朱砂叶螨羧酸酯酶基因TCE2原核表达研究

【摘要】朱砂叶螨(Tetranychuscinnabarinus)是一种重要的农业害螨,在我国分布广泛,严重危害多种作物。目前化学药剂喷杀仍然是防治朱砂叶螨的主要手段,由于该螨具有世代周期短,繁殖力强,近亲交配率高的特点,随着农药的大量和不合理使用,使得朱砂叶螨的抗药性发展十分迅速。酯酶(EC3.1.1.1)是一种能够催化水解羧基类脂的水解酶,在昆虫(螨)体内可分解外源或内源的有毒有害物质,或通过与这些物质相结合使其无法作用于标靶,是害虫(螨)产生抗性的重要因素之一。本研究拟在前人已经克隆获得朱砂叶螨酯酶基因TCE2并发现其与抗药性密切相关的基础上,体外原核表达TCE2基因、获得目的蛋白并研究其对杀螨剂-阿维菌素的直接分解或结合效果,为酯酶基因TCE2介导朱砂叶螨抗药性提供直接证据。主要研究结果如下：1、构建了TCE2的重组原核表达载体(pColdⅡ-TCE2、pET-28a-TCE2、pET-28a-TCE2q和pColdⅡ-TCE2q)并诱导表达：其中pColdⅡ-TCE2无目的蛋白表达,pET-28a-TCE2和pET-28a-TCE2q可检测到蛋白包涵体,pColdⅡ-TCE2q检测到可溶性目的蛋白。2、可溶性重组目的蛋白经纯化后,以其特异底物α-乙酸萘酯(α-NA)进行活性测定,获得酶活性测定最适反应条件为温度30℃,pH值7.4；最适反应条件下测得重组蛋白比活力为483.3±71.8nmol/mgpro.min-1,Km为30.5.±5.9nM,Vmax为448.2±75.2nmol/mgpro.min-1.3、HPLC检测重组蛋白对200mg/L阿维菌素原药的作用,结果发现随着重组蛋白酶量的增加,相同时间处理的阿维菌素减少的量呈上升趋势；相同酶量不同处理时间阿维菌素减少的量并没有显著性差异。
【作者】王祥尊；
【导师】何林；
【作者基本信息】西南大学，农药学，2014，硕士
【关键词】朱砂叶螨；抗药性；酯酶基因TCE2；原核表达；阿维菌素；

【参考文献】
[1]陈珂珂.中国特色社会主义宪政的思考与展望[D].中共四川省委党校,科学社会主义与国际共产主义运动,2013,硕士.
[2]黄杰勋,周冰冰,李非里,盛光遥.老化对黑碳中吸附态苯酚的脱附及微生物降解的影响[J].环境科学学报,2014,10:2469-2476.
[3]刘明.基于模糊逻辑与人工情感的智能控制策略研究[D].浙江大学,控制理论与控制工程,2004,硕士.
[4]蔡大维,刘文江.增益自适应Smith预估补偿控制策略[J].冶金自动化,1988,05:41-44.
[5]何鹤立.网络化协同设计技术研究与系统开发[D].武汉理工大学,机械设计及理论,2004,硕士.
[6]宋虎.中国—“陆上东盟”复合型合作机制建构研究[D].苏州大学,国际关系,2014,硕士.
[7]CharlesBenjaminLuhana.Electrocatalytic Properties of Metal Nanoparticles Supported on Carbon Nanostructure Materials[D].东北师范大学,AnalyticalChemistry,2012,硕士.
[8]毛慧君.英汉经济语篇中的概念隐喻[D].南京财经大学,英语语言文学,2012,硕士.
[9]赵伟.北京承接国际生产性服务业外包的战略研究[D].北京交通大学,2008.
[10]徐坤.碳及碳氮共掺杂二氧化钛纳米管的制备与电化学性能研究[D].昆明理工大学,2014.
[11]徐婷.缺陷型石墨烯纳米条带自旋极化输运特性的理论研究[D].中国科学技术大学,2014.
[12]陈维强,高文.MPEG-2视频编码的运动估计与实现[J].自动化学报,1998,05:116-120.
[13]苏文莉.雪莲果复合乳饮料的研制[D].南京农业大学,农业推广,2012,硕士.
[14]高彦伟.阶对有限群的刻画[D].西南大学,基础数学,2013,硕士.
[15]王胜辉.变压器局部放电在线监测高速数据采集系统的研究[D].华北电力大学（河北）,高电压与绝缘技术,2004,硕士.
[16]赵雯君,支希哲.文化视野下中美高校社会捐赠的差异比较[J].生产力研究,2014,07:155-157.
