曲妥珠单抗联合NK细胞对乳腺癌细胞体外杀伤作用的实验研究

【摘要】目的：探讨NK细胞联合曲妥珠单抗对乳腺癌细胞体外杀伤作用是否存在协同效应，并对其机制进行初步探索。同时将体外培养扩增的原代NK细胞与NK-92MI细胞系的杀伤活性进行比较。方法：选取三种HER2表达情况不同的乳腺癌细胞系，即HER2（+++）乳腺癌细胞系BT-474，HER2（++）乳腺癌细胞系MDA-MB-453和HER2（—）乳腺癌细胞系MDA-MB-231，每种细胞系分别设置对照组、曲妥珠单抗组、NK细胞组、联合组；其中NK细胞组、联合组分别体应用体外培养原代NK细胞、NK-92MI细胞系进行实验。MTT法检测曲妥珠单抗对乳腺癌细胞、原代NK细胞和NK-92MI细胞增殖的影响；钙黄绿素释放法检测原代NK细胞与NK-92MI细胞系杀伤活性的差异，并验证曲妥珠单抗对NK细胞杀伤活性的协同作用；ELISA法检测曲妥珠单抗对原代NK细胞和NK-92MI细胞IFN-γ和TNF-α分泌的影响；流式细胞术检测曲妥珠单抗、NK细胞单独或联合作用后乳腺癌细胞表面NKG2D配体（ULBP1、ULBP2、MICA）表达情况的变化。结果：1、曲妥珠单抗对HER2阳性乳腺癌细胞的增殖存在明显抑制作用，呈剂量、时间依赖性；与HER2（++）乳腺癌细胞相比，曲妥珠单抗对HER2（+++）乳腺癌细胞的增殖抑制作用更强；对HER2（—）乳腺癌细胞无抑制作用。2、体外培养的原代NK细胞和NK-92MI细胞对三种乳腺癌细胞均存在体外杀伤作用，其中以体外培养的原代NK细胞杀伤活性较强。3、曲妥珠单抗与原代NK细胞或NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤具有协同作用；与HER2（++）乳腺癌细胞相比，对HER2（+++）乳腺癌细胞的杀伤协同效应更明显。4、曲妥珠单抗增加原代NK细胞和NK-92MI细胞IFN-γ和TNF-α的分泌；同时曲妥珠单抗、NK细胞单独或联合作用后，HER2阳性乳腺癌细胞表面NKG2D配体（ULBP1，ULBP2，MICA）表达存在不同程度上调，其中以联合作用后上调最显著。结论：曲妥珠单抗可抑制HER2阳性乳腺癌细胞增殖，与乳腺癌细胞表面HER2表达水平密切相关；曲妥珠单抗与NK细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤作用存在协同效应，可能与曲妥珠单抗增加NK细胞IFN-γ、TNF-α分泌以及乳腺癌细胞表面NKG2D配体（ULBP1，ULBP2，MICA）表达上调有关。另外，与NK-92MI细胞系相比，体外培养的原代NK细胞杀伤活性更强。因此，对于HER2阳性乳腺癌患者，联合应用曲妥珠单抗和自体NK细胞过继治疗可能成为一项有效的治疗模式，NKG2D配体有望成为治疗潜在靶点。
【作者】朱歌；
【导师】宋艳秋；陈京涛；
【作者基本信息】吉林大学，肿瘤学，2014，硕士
【关键词】乳腺癌；曲妥珠单抗；NK细胞；免疫治疗；

【参考文献】
[1]李允.SOCS-3基因沉默对哮喘小鼠气道炎症的影响[D].吉林大学,病理学与病理生理学,2013,硕士.
[2]周臣.基于三阶段级联DEA方法的港口效率测度研究[D].大连海事大学,物流工程,2013,硕士.
[3]张译奇.电梯轨距偏差测量仪的研制[D].苏州大学,控制工程（专业学位）,2014,硕士.
[4]郭军华.数据挖掘中聚类分析的研究[D].武汉理工大学,系统工程,2003,硕士.
[5]熊佐松.原油深度脱盐技术的优化研究[D].华东理工大学,化学工程,2014,硕士.
[6]王景涛.潍坊市供销合作社社有企业存在问题及对策研究[D].西北农林科技大学,农村与区域发展,2012,硕士.
[7]郭琦,张伯明,赵晋泉,孙宏斌,吴文传.综合动态安全与静态电压稳定的协调预防控制[J].电力系统自动化,2006,23:1-6.
[8]刘芳.数字3D立体电影的奇观性研究[D].南京师范大学,电影学,2012,硕士.
[9]计控处,张志红.721型分光光度计常见电路故障分析[J].冶金自动化,2003,01:70-71.
[10]苏向英.二维过渡金属硫属化合物电子结构的第一性原理研究[D].西北大学,凝聚态物理,2014,博士.
[11]张超,王幸,宋西亮,宋开慧,钱萍,尹洪宗.水合肼在高岭石层间插层行为的量子化学研究[J].化学学报,2013,11:1553-1563.
[12]胡芳芳.政府主导下的农村社区融合发展研究[D].华东理工大学,公共管理（专业学位）,2013,硕士.
