维生素D抗小鼠抑郁作用的初步研究

【摘要】目的：观察补充维生素D对抑郁症模型小鼠抑郁样表现是否具有治疗作用并探究其作用机制。方法：分为三个部分，一、维生素D对小鼠抑郁样表现治疗作用研究；二、维生素D对小鼠抑郁样表现治疗的机制研究；三、活性维生素D（1,25-dihydroxyvitaminD3,1,25(OH)2D3）对谷氨酸诱导的小鼠海马神经元凋亡抑制作用研究。（1）采用慢性不可预见性温和刺激应激动物模型（ChronicUnpredictableMildStress，CUMS）方法建立抑郁症小鼠模型，采用冰水游泳5min、45℃高温5min、夹尾1min、行为限制2h、禁食24h、禁水24h、潮湿垫料10h、鼠笼倾斜45°24h、昼夜颠倒24h、空瓶放置2h等10种刺激，将雄性ICR小鼠随机分为对照组与Stress组，Stress组每天随机不重复给以2-3种刺激，持续4周，结束后观察小鼠状态、悬尾实验（tailsuspensiontest,TST）与强迫游泳实验（forcedswimmingtest,FST）静止时间及小鼠体重和一般性状来判断小鼠是否出现抑郁样表现；对于Ahi1基因敲除（Ahi1knockout,Ahi1KO）鼠（详见附录一），直接检测其与野生型小鼠悬尾实验与强迫游泳实验静止时间来判断小鼠是否出现抑郁样表现。ELISA法检测小鼠海马匀浆中脑源性神经营养因子（brainderivedneurophicfactor，BDNF）表达量；（2）按照CUMS方法建立抑郁小鼠模型，模型组ICR小鼠分为：空白对照+Vehicle组、Stress+Vehicle组、Stress+维生素D3组、Stress+丙咪嗪（20mg/kg/d）组，将Ahi1KO鼠分为两组：Vehicle组与维生素D3组，给药治疗4周后检测各组小鼠行为学；眼球取血测量血清维生素D(25-hydroxyvitaminD3,25(OH)D3)水平，取脑后分离海马与脑干，WesternBlot检测海马中BDNF的表达，高效液相色谱法检测脑组织中神经递质五羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)与多巴胺（Dopamine,DA）的含量，RT-PCR检测海马中CYP24A1、CYP27B1、VDR、BDNFmRNA水平；（3）采用谷氨酸诱导神经细胞凋亡模型，细胞分为对照组、1,25(OH)2D3组、谷氨酸组与谷氨酸/1,25(OH)2D3联合作用组。CCK-8测定细胞存活率，流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡和细胞活性氧（reactiveoxidativespecies，ROS）水平。结果：（1）4周建模后，Stress组小鼠悬尾实验与强迫游泳实验的静止时间显著长于对照组，体重增长明显小于对照组（P<0.05）；Ahi1KO鼠在悬尾实验与强迫游泳实验中的静止时间显著长于野生型小鼠，海马组织中BDNF表达量明显低于野生型小鼠（P<0.05）；给予维生素D3与抗抑郁药治疗后，CUMS模型小鼠与Ahi1KO鼠悬尾实验与强迫游泳实验的静止时间明显减少（P<0.05）,抑郁样表现得到改善，提示维生素D3对小鼠抑郁样表现具有治疗作用；（2）维生素D3治疗后，小鼠海马组织中BDNF表达量升高，5-HT与DA表达量降低，RT-PCR结果显示相对于野生型小鼠，Ahi1KO鼠CYP27B1、VDRmRNA水平升高，CYP24A1、BDNFmRNA水平降低，维生素D3治疗后CYP27B1、VDR、BDNFmRNA水平降低，CYP24A1mRNA表达水平升高，差异均有统计学意义，提示维生素D3可能通过调控VitaminD-VDR通路来提高BDNF表达，对抑郁症起到治疗作用；（3）1,25(OH)2D3预处理HT-22细胞可以有效提高谷氨酸作用后的细胞存活率。