炎症信号对肾小管上皮细胞PDZK1及其耦联蛋白的表达调控

炎症信号对肾小管上皮细胞PDZK1及其耦联蛋白的表达调控

作者:师大云端图书馆 时间:2018-01-07 分类:参考文献 喜欢:2105
师大云端图书馆

【摘要】目的本研究旨在观察炎症信号对人肾小管上皮细胞(HK-2)PDZK1及其耦联蛋白基因转录水平影响,对PDZK1和ABCG2蛋白表达水平,对PDZK1蛋白亚细胞定位的影响,及探求调控的信号通路。方法炎症信号IL-1p.IL-18.IL-37.IL-10.TGF-β及IL-1p联合IL-18或IL-37及IL-18联合IL-37刺激HK-2细胞,实时荧光定量PCR技术(Real-timePCR)检测PDZKl.ABCG2.SLC22A12(URAT1)、SLC22A13、SLC5A12、SLC22A11.SLC17A1和SLC17A3mRNA的表达水平,WesternBlot检测ABCG2、PDZK1蛋白表达水平,用细胞免疫荧光检测PDZK1表达情况及其亚细胞定位。加入抑制剂PDTC(NF-KB)或者Wo0rtmanin(P13K)后再加入炎症信号刺激,WesternBlot检测HK-2细胞PDZK1和ABCG2蛋白表达量的变化。结果1.IL-1β抑制SLC17A1、SLC17A3、SLC22A13.SLC22A12、PDZK1、SLC22A11mRNA表达(P<0.05),IL-1β刺激引起SLC5A12和ABCG2mRNA表达降低,但是差异没有统计学意义。IL-1p及IL-18或IL-37联合刺激,SLC17A1、SLC17A3、SLC22A13、SLC22A12、PDZK1、SLC22AllmRNA表达仍降低,与IL-1p单独刺激没有统计学差异。TGF-p刺激引起SLC17A1、SLC17A3、PDZKlmRNA表达降低(P<0.05),它同样引起SLC22A11、ABCG2mIRNA表达下调,但差异没有统计学意义。IL-18、IL-37、IL-10也对部分尿酸通道基因的mRNA水平有调节作用,但调节的分子数目和强度远不及IL-1β和TGF-p.2.IL-1β、TGF-β刺激引起PDZK1蛋白表达明显下降,IL-18、IL-10、IL-37则对PDZKl蛋白表达没有明显影响,IL-1和IL-18、IL-37联合刺激也不会改变IL-1对PDZK1蛋白表达的抑制作用。WesternBlot发现IL-1β促进ABCG2蛋白表达,并且IL-1p同IL-37或IL-18联合作用也促进其表达,IL-37.TGF-β、IL-18、IL-10作用不明显。3.PDTC(NF-kB抑制剂)引起IL-1β、IL-1β+IL-18、IL-1β+IL-37刺激组PDZK1表达明显上调,而IL-37、IL-10刺激组PDZK1表达显著下调,而IL-18、IL-18+IL-37刺激组和对照组相比轻微下调;TGF-p刺激组变化不明显。Wortmannin(PI3K/Akt抑制剂)对炎症信号刺激PDZK1蛋白表达没有明显作用。PDTC使IL-1β+IL-18、IL-1β+IL-37、IL-18+IL-37刺激组ABCG2表达下调,而IL-18刺激组表达上调,对IL-1β、IL-37、IL-10和TGF-p刺激组没变化;Wortmannin使IL-1β+IL-18、IL-1β+IL-37、IL-18+IL-37刺激组ABCG2表达上调,IL-18刺激组表达下调,对IL-1β、IL-37、IL-10和TGF-β刺激组没变化。结论IL-1β、TGF-β在多种尿酸通道基因mRNA和蛋白表达中发挥重要调节作用,IL-1p同IL-18或IL-37联合作用同IL-1p单独作用结果一致,IL-18、IL-37、IL-10对少数尿酸通道基因mRNA有调节作用。炎症信号对PDZK1蛋白水平的表达的影响同nRNA水平变化一致。但是,IL-1p对ABCG2的mRNA和蛋白表达的作用相反。炎症信号通过NF-kB通路调控PDZK1蛋白表达,其中主要是IL-1p通过NF-κB通路抑制PDZK1蛋白的表达,抑制该通路使其表达明显上调,而PI3K/Akt通路同炎症信号对PDZK1蛋白表达调控无关。而NF-kB和PI3K/Akt通路同ABCG2蛋白表达相关,其中前者促进其表达,后者抑制其表达。
【作者】沈径仿;
【导师】吴华香;
【作者基本信息】浙江大学,内科学,2014,硕士
【关键词】痛风;高尿酸血症;PDZK1;三磷酸腺苷转运体结合盒G2;

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