕士.
[10]潘妍艳.分布式仿真高层体系结构(HLA)核心RTI测试与分析[D].浙江大学,计算机软件与理论,2004,硕士.
[11]陈龙,王国胤.计算机取证技术综述[J].重庆邮电学院学报(自然科学版),2005,06:736-741.
[12]黄彤.成都都市农业发展模式研究[D].西南交通大学,公共管理(专业学位),2012,硕士.
[13]刘茵.研发项目团队冲突、交互记忆系统与团队绩效关系研究[D].杭州电子科技大学,企业管理,2013,硕士.
[14]吴丹.股权结构对上市公司社会责任履行情况的影响[D].兰州商学院,会计学,2013,硕士.
[15]沈忠杰,司良,田鹤立,张峰,赵守庭,杨保明.安钢中板厂加热炉燃烧模糊控制系统[J].冶金自动化,1998,02:48-49.
[16]陈彧婷.姜黄素衍生物C213抑制线粒体Hsp90功能及抗白血病的作用[D].福建医科大学,药理学,2014,硕士.
[17]刘辉.基于换热站智能监控系统的设计与实现[D].内蒙古科技大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[18]张继成.UFO探索新发现——“飞碟”光顾春城[J].质量与可靠性.1999(01)
[19]马丹,赵军.一类仿射非线性网络控制系统的稳定性分析[J].控制与决策,2006,09:1001-1005+1010.
[20]单锋丽.牛γ干扰素单克隆抗体的制备与鉴定[D].扬州大学,预防兽医学,2012,硕士.
[21]徐金芳.基于供应链视角的A公司生产计划改善研究[D].大连理工大学,工商管理(专业学位),2012,硕士.
[22]崔娟.基于集成神经网络的蛋白质相互作用研究[D].济南大学,计算机软件与理论,2012,硕士.
[23]邵伟中,徐瑞华.城市轨道交通网络运营协调及应急处置辅助决策技术[J].城市轨道交通研究.2008(06)
[24]韩亮亮.管理层收购(MBO)中的股权配置研究[D].沈阳工业大学,会计学,2004,硕士.
[25]罗欢.基于MEMS的曲面仿生复眼设计与制作[D].华中科技大学,光学工程,2013,硕士.
[26]郝雪楠.应用于下肢康复机器人的SEMG的控制研究[D].北方工业大学,控制工程,2014,硕士.
[27]付丽,周立君,陈锡栋.挖掘机工作装置的简单设计方法[J].起重运输机械,2004,11:17-19.
[28]赵建平.室内环境下运动目标跟踪算法研究[D].天津理工大学,控制工程,2013,硕士.
[29]秦小明.在城市社区开展专业社会工作的路径分析[D].山东大学,社会工作(专业学位),2013,硕士.
[30]顾愚.CP合剂工业应用及抑制机理研究[J].有色金属(选矿部分).1992(05)
[31]王黛卉子.琵琶非乐音探微[D].天津音乐学院,音乐(专业学位),2014,硕士.
[32]邹岚,白洪涛.饲料膨化机模孔几何参数理论分析[J].农业机械学报.2008(06)
[33]高文雷.旋转填充床中湿法氧化脱硝的研究[D].北京化工大学,化学工程与技术,2013,硕士.
[34]沈朔.税制改革与税收征管中的道德风险分析[D].苏州大学,公共管理(专业学位),2012,硕士.
[35]冯慧敏.《隋史遗文》研究[D].渤海大学,中国古代文学,2013,硕士.
[36]邢震.基于交换式以太网列车通信网络的研究[D].北京交通大学,交通信息工程及控制,2013,硕士.
[37]甘又月.700m主跨混合梁斜拉桥运营阶段计算和钢桥面详细计算[D].西南交通大学,桥梁与隧道工程,2012,硕士.
[38]王莉,秦勇,俞飒,靳磊,贾利民.突发事件下列车迂回径路规划方法[J].长安大学学报(自然科学版),2015,S1:65-69+85.
[39]李炯珏.社会工作视角下丧偶式单亲儿童心理需求研究[D].苏州大学,社会工作(专业学位),2013,硕士.
[40]实习记者陶加.石墨烯材料研究取得重要突破[N].中国化工报,2010-04-08002.
[41]祁国平.基于人眼视觉特性的变分图像降噪与质量评价[D].中北大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[42]褚益平.残疾儿童康复政策梳理及实施状况研究[D].首都经济贸易大学,社会保障,2013,硕士.
[43]庄玉良,王萍.数据仓库——企业信息化建设的方向[J].科技导报,2002,07:18-21.
[44]李学敏.高校网络教育数字化学习资源认证研究[D].北京交通大学,2014.
[45]曾令辉,贺才乐,陈敏.思想政治教育载体研究的回顾与展望[J].思想教育研究,2014,10:17-25.
[46]夏晓雪.北京市第三产业劳动力配置效率研究[D].首都经济贸易大学,劳动经济学,2014,硕士.
[47]楼宁.STIM1/Orai1对原代SD大鼠星形胶质细胞细胞增殖的影响[D].华中科技大学,人体解剖学与组织胚胎学,2013,硕士.
[48]周誉昂.浙江省工业化对城市化的影响机制研究[D].浙江工商大学,产业经济学,2013,硕士.
[49]陈星欣,白冰.隧道下穿既有结构物引起的地表沉降控制标准研究[J].工程地质学报,2011,01:103-108.
[50]李萌斐.威斯康星州进步主义运动研究:拉弗莱特与公共利益[D].上海外国语大学,英语语言文学,2012,硕士.

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