基质金属蛋白酶3-MMP3在抗登革病毒感染中的作用及机制的研究

【摘要】登革病毒是当今世界上分布最广的一种虫媒传染病毒，主要由叮咬人的埃及伊蚊和白纹伊蚊传播。据WHO估计，全球每年新增数百万的登革病毒感染者，因登革病毒感染导致死亡的人数约2.5万。目前，登革病毒感染的机制仍不明确，由于各血清型之间缺乏有效的交叉保护，又存在抗体依赖的增强作用等，至今仍无安全有效的疫苗可用。因此，研究宿主抗登革病毒的分子机制，对于了解登革热的发病过程具有重要意义。我们实验室从JAK-STAT信号通路入手，来研究宿主细胞抗登革病毒感染的分子机制，着重关注包括基质金属蛋白酶3（MMP3）在内的几个JAK-STAT下游效应分子在抗登革病毒感染中的具体作用。我们研究在登革病毒感染巨噬细胞前后，84个JAK-STAT相关基因的表达变化。结果显示基质金属蛋白酶MMP3表达上调了3.68倍。为了进一步验证PCR芯片的结果，我们又用定量PCR的方法在多种细胞中证明了MMP3在登革病毒感染的细胞中表达上调。抑制MMP3的表达，病毒的感染水平显著上升；而在RAW264.7细胞中过表达MMP3又可以抑制登革病毒的复制，这就揭示MMP3具有抗登革病毒感染的作用。为了了解MMP3抗病毒的分子机制，我们分别检测了MMP3沉默的细胞和对照细胞经登革病毒感染后，代表性抗病毒相关细胞因子的表达。结果发现，MMP3沉默的细胞中，抗病毒相关细胞因子和趋化因子的表达水平显著降低。免疫荧光发现MMP3在登革病毒感染的细胞中会发生从细胞质到细胞核的迁移；而且双荧光素酶报告基因检测结果显示，在病毒感染的细胞中，沉默掉MMP3，NFκB的转录活性下调，过表达MMP3又可以很强地激活NFκB。鉴于以上这些结果，我们推测MMP3很有可能是通过进入细胞核来影响NFκB的转录活性从而达到抗病毒作用。在后续实验中通过采用荧光定位和免疫共沉淀的方法得到了MMP3与NFκB在登革病毒感染的细胞中存在相互作用的结果。MMP3由信号域，前肽域，催化域，铰链区和羧基末端域等5个结构域组成，为了检测与NFκB相互作用的结构域，我们构建了含MMP3各个结构域的质粒，并分别与NFκB的两个亚基（P50;P65）共转染293T细胞进行免疫共沉淀实验。结果显示MMP3主要依赖于其羧基末端域与NFκB相互作用。进一步的报告基因检测实验结果显示：MMP3的羧基末端域可以更强地激活NFκB。本研究首次揭示了MMP3进入细胞核发挥抗病毒效应的全新功能，为MMP家族参与免疫调控提供新的证据，而且MMP3分子的表达水平有可能成为登革热疾病进程的诊断靶标，MMP3相关激动剂也将有可能应用到抗病毒感染的应用当中。
【作者】左向阳；
【导师】戴建锋；
【作者基本信息】苏州大学，免疫学，2014，硕士
【关键词】登革病毒；MMP3；NFκB；

【参考文献】
[1]刘靖姝.不同焦虑类型高校毕业生职业未决的比较及其与职业决策自我效能感的关系[D].西南大学,发展与教育心理学,2013,硕士.
[2]唐丽娟.社会文明广告的多模态话语分析[D].南京师范大学,英语语言文学,2012,硕士.
[3]蔡霞.我国上市银行内部控制信息披露的实证研究[D].南京财经大学,金融学,2013,硕士.
[4]夏国泰.QF型桥式称重传感器[J].冶金自动化,1982,02:31-33.
[5]刘燕,邹赛德,何建璋,周毅,练伟.论高等医药院校计算机相关课程设置重构[J].医学信息,2005,04:300-302.
[6]张振龙.胶和木聚糖对中华绒螯蟹和黄颡鱼生长、消化和肠道菌群的影响[D].苏州大学,水产养殖,2014,硕士.
[7]任秀珍.典型草原区绵羊抗冷应激饲草料的研究[D].内蒙古农业大学,草业科学,2004,硕士.
[8]谢庆条.hBMP-2基因修饰BMSCs细胞膜片的异体冻干骨输送盘构建及其成骨机制的研究[D].广西医科大学,口腔颌面外科学,2013,硕士.
[9]谢园园.“教育技术”微博圈知识扩散网络结构研究[D].华中师范大学,教育技术学,2013,硕士.
[10]周健.浙江省循环经济发展的财税支持研究[D].浙江大学,经济法学（专业学位）,2012,硕士.
[11]姜小莉马浩剑.常州石墨烯进入大规模产业化[N].常州日报,2014-11-13A01.
[12]崔龙彪.糖基化CD147调节心肌胶原交联度的作用及其机制研究[D].第四军医大学,航空、航天与航海医学,2014,硕士.
[13]彭泉.基于绩效三棱镜的企业价值创造评价指数研究[D].武汉理工大学,会计学,2012,硕士.
[14]王子健.基于耗散结构理论的施工项目成本管理绩效评价研究[D].北京建筑大学,项目管理（专业型学位）,2013,硕士.
