NT注射液的Beagle犬药代动力学及长期毒性研究

【摘要】目的：观察NT注射液单次及反复静脉输注Beagle犬后的药动学特征，动物毒性反应、毒性靶器官和可能的延迟毒性，为NT注射液的临床应用提供依据。方法：药代动力学研究选用Beagle犬18只，按性别随机分为3组，每组6只，雌雄各半，分别为低剂量组（5mg/kg）、中剂量组（15mg/kg）和高剂量组（45mg/kg）。中剂量组连续给药4次，每天给药一次，其他各组均单次给药，用输液泵控制给药时长为30min。分别于首次和末次（中剂量组）给药前、给药开始后5、15、30、35、45、60、90、120、150、180min，于前肢或后肢皮下静脉取血约1ml，分离血浆后检测血药浓度。长期毒性研究选用Beagle犬40只，按性别随机分为5组，每组8只，雌雄各半。分别为生理盐水对照组、溶媒对照组、供试品低（10mg/kg）、中（30mg/kg）、高（90mg/kg）剂量组。生理盐水对照组给予0.9％氯化钠注射液；溶媒对照组给予NT注射液辅料。5组动物的给药容量均为9ml/kg，用输液泵控制给药时长为30min。每天给药1次，连续给药28天。试验期间对动物进行生理指标观察，包括体重、体温、心电图、眼科、血细胞计数、凝血功能、血液生化、尿常规等。高剂量动物由于毒性反应较大，给药4次后安乐死。其他组别动物(每组雌雄各3只动物)于第28次给药后次日进行安乐死，将剩余的雌雄各1只动物停药观察4周后再实施安乐死。对死亡及安乐死动物进行大体解剖观察，并对主要脏器组织进行病理学镜检。结果：Beagle犬在给予NT注射液后，雌雄动物表现出相似的药动学特征。单次静脉给药后，低、中、高剂量组的t1/2分别为2.74±0.95、4.44±2.27和11.00±2.24min，Cmax分别为927.87±187.74、4458.84±1259.01、21260.54±10915.83ng/ml，AUC0-180min分别为385.03±89.93、1657.16±535.55、9227.954301.73hng/kg。在5-45mg/kg剂量范围内，Cmax和AUC均随剂量增加而增大。低、中、高剂量组的给药剂量比为1:3:9，Cmax及AUC0-180min比值分别为1:4.81:22.91及1:4.30:23.97。中剂量组连续给药4次，末次给药的t1/2为11.24±10.80min，Cmax和AUC0-180min分别为2539.73±703.48ng/ml和1407.59±319.57hng/kg，平均蓄积因子为0.90。长期毒性研究给药第5天，90mg/kg剂量组1只动物死亡，其余7只动物由于濒死而进行了安乐死；10mg/kg剂量组动物未见与供试品毒性相关的异常反应。30mg/kg剂量组除1只动物陆续出现唾液分泌过多、剩食、少便或无便、精神不振、牙垢、齿龈潮红、眼分泌物外，其它动物未见与供试品毒性相关的异常反应。90mg/kg剂量组动物给药第2天开始陆续出现呼吸系统、神经系统和胃肠道等的异常反应，主要表现为呼吸急促、喘息、腹式呼吸、呼吸困难、鼻分泌物，精神不振、俯卧、无力、痉挛，软便、稀便、便血、恶心、呕吐、肛周污秽、少便或无便、剩食，眼分泌物，临床症状随给药时间延长呈加重趋势，于第5天死亡或安乐死。试验期间，10和30mg/kg剂量组动物的体重、体温、心电图参数、眼科检查、尿液指标未见有毒理学意义的变化。10mg/kg剂量组的血细胞计数、凝血功能指标和血液生化指标未见有毒理学意义的变化。与同期生理盐水对照组比较，90mg/kg剂量组动物第5天的体重、体温降低，部分动物的心电图波形异常，表现为P波高尖，与大体解剖所见右心房/右心室扩张相吻合，但组织学检查未见右心房/右心室有明显的病理改变。血浆AST和CK未见异常。与生理盐水对照组比较，30mg/kg剂量组给药第5、14和28天的Mono和90mg/kg剂量组第5天的Mono升高。30mg/kg剂量组第5、28天的FIB升高，90mg/kg剂量组第5天的PT缩短，APTT延长，FIB升高。30mg/kg剂量组第14、28天的TP，第5、14和28天的GLB升高，第14、28天的A/G降低。90mg/kg剂量组第5天的A/G降低，ALP、TP、GLB、TCH升高。30和90mg/kg剂量组其它血液学指标和血液生化指标未见有毒理学意义的变化。病理检查结果显示，第5天进行解剖的90mg/kg剂量组8只动物均可见肺脏膨大，呈暗红色或红白相间，伴或不伴气管内有泡沫状液体，胸腺、脾脏小；显微镜下的形态学特点为肺泡壁毛细血管扩张充血，肺泡腔内可见浆液性渗出物，其中有大量红细胞、一定量纤维素、少量中性粒细胞和肺泡巨噬细胞，胸腺、脾脏、淋巴结的淋巴细胞空竭/坏死，伴有淋巴细胞数量减少。给药期和恢复期结束时按计划安乐死后解剖的10和30mg/kg剂量组动物均未见与供试品相关的病理改变。在10~90mg/kg剂量范围内，NT的平均Cmax及AUC（0-药后60min）随剂量增加而增加。首次给药后，低、中、高剂量组NT的平均Cmax和AUC（0-药后60min）比值分别为1:4.98:15.08及1:5.60:19.50；第28次给药后，低、中剂量组NT的平均Cmax和AUC（0-药后60min）比值分别为1:4.35及1:4.83。低、中剂量组动物第28天与第1天的AUC(0-药后60min)和Cmax的比率均在0.90-1.3之间，未见明显药物蓄积。给药期间，溶媒对照组1只动物，10mg/kg剂量组2只动物，30mg/kg剂量组2只动物给药局部肿胀（仅持续1天），其它动物给药局部未见异常。给药局部肿胀的发生率和持续时间未见剂量-反应相关性。给药局部显微镜检查结果显示，各组均有部分动物发生静脉周围炎。生理盐水对照组和90mg/kg剂量组可见皮下出血，溶媒对照组和10、30、90mg/kg剂量组个别动物可见静脉炎。生理盐水对照组与各实验组动物静脉周围炎和皮下出血的发生率和病变程度相似，无明显剂量反应关系，可能为注射针的机械性损伤。结论：NT在Beagle犬体内的消除较快，血药浓度随剂量增加而增加，血药浓度增加比例大于剂量增加比例，但无药物体内蓄积，且无性别差异。NT注射液反复静脉输注给予Beagle犬4周的安全剂量为10mg/kg，致死剂量为90mg/kg。大剂量下主要的毒性反应为呼吸急促、喘息、腹式呼吸、呼吸困难、俯卧、无力、痉挛，软便、稀便、便血、恶心、呕吐、肛周污秽、剩食，PT缩短，APTT延长，Mono、FIB、TP、GLB升高，A/G降低。30mg/kg剂量组动物停药4周后毒性反应可恢复。NT注射液反复静脉输注Beagle犬4周后，明确的毒性靶器官为肺脏，可能的毒性靶器官为胸腺、脾脏和淋巴结。
【作者】赵亮；
【导师】童建；
【作者基本信息】苏州大学，公共卫生（专业学位），2014，硕士
【关键词】长期毒性；药代动力学；Beagle犬；

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