[13]李旦.双四元数模型矢量天线阵列信号的方法与应用[D].复旦大学,电路与系统,2013,博士.
[14]陈国营.鸡粪抑氨菌的分离、鉴定及其制剂的研究[D].安徽农业大学,微生物学,2012,硕士.
[15]燕嬿,刘堰兵.高校教师分级聘任考核评价研究[J].商,2014,09:126.
[16]陈宝春.含拓扑缺陷石墨带的电子性质[D].东北师范大学,理论物理,2012,硕士.
[17]田灵江.适用、舒适、经济——住宅需求的三大特征[J].城市开发.2004(06)
[18]黎辉.“省直管县”财政体制改革的实践与反思[D].华东理工大学,公共管理（专业学位）,2013,硕士.
[19]冯云桑,刘少光,陈成武,吴进明,徐玉松.Co-Ce氧化物对MnO_x/TiO_2低温SCR脱硝催化剂的影响[J].材料热处理学报,2014,06:26-33.
[20]庄园.SD公司信息化战略规划研究[D].电子科技大学,2003.
[21]杨光.论刑事诉讼中的人权保障[D].山东大学,法律（专业学位）,2012,硕士.
[22]詹和福.论民事诉讼中的证人作证制度[D].苏州大学,法律,2003,硕士.
[23]刘新梅.自卸汽车举升油缸用密封件的研制[D].华南理工大学,车辆工程,2012,硕士.
[24]卢欢.母体肢体缺血预处理对宫内窘迫胎鼠复氧后海马神经元线粒体结构和功能的影响[D].福建医科大学,麻醉学,2014,硕士.
[25]张峰.DAAE公司班组精益生产管理研究[D].吉林大学,工业工程,2014,硕士.
[26]高春华,纪金豹,闫维明,李娜.地震模拟振动台技术在中国的发展[J].土木工程学报,2014,08:9-19.
[27]董霞.网络社会中人的发展问题研究[D].河北师范大学,马克思主义基本原理,2012,硕士.
[28]刘章月,秦明宽,蔡根庆,刘红旭,耿英英.新疆巴什布拉克地区有机地球化学特征及其对铀成矿的控制[J].地学前缘.
[29]郑泳凌.计算智能在控制、优化和决策中的应用研究[D].浙江大学,系统工程,2004,硕士.
[30]许婧祎.我国制造业企业外汇风险管理的实证研究[D].东北师范大学,企业管理,2012,硕士.
[31]刘畅.长链非编码RNA在急性放射性肺损伤中的作用及机制的初步研究[D].苏州大学,放射医学,2014,硕士.
[32]彭文娟.从制造到服务和解决方案[D].厦门大学,工商管理,2014,硕士.
[33]平易.多校区大学管理的困境与对策[J].基建管理优化,2015,01:15-18.
[34]李岩松.我国商业银行绿色信贷风险控制问题研究[D].吉林大学,金融学,2013,硕士.
[35]郑学梅.烷基肼化合物的合成方法研究[D].山东师范大学,有机化学,2012,硕士.
[36]李剑峰,张顺.实施“国家农机购置补贴项目”工作初探[J].中国农机化.2008(01)
[37]陈福星.微型机系统在环形炉上的应用[J].冶金自动化,1981,04:6-10.
[38]张浩,许谨,曹现雷.基于BP神经网络优化制备Cu-Ce/TiO2及其光催化活性研究[J].环境科学学报.
[39]邹芸芸.丁果仙晋剧须生艺术研究[D].天津音乐学院,音乐学,2014,硕士.
[40]黄致尧.数字近景立体摄影系统高精度标定方法研究[D].南京师范大学,地图学与地理信息系统,2012,硕士.
[41]郑月楠.雪佛兰科鲁兹冷却风扇电路系统故障分析[J].公路与汽运,2014,06:28-30.
[42]邰学礼,谭旸,颜兵兵.面向21世纪的几种流行数据库[J].佳木斯大学学报(自然科学版),2004,02:183-186.
[43]赵鹏.基于Lucene的税务案件辅助处理系统的设计与实现[D].西安电子科技大学,计算机技术,2010,硕士.
[44]林翊,刘倩.福建省产业结构调整对生态环境影响的实证分析[J].福建师范大学学报(哲学社会科学版),2014,01:26-32.
[45]汪昱.杭州中萃食品有限公司基于Internet/Intranet的供应链管理信息系统[D].西安理工大学,工商管理,2004,硕士.
[46]宗春蕾.单次溶样分离地质样品中Pb-Sr-Nd-Hf同位素方法的可行性研究及其地质应用[D].西北大学,地球化学,2013,硕士.
[47]李芸芸.王秀霞教授治疗肾虚血瘀型多囊卵巢综合征引起月经失调的经验总结[D].黑龙江中医药大学,中医妇科学（专业学位）,2013,硕士.
[48]王博.金属硫化物微/纳米材料的水热合成[D].东北师范大学,物理化学,2012,硕士.
[49]朱荣华.高桩墩式码头结构计算与优化系统的开发[D].大连理工大学,结构工程,2003,硕士.
[50]周波.用代码缓存复用技术提升Android即时编译器效率[D].复旦大学,计算机软件与理论,2012,硕士.