β3GnT8在结肠癌细胞株转移中的分子机制及转录因子c-jun对β3GnT8的调控作用

【摘要】目的：研究糖基转移酶β3GnT8在结肠癌细胞侵袭转移中的分子机制及探讨转录因子c-jun对β3GnT8的转录调控作用。方法：（1）Tranwell细胞迁移和侵袭实验分别检测LS-174T，SW620，SW480，LoVo四株结肠癌细胞的迁移和侵袭能力。（2）Western-blot检测β3GnT8和CD147在四株结肠癌细胞中的蛋白表达水平。（3）流式细胞术和Lectin-blot检测四株结肠癌细胞株中多聚乳糖胺链的表达水平。（4）将β3GnT8的真核正义表达载体及空载体、β3GnT8干扰载体及对照载体通过脂质体分别介导转染至低转移的结肠癌细胞株LS-174T和高转移的结肠癌细胞株LoVo。（5）Western-blot检测转染后LS-174T中β3GnT8上调后和LoVo细胞中β3GnT8下调后CD147糖基化的改变。（6）Tranwell细胞迁移和侵袭实验检测转染后LS-174T中β3GnT8上调后和LoVo中β3GnT8下调后，其细胞迁移和侵袭能力的变化。（7）克隆转录因子c-jun全长基因序列并构建c-jun正义表达载体。（8）将c-jun真核正义表达载体及空载体通过脂质体转染胃癌SGC-7901细胞，并通过G418筛选稳转细胞株。（9）荧光显微镜观察转染荧光载体的细胞株，RT-PCR和Western-blot检测c-jun、β3GnT8和CD147的mRNA和蛋白表达；流式细胞术及Lectin-blot检测c-jun对细胞糖蛋白中多聚乳糖胺链的表达影响；细胞增殖和细胞周期实验检测转染c-jun后细胞增殖能力的变化。结果：（1）Transwell小室检测四株结肠癌细胞株中侵袭和迁移能力发现结肠癌细胞株的转移能力从低到高依次为LS-174T，SW620，SW480，LoVo。（2）Western-blot检测发现随着结肠癌转移程度的增加，β3GnT8和HG-CD147的表达也随之升高，且β3GnT8和HG-CD147的表达具有一定的相关性。（3）流式细胞术和Lectin-blot实验结果显示，多聚乳糖胺链的表达也随着结肠癌转移程度的增加而升高，并且被多聚乳糖胺链修饰的CD147糖蛋白的分子量大小在49kDa-90kDa之间。（4）LS-174T中β3GnT8上调后，与空白对照组相比，HG-CD147的糖基化表达升高，其侵袭和迁移能力也增强；LoVo细胞中β3GnT8下调后，与空白对照组相比，HG-CD147的糖基化表达下降，其侵袭和迁移能力也降低。（5）构建c-jun正义表达载体，正反向测序结果在NCBI基因库中BLAST同源检索后显示正义载体中插入的c-jun目的片段正确（6）通过荧光显微镜观察、RT-PCR、western-blot等检测，c-jun正义表达载体成功转入细胞并得到稳定转染细胞株SGC-7901。（7）Western-blot检测发现，c-jun基因上调后，与对照组相比β3GnT8和HG-CD147的表达均升高。（8）细胞增殖和细胞周期实验检测发现，c-jun基因上调后，与对照组相比细胞增殖能力增强。结论：（1）四株结肠癌细胞株的转移能力从低到高依次为LS-174T，SW620，SW480，LoVo。（2）β3GnT8、多聚乳糖胺链、HG-CD147的表达水平随着结肠癌转移程度的增加而升高，并且β3GnT8与HG-CD147的表达呈正相关。（3）在结肠癌细胞中β3GnT8可能通过调节HG-CD147的糖基化水平来影响其侵袭转移能力。（4）筛选出c-jun上调表达的SGC-7901稳转细胞株。（5）转录因子c-jun可能通过促进糖基转移酶β3GnT8的表达来影响糖蛋白HG-CD147的糖基化水平进而促进细胞的增殖能力。
【作者】倪建龙；
【导师】吴士良；
【作者基本信息】苏州大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】β3GnT8；多聚乳糖胺链；HG-CD147；结肠癌细胞株；转移；转录因子；c-jun；

【参考文献】
[1]崔校玉.全并联供电方式研究与设计[D].西南交通大学,电气工程,2014,硕士.
[2]尤适.当前村民自治的问题与对策[D].中国矿业大学,政治学理论,2014,硕士.
[3]张贵林.水稻黑条矮缩病与植物激素的相关性及抗病品种的培育[D].山东师范大学,发育生物学,2013,硕士.
[4]李婉婷.基于最小生成树的股市板块趋势分析[D].华中科技大学,概率论与数理统计,2013,硕士.
[5]王顾希.基于鸡粪制造的有机无机复混肥对土壤易变有机碳组分的影响[D].四川农业大学,土壤学,2012,硕士.
[6]高瑜.基于SuperMap GIS的林火管理系统应用研究[D].中南林业科技大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[7]吴佳.圆唇散白蚁的繁殖体系[D].西北大学,动物学,2014,硕士.
[8]贾泞铭.基于纳米材料和聚赖氨酸修饰电极的几种过氧化氢电化学传感器[D].湖南师范大学,2014.
[9]张玉1,张德伟,周显青.酶催化显色法测定小麦粉中的过氧化钙[J].现代食品科技,2015,05:.