[15]李惠敏.班级心理氛围、学习责任心与大专生学业倦怠的关系[D].山西师范大学,发展与教育心理学,2013,硕士.
[16]朱丽苹.三维矩形布局模型及布局遗传算法的研究[D].天津职业技术师范大学,机械工程,2013,硕士.
[17]刘荣凤.我国公益捐赠法律问题研究[D].贵州民族大学,经济法学,2012,硕士.
[18]周晓檬.针对蒙古国的汉语中级综合课堂教案探究[D].内蒙古师范大学,汉语国际教育（专业学位）,2013,硕士.
[19]王爽.Zr_(50)Cu_(50)非晶合金变形行为的分子动力学模拟[D].燕山大学,材料学,2013,硕士.
[20]张增明.TiO_2/ZnO枝状核壳结构光阳极的制备及在染料敏化太阳电池中的应用[D].兰州理工大学,材料学,2014,硕士.
[21]周俊.不同日粮模式对奶牛瘤胃内毒素释放和乳腺免疫活化状态的影响[D].西南大学,动物营养与饲料科学,2013,硕士.
[22]赵刚.印度加快成为军火大国的步伐[J].飞航导弹.2003(01)
[23]张腾.小学《牛津英语（上海版）》教材在沈阳市的适应性研究[D].沈阳师范大学,课程与教学论,2013,硕士.
[24]余长发.粤西大金山钨锡多金属矿成岩成矿地质特征[D].中国地质大学（北京）,矿物学、岩石学、矿床学,2013,硕士.
[25]吴磊.基于抗震性能的预应力混凝土框架结构弹塑性分析[D].安徽建筑大学,结构工程,2013,硕士.
[26]官佳佳,陈飞,吴伽勒,胡申江,牟芸.芪苈强心胶囊改善糖尿病心力衰竭大鼠心功能及血管内皮功能实验研究[J].浙江中西医结合杂志,2014,08:669-672.
[27]吴欢.增强大学生社会主义核心价值观培育实效性研究[D].西南大学,思想政治教育,2014,硕士.
[28]黄贤俊.重大件运输中驳船结构问题的计算、分析与研究[D].武汉理工大学,船舶与海洋工程,2003,硕士.
[29]孟礼荣,高猛,项阳,刘旭阳,刘景翠,石建军.石墨烯基电催化剂的合成与燃料电池性能研究[J].安徽理工大学学报(自然科学版),2015,02:37-42.
[30]王婧.青少年罪犯对威胁信息注意偏向的时程特点及习惯化倾向[D].西南大学,发展与教育心理学,2013,硕士.
[31]李宁.基于形态知觉在产品造型设计中的应用[D].清华大学,设计艺术学,2012,硕士.
[32]李华忠.共青团在高校校园文化建设中的作用研究[D].辽宁师范大学,思想政治教育,2012,硕士.
[33]向胜科.怀化市小城镇建设问题研究[D].湖南农业大学,农村与区域发展,2012,硕士.
[34]李玉珠.加味参芪地黄汤治疗早期糖尿病肾病的疗效观察[D].广州中医药大学,中医内科学（专业学位）,2013,硕士.
[35]唐静远,师奕兵,周龙甫,张伟.基于交叉熵方法和支持向量机的模拟电路故障诊断[J].控制与决策,2009,09:1416-1420.
[36]赵伟.缘物寄情与创作实践[D].山东工艺美术学院,美术,2014,硕士.
[37]杜苗林.薄膜流涎成形边料在线回收系统设计研究[D].南京理工大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[38]陈朴.乌司他丁对重症脓毒血症的疗效及作用机制的研究[D].浙江大学,内科学,2004,硕士.
[39]李飞鹏.基于信息及行为传播的社交网络拓扑模型[D].吉林大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[40]范文杰.冀东平原地区土壤肥力及其分异特性研究[D].北京林业大学,水土保持与荒漠化防治,2014,博士.
[41]吴治康.黄源深译《老人与海》特色研究[D].上海外国语大学,英语语言文学,2012,硕士.
[42]吴剑云.西峰黄土剖面地层CBR值分布规律研究[D].长安大学,交通运输工程（专业学位）,2014,硕士.
[43]吴祖宏.大学生手机社交媒体依赖的问卷编制及特点研究[D].西南大学,应用心理学,2014,硕士.
[44]石宝.玻璃纤维经编针织物复合材料能量吸收性能研究[D].河北科技大学,纺织工程,2012,硕士.
[45]徐桐.学生课堂违纪行为的现象、原因与矫正策略[D].首都师范大学,教育管理,2013,硕士.
[46]鲍文薇.平安城区空间尺度的控制与延续[D].西安建筑科技大学,城市规划与设计,2013,硕士.
[47]崔兆鹏.视觉几何约束在视频编码中的应用研究[D].西安电子科技大学,通信与信息系统,2012,硕士.
[48]邢德峰,任南琪.应用DGGE研究微生物群落时的常见问题分析[J].微生物学报,2006,02:331-335.
[49]夏雪岩.高粱抗高粱蚜遗传分析及SSR标记研究[D].河北农业大学,作物遗传育种,2004,硕士.
[50]王明杰.带换装次数限制的车间作业调度[D].山东大学,计算机软件与理论,2013,硕士.