雷帕霉素通过下调DNA和RNA聚合酶抑制前B急淋白血病细胞的生长

【摘要】目的：探究雷帕霉素(Rapamycin，Rap)对于前B淋巴细胞白血病（Pre-Bacutelymphoblasticleukemia，B-ALL）细胞生长的影响，并探讨其作用机制。方法：（1）雷帕霉素处理B-ALL细胞系697细胞,分别通过苔盼兰染色细胞计数、CCK-8试剂盒、CFSE荧光染色以及PI染色流式细胞仪分析（FlowCytometry,FCM），分析雷帕霉素对697细胞生长、细胞活性、增殖和细胞周期的影响。（2）用PI/Annexxin-Ⅴ双染法检测雷帕霉素处理后697细胞的凋亡水平，并构建697-GFP-LC3稳转细胞系，用免疫荧光（Immunofluorescence，IF）和Westernblotting检测Rap处理后的细胞自噬以及mTOR信号。（3）用细胞周期RT2ProfilerPCRArray检测Rap处理后细胞周期相关因子的变化。（4）用甲基绿-派洛宁染色流式法检测Rap处理后细胞内DNA和RNA的含量变化,并用荧光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR，Q-RT-PCR）和Westernblotting检测Rap处理后与DNA和RNA合成相关的聚合酶的变化。（5）用免疫荧光技术检测Rap处理后观察DNA和RNA聚合酶是否与自噬小体存在亚细胞共定位。结果：（1）100ng/ml,200ng/ml,500ng/ml雷帕霉素处理697细胞均能抑制697细胞生长，CCK-8结果显示Rap对697细胞的IC50为100ng/ml，PI染色结果显示雷帕霉素引起细胞周期阻滞在G0/G1期。（2）雷帕霉素激活697细胞自噬但不影响细胞凋亡。（3）细胞周期RT2ProfilerPCRArray结果显示，雷帕霉素处理697后细胞细胞周期正调控因子下调。（4）雷帕霉素处理后细胞内DNA和RNA水平降低，并且与DNA复制及RNA转录相关的DNA聚合酶δⅠ和RNA聚合酶Ⅱ在RNA和蛋白水平均下调。（5）雷帕霉素激活的细胞自噬参与DNA聚合酶δⅠ和RNA聚合酶Ⅱ的下调过程。结论：雷帕霉素能抑制前B急淋细胞系697的增殖并将细胞周期阻滞在G0/G1期，其对于697细胞的生长抑制可能是通过下调DNA聚合酶δⅠ和RNA聚合酶Ⅱ的表达，以及激活自噬促进聚合酶蛋白本身的降解实现的。
【作者】王志坚；
【导师】王建荣；
【作者基本信息】苏州大学，发育生物学，2014，硕士
【关键词】雷帕霉素；前B急淋白血病；细胞自噬；DNA和RNA聚合酶；

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