细胞周期显示1,25(OH)2D3可以明显减小谷氨酸作用后HT-22细胞的G0/G1期细胞比例，增加S期与G2/M期细胞比例。相对于谷氨酸组，谷氨酸/1,25(OH)2D3联合作用组细胞晚期凋亡率均有降低，随1,25(OH)2D3浓度增加凋亡率逐步降低。相对于对照组，各处理组均可以使细胞ROS释放增多（P<0.05），而相对于单纯使用谷氨酸组，谷氨酸/1,25(OH)2D3联合应用组细胞ROS水平也有明显升高，但随着1,25(OH)2D3浓度增加细胞中ROS水平逐步降低（P<0.05）。结论：1.维生素D干预可以改善CUMS抑郁模型鼠和Ahi1基因敲除鼠抑郁样表现；2.维生素D可以抑制谷氨酸诱导的海马神经元凋亡；3.维生素D对抑郁症治疗作用的实现可能通过激活VitaminD-VDR信号通路提高脑组织中脑源性神经营养因子BDNF表达水平和抑制海马神经元凋亡来共同发挥作用，这提示维生素D可能成为抑郁症的廉价预防措施和辅助治疗措施。
【作者】贺金奖；
【导师】张增利；徐兴顺；
【作者基本信息】苏州大学，卫生毒理学，2014，硕士
【关键词】抑郁症；维生素D；脑源性神经营养因子；神经凋亡；

【参考文献】
[1]郑津洋,鲁顺利,马津津,施建峰.占压下埋地聚乙烯管力学响应的数值模拟[J].中国塑料,2014,01:60-64.
[2]王荣林.富兴公司氨系统计奖施新法[J].化工管理.1996(04)
[3]郑大可.新型电液负载模拟器的设计及其关键技术的研究[D].哈尔滨工业大学,机械电子工程,2013,硕士.
[4]于亮.大型数控龙门铣床主轴柔性传动系统优化设计方法研究[D].沈阳工业大学,流体机械及工程,2013,硕士.
[5]薛安成,罗麟,景琦,王俊豪,黄少锋,毕天姝.继电保护装置的多因素时变Markov模型及其检修策略分析[J].电力系统自动化,2015,07:124-129.
[6]浪腾花.如何利用对外汉语报刊课教学提升学生的汉语水平[D].内蒙古师范大学,汉语国际教育（专业学位）,2012,硕士.
[7]薛超.社会学观照下的梁启超翻译研究[D].宁波大学,英语语言文学,2013,硕士.
[8]闫炜,崔杜武,付长龙.基于幂集的关联规则挖掘算法研究[J].计算机工程与应用,2004,01:192-193+200.
[9]沈彬.流通环节食品安全法律监管研究[D].南京农业大学,经济法学,2012,硕士.
[10]简鑫.富康医药集团公司发展战略研究[D].兰州大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[11]王凤娇.旅游管理信息系统设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2012,硕士.
[12]刘立波.数据仓库技术的研究与应用[J].计算机工程与应用,2002,15:171-172+234.
[13]章娇.城镇化进程中失地农民就业影响因素研究[D].西南大学,区域经济学,2014,硕士.
[14]杨伟.论中国传统法律文化中的“清官情结”对现代中国法治理念的影响[D].兰州大学,法律,2012,硕士.
[15]刘菲菲.员工组织公平感、工作满意度与关系绩效实证研究[D].内蒙古大学,企业管理,2014,硕士.
[16]王璞,刘惠玲,王冰,程修文,陈清华,张健.青霉素菌渣资源化为饲料原料的营养价值研究[J].环境保护科学,2015,01:75-79.
[17]李明.Neuropilin-1、VEGF在胃癌组织中的表达及与微血管生成的关系[D].天津医科大学,肿瘤学（专业学位）,2014,博士.
[18]朝克满达.社会学视野下的牧民合作社社会作用探析[D].内蒙古师范大学,社会学,2012,硕士.
[19]陈燕杰.marA基因对鸭大肠杆菌多重耐药的调控作用[D].河南农业大学,基础兽医学,2012,硕士.