[10]卢昀.利用光学活体指纹采集仪采集指纹图象的预处理算法研究[D].华南师范大学,多媒体计算,2002,硕士.
[11]张亚楠.Guyon氏综合征的临床特点及疗效分析[D].吉林大学,临床医学,2014,硕士.
[12]王新,王冬冬.湖南城乡初中体育教育资源均衡配置研究[J].体育文化导刊,2014,02:142-145.
[13]王正阳,张肇培,王巍巍.冶金系统计算机用于企业管理的现状[J].冶金自动化,1997,04:1-3+16.
[14]刘露.腺病毒介导的色素上皮衍生因子抑制人食管癌细胞和脐静脉内皮细胞的体外实验研究[D].川北医学院,肿瘤学,2014,硕士.
[15]唐中义.绿色建筑设计方案的综合评价研究[D].长安大学,建筑与土木工程（专业学位）,2014,硕士.
[16]尤立家.论语文素质教育的任务[D].湖南师范大学,教育（专业学位）,2013,硕士.
[17]单武斌.2KW水平轴风力机叶片设计与优化研究[D].湖南科技大学,机械工程,2013,硕士.
[18]王鑫.风电场并网对系统电压的影响分析[D].大连理工大学,电气工程（专业学位）,2012,硕士.
[19]贾跟卯.甘肃陇南地区电网无功电压综合控制规则研究[D].重庆大学,电气工程,2003,硕士.
[20]陈改春.用顺应论分析外交语言中的语用模糊[D].内蒙古大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[21]魏静茹.基于Android平台的小学生英语单词记忆教育游戏的设计与开发[D].河北大学,教育技术学,2014,硕士.
[22]余梦泽,陈柏超,曹志煌,田翠华,邱昊.110kV并联可控电抗器及其应用[J].电力系统自动化,2008,03:87-91.
[23]金爱丽.DH油田1号背斜油藏描述[J].石油地球物理勘探,1993,05:591-602+646.
[24]王明永.基于云模型的人工鱼群算法[D].华东理工大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[25]陈剑戈.基于Web的工作流技术在CPC中的研究与实践[D].西安建筑科技大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[26]薛丹丹.过劳死法律规制探究[D].苏州大学,经济法学,2013,硕士.
[27]杨二海.新课标高中语文选修教材《语言文字应用》有效教学研究[D].内蒙古师范大学,学科教学（专业学位）,2013,硕士.
[28]田双双.A保险公司服务质量提升研究[D].河北大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[29]王桂霞.蒙牛公司促销费用风险管理方案设计与应用[D].内蒙古大学,高级管理人员工商管理,2013,硕士.
[30]王夏薇.老年恒河猴颈动脉粥样硬化性狭窄模型的建立[D].广西医科大学,神经病学,2013,硕士.
[31]徐嘉.南亚热带两种人工林土壤碳过程对减少降雨的响应[D].中国林业科学研究院,生态学,2014,博士.
[32]吴秋君.江汉平原湖泊湿地生态服务功能价值评估研究[D].华中师范大学,土地资源管理,2013,硕士.
[33]朱盼盼.低维自旋阻挫系统磁学性质和磁热效应的研究[D].东北大学,原子与分子物理,2010,硕士.
[34]高峰.复合材料层压板层间颗粒增韧技术[D].西北工业大学,工程力学,2004,硕士.
[35]靳榕榕.新世纪十年女性诗歌现象研究[D].首都师范大学,中国现当代文学,2013,硕士.
[36]贾晓旭.泰国新HSK五级考试词汇教学研究[D].吉林大学,汉语国际教育,2014,硕士.
[37]曹传嵩.恶劣环境下一种数据敏感的传感器节点故障检测技术研究[D].哈尔滨工业大学,计算机技术,2013,硕士.
[38]苏清苗.蜡式温控阀控温机理及内部流动特性研究[D].兰州理工大学,安全技术及工程,2013,硕士.
[39]黄添强,余养强,秦小麟.结构复杂数据的半监督聚类[J].控制与决策,2010,01:14-19.
[40]李伟.武钢专业技术人员绩效管理体系研究[D].武汉科技大学,企业管理,2012,硕士.
[41]王琛.论我国检察解释的现状与存废思考[D].苏州大学,法律（专业学位）,2012,硕士.
[42]段风华.纳米小世界人生大作为[J].神州学人,2012,04:18-22.
[43]罗丹.中国北车知识产权管理体系研究[D].北京交通大学,2013.
[44]杨亚君.COX-2在羊膜上的表达与分娩发动的关系及其抑制剂对子宫平滑肌运动的影响[D].重庆医科大学,妇产科学,2004,硕士.
[45]方蛟.纯钛表面锌离子注入改性的实验研究[D].吉林大学,口腔临床医学,2014,硕士.
[46]常晓巍.律师参与民事诉讼和解的研究[D].吉林大学,法律,2014,硕士.
[47]田佳.新型高性能长波长PIN光探测器的设计研究[D].北京邮电大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[48]段晓晓.经直肠超声结合弹性成像技术对前列腺良恶性病灶的预测价值[D].郑州大学,影像医学与核医学,2013,硕士.
[49]彭思量.晋愉地产集团营销战略研究[D].中南大学,2004.
[50]尹平.民办高校大学生闲暇时间利用的现状及教育对策研究[D].辽宁师范大学,教育学原理,2011,硕士.