[17]袁赣,张巍,蔡庆生.具有非一致性数据预处理的粗糙集特征选择算法[J].计算机科学,2004,10:200-202.
[18]祝炜凯.TD-LTE网络室内部署技术的研究[D].北京交通大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[19]徐敏.亚燃冲压发动机串级控制系统研究[D].哈尔滨工业大学,动力工程,2014,硕士.
[20]冯晓鸣.论知识经济下我国传统私营中小企业的应对策略[D].华北电力大学（北京）,2003.
[21]李敏.介微孔材料负载钴及其在F-T合成中的应用研究[D].中国矿业大学,化学工程与技术,2014,硕士.
[22]张晓静.我国乡镇领导干部公开选拔的实践研究[D].郑州大学,公共管理（专业学位）,2013,硕士.
[23]王涛.NCN钳形铑(Ⅲ)以及CNN钳形钯(Ⅱ)和钌(Ⅱ)化合物物合成与催化性能研究[D].郑州大学,有机化学,2014,博士.
[24]梁刚.基于免疫机制的入侵检测系统[D].电子科技大学,2004.
[25]李斌.网络化多功能曲轴动平衡测试系统研制[D].沈阳理工大学,机械电子工程,2012,硕士.
[26]王田苗,王君臣,杨艳,胡磊,孙磊.基于Harris角点的内窥镜图像变形全自动校正算法[J].自动化学报,2011,11:1360-1367.
[27]艾小刚.价值投资理论在A股估值中的有效性研究[D].兰州大学,金融学,2014,硕士.
[28]殷实.社会工作视角下机构养老服务专业化问题研究[D].吉林大学,社会工作,2014,硕士.
[29]宁继峰.10位100MSPS CMOS折叠内插式A/D转换器设计[D].西安电子科技大学,微电子学与固体电子学,2012,硕士.
[30]王星玮.细胞自噬蛋白CUP-5与EPG-5在细胞自噬过程与细胞内吞过程中的作用[D].北京协和医学院,生物化学与分子生物学,2014,博士.
[31]陈丽霞,吴耀宏.基于信息技术的公共危机管理流程的构建[J].中共四川省委省级机关党校学报,2004,03:48-50.
[32]董西国,杨静.基于数据挖掘技术的抽油机泵参调整DSS决策支持系统[J].应用科技,2001,12:33-35.
[33]钱可.结构性减税背景下的绿色税收制度研究[D].华中师范大学,公共管理,2013,硕士.
[34]周旋.泉林纸业秸秆供应物流中心选址规划[D].南京农业大学,物流工程,2013,硕士.
[35]任晶波.FT脂质立方液晶的构建和固化及复溶重组的生物有效性的研究[D].广东药学院,药剂学,2012,硕士.
[36]贾翠娟,王丽娟,杜璋璋.基于石墨烯/壳聚糖/碳纳米管复合膜的新型电流型甲胎蛋白传感器[J].化学通报,2012,11:1048-1051.
[37]欧阳耿琛.移动梦网业务质量分析方法研究[D].华侨大学,2005.
[38]尹德国.共情对惩罚公正评价的影响[D].湖南师范大学,应用心理（专业学位）,2014,硕士.
[39]梁永峰.基于VAADIN与OSGI的高端酒店预订与点餐服务平台[D].山东大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[40]陈晓燕.添加剂对钛酸铝陶瓷性能影响的研究[D].东北大学,有色金属冶金,2010,硕士.
[41]吴建均,刘超.基于数据仓库的铁路客运客户价值分析模型的构建[J].交通科技与经济,2005,02:64-66.
[42]郑维锋.内蒙古中学生积极心理品质发展研究[D].内蒙古师范大学,心理健康教育（专业学位）,2012,硕士.
[43]郭晓波.论独立学院的学生党建工作[D].河北师范大学,马克思主义基本原理,2012,硕士.
[44]赵向鹏.北京市业余体校女子篮球队训练现状及研究[D].首都体育学院,体育教育训练学,2013,硕士.
[45]李菊娜.生活垃圾处理方式选择及环境影响[D].内蒙古大学,环境工程,2013,硕士.
[46]欧洁,朱久满.证券公司财务监控与分析系统研究[J].中国审计,2003,19:80-82.
[47]刘倩.盐酸埃克替尼对人胃癌SNU-1细胞增殖抑制作用的研究[D].河北医科大学,肿瘤学,2013,硕士.
[48]程珩.危险废弃物回收中心选址问题研究[D].西南交通大学,物流工程,2014,硕士.
[49]孙若宁.论公开市场业务及其在我国的运用[D].吉林大学,金融学,2004,硕士.
[50]李承熹.配电网中分布式电源并网优化运行与孤岛划分问题研究[D].浙江大学,电气工程,2013,硕士.