[20]傅士光.基于主题的搜索引擎的研究与实现[D].北京交通大学,2007.
[21]陈扬.政治关联、政府干预与权益资本成本[D].杭州电子科技大学,会计学,2014,硕士.
[22]贾希强.嵌入式数字电视中间件技术研究与实现[D].西北工业大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[23]陈肖然.环境行政不作为的法律研究[D].首都经济贸易大学,法律（专业学位）,2013,硕士.
[24]周辉.境内公司海外私募法律问题研究[D].华东政法学院,国际法学,2004,硕士.
[25]高锐.我国保险业开展住房反向抵押贷款的可行性及对策研究[D].吉林大学,金融,2013,硕士.
[26]李志.电解锰废渣再生陶瓷砖的试验研究[D].湖南科技大学,土木工程,2013,硕士.
[27]云丹.壬基酚及抗雌激素药物对斑马鱼（Danio rerio）精巢发育的联合效应[D].华东师范大学,动物学,2013,硕士.
[28]姜传菊.试论Web中的数据挖掘[J].现代图书情报技术,2003,S1:162-164.
[29]刘岩,张洪波,李辉.1000m~3球型天然气贮罐现场组焊监检方法[J].一重技术.2003(03)
[30]李赫亮.AlMgSiCu合金轧制工艺及性能研究[D].沈阳工业大学,材料加工工程,2014,博士.
[31]孙伟.输尿管软镜术中间接控制肾盂压力的实验研究[D].宁波大学,外科学,2014,硕士.
[32]袁健.大佛寺煤矿应急救援预案的编制与管理[D].西安科技大学,工商管理,2013,硕士.
[33]宋磊.我国碳交易市场法律制度构建[D].云南财经大学,经济法学,2014,硕士.
[34]文启.基层公务员职业倦怠影响因素及干预研究[D].重庆大学,行政管理,2014,硕士.
[35]文竹.沪市风险结构及其特征分析[D].北方工业大学,数量经济学,2014,硕士.
[36]梁鑫.适用于空间网格结构缺陷诊断问题的传感器优化布置研究[D].北京工业大学,结构工程,2004,硕士.
[37]白鹤.太阳能风帆驱动的机器人动力学建模与控制[D].沈阳理工大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[38]米海容.基于UML状态图的测试用例自动生成方法研究[D].西安电子科技大学,计算机软件与理论,2011,硕士.
[39]李龙.同杆双回输电线路保护原理与仿真研究[D].华中科技大学,电力系统及其自动化,2013,硕士.
[40]王正元,张国丛,田青,惠明.DA201-C型大孔树脂吸附黄酒多肽的研究[J].河南工业大学学报(自然科学版),2014,05:35-39.
[41]林飞腾.国际工程承包风险管理的研究[D].西安建筑科技大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[42]彭琼.UHVDC在不同运行方式下对换流变压器的影响研究[D].广东工业大学,电气工程（专业学位）,2014,硕士.
[43]王荣华.国际投资中的间接征收问题研究[D].中国政法大学,比较法学,2013,硕士.
[44]郭毅.相对论重离子碰撞实验中双电子的产生[D].中国科学技术大学,粒子物理与原子核物理,2014,博士.
[45]周书行.G-度量空间中几类映象的公共不动点问题研究[D].杭州师范大学,应用数学,2013,硕士.
[46]王春艳.螺杆泵抽油井工况分析[D].大庆石油学院,油气田开发工程,2004,硕士.
[47]陆达,邵象华,许志宏,杜挺.采用九十年代新技术加速发展我国钢铁工业——建议国家在“八五”期间立项进行“以煤代焦熔融还原炼铁新工艺开发”[J].冶金管理.1990(06)
[48]白翠冰.苯并咪唑及缩氨基疏脲类化合物的合成及识别性能研究[D].西北师范大学,有机化学,2013,硕士.
[49]张豆豆.非晶硫的相变动力学行为初步探索[D].西南交通大学,凝聚态物理,2013,硕士.
[50]刘晔.生物组织表面热像的模拟与热源信息反演[D].南京理工大学,光学工程,2013,硕士.