大火草根及其内生菌产物化学成分和生物活性研究

【摘要】大火草(Anemonetomentosa(Maxim.)Pei)别名野棉花、土白头翁、大头翁(陕西),是毛莨科银莲花属多年生草本植物。大火草的药用部位为根和茎,常用于治疗各种疮疖痈肿、疟疾、咳嗽、跌打损伤等症,还对某些昆虫具有杀伤作用。本论文以药用植物大火草为实验材料,主要以大火草的根部粉末和分别从大火草根、茎两个部位分离出来的内生菌为切入点,对大火草根进行系统的化学成分分离,再结合大火草根和茎部位内生菌的生物活性,以期为大火草的进一步深入研究及其作为新药用资源提供坚实的理论基石出。1.用95%乙醇对大火草根粉末进行提取,提取物分散于水,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取。分别对各部位利用硅胶柱层析、大孔吸附树脂和葡聚糖凝胶SephadexLH-20等手段进行化学成分分离,共得到5个单体化合物,采用多种现代波谱分析手段如IR、UV、1HNMR、13CNMR、DEPT等,并结合化合物的物理、化学性质,鉴定结果分别为p-谷甾醇(1)、齐墩果酸(2)、23-hydroxy-3-oxo-olean-12-en-28-oicacid(3)、胡萝卜苷(4)和2a,3a,23-Tri-hydroxy-olean-12-en-28-oicacidO-β-D-glucopyranosylester(5)且化合物23-hydroxy-3-oxo-olean-12-en-28-oicacid和2a,3a,23-Tri-hydroxy-olean-12-en-28-oicacidO-β-D-glucopyranosylester首次从该植物中分离得到。此外,对石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位和系统分离得到的5个单体化合物做抑菌和抗氧化活性研究,结果显示,大火草根乙酸乙酯部位有较好的抗氧化活性。2.从大火草根、茎中分离得到23株内生菌,其中根10株,茎13株。对分离得到的部分内生菌做显微形态观察,结合现代分子生物学技术,将内生菌归属。并建系统发育树,确定各内生菌种属之间的亲缘关系。结果表明,大火草根-4是链球菌属(Streptococcus);根-3、根-5和根-8是镰刀菌属(Fusarium);根-9、根-10、茎-5和茎-12是链格孢属(Alternaria);茎-3属于Chaetosphaeronema科；茎-4和茎-9是壳针孢属。大火草内生菌主要为镰刀菌属、链格孢属和壳针孢属。3.分别采用滤纸片法,DPPH自由基清除法、羟自由基清除法和总还原力法对大火草内生菌发酵产物做体外抑菌活性、抗氧化活性研究。结果显示,大火草内生菌发酵产物对6种指示菌具有较好的抑制作用,尤其是菌株根-1、根-7和根-8发酵产物的抑菌活性比较显著。其中根-8的乙酸乙酯部位和正丁醇部位对6种指示菌均有很强的抑制活性,抑菌圈均在20mm以上。此外,从根中分离得到的内生菌对6种指示菌都有显著的抑制作用,尤其是乙酸乙酯部位。从茎中分离得到的内生菌,除茎-7和茎-10的乙酸乙酯部位、茎-11的菌丝体提取物表现出中度抑菌活性外,其它抑菌活性均不明显。此外,对抑菌圈直径≥20mm的内生菌发酵产物做最小抑菌浓度测定。结果显示,根-1的菌丝体提取物对4种指示菌的最小抑菌浓度均为0.156mg/mL,对另外两种指示菌的最小抑菌浓度为0.313mg/mL。根-8的乙酸乙酯部位和菌丝体提取物对6种供试菌的最小抑菌浓度均为0.156mg/mL。抗氧化活性的研究表明,大火草内生菌发酵产物的抗氧化活性不明显。
【作者】龙静；
【导师】杨林；
【作者基本信息】兰州理工大学，微生物与生化药学，2014，硕士
【关键词】大火草；内生菌；化学成分；抑菌活性；抗氧化；

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