叶用莴苣的杀螨活性及活性化合物的追踪分离

叶用莴苣的杀螨活性及活性化合物的追踪分离

作者:师大云端图书馆 时间:2017-05-06 分类:参考文献 喜欢:2838
师大云端图书馆

【摘要】植食性害螨是一类分布广,危害重的农林业害螨,其造成的经济损失,严重制约着我国农林业的生产和发展。因其个体小,繁殖力强,世代短,加之长期大量使用化学农药对其防治,造成了严重的“3R”问题,对其安全有效的防治已成为当前农业生产急需解决的问题之一。植物源杀螨剂来源于植物,对人畜、环境和螨类天敌安全,符合农业的可持续性发展需求,已成为近些年新型杀螨剂研究开发的热点。叶用莴苣(LactucasativaL.),俗称,属菊科莴苣属,一年生或两年生草本植物。本试验以叶用莴苣根、叶和种子为研究材料,用不同溶剂提取植物活性物质,筛选出对朱砂叶螨雌成螨活性较好的生长部位提取物,对该提取物中的活性化合物进行生物活性追踪分离及结构鉴定,并对获得的活性化合物进行系统的生物活性评价。主要研究结果如下:1.叶用莴苣杀螨活性初评以七月份采收的叶用莴苣全株为试验材料,采用室温浸提、超声提取、热回流提取和微波提取法进行活性成分提取,根据粗提物提取率的差异,考虑实际操作需要,最终选用室温浸提法。分别用石油醚、丙酮和甲醇对叶用莴苣根、叶和种子中的活性成分进行提取,获得9种粗提物。采用玻片浸渍法,处理浓度为2.5mg/mL时,测定9种粗提物对朱砂叶螨雌成螨的触杀活性,初筛得到叶用莴苣的叶丙酮提取物杀螨活性最好,处理48h后的螨的校正死亡率为63.04%。同时,分别测定了四月份种植七月份采收和六月份种植九月份采收的叶用莴苣的叶丙酮提取物对朱砂叶螨的室内毒力,结果显示,七月份采收的叶用莴苣丙酮提取物对雌成螨的毒力较高,处理48h后的LCso为1.429mg/mL.2.叶用莴苣丙酮提取物对朱砂叶螨的作用方式研究了叶用莴苣丙酮提取物对朱砂叶螨若螨、幼螨和卵的触杀活性。结果表明,叶用莴苣丙酮提取物对朱砂叶螨各螨态均具有较好触杀活性,处理48h后,对若螨和幼螨的LC50分别为0.569和0.196mg/mL;其对卵的孵化具有抑制作用,处理浓度10mg/mL,7d后卵的孵化率仅达到14.68%。此外,其对朱砂叶螨各螨态还具有较好的驱避作用,浓度为5mg/mL,处理48h后,若螨和幼螨的驱避率都保持在90%以上;而雌成螨的驱避率随时间增加逐渐降低,48h仅为61.11%。除了触杀和驱避活性,叶用莴苣丙酮提取物对朱砂叶螨雌成螨还表现出一定的产卵抑制作用,浓度为5mg/mL时,抑制率最高达到46.60%,抑制作用不明显。3.叶用莴苣杀螨活性物质的追踪分离和鉴定采用常压柱层析法对叶用莴苣丙酮提取物中的活性化合物进行分离,并结合薄层层析(TLC)检测合并柱层析得到的流份,共获得27个组分。在触杀活性的比较中,浓度1mg/mL时,第11组分的杀螨活性较好,处理48h的螨的校正死亡率为93.47%,LCso为0.751mg/mL.对该组分进行纯化,采用固液萃取法,得到黑色固体和白色固体两部分,比较两部分的杀螨活性,发现黑色固体部分的活性较好,48h的LCso为0.036mg/mL.对这一部分再次进行柱层析分离,得到5个组分,通过活性比较,发现11-b组分活性最好,其次是11-a组分,1mg/mL时,处理48h后,螨的校正死亡率分别为89.00%和69.35%。对11-a组分进行重结晶,得到白色针状晶体,通过定性试验、LC/MS,NMR色谱分析和文献数据对比,确定该化合物为β-谷甾醇;对11-b组分进行纯化时,由于条件有限及物质稳定性较差,分离过程中出现分解,故未能得到相应化合物,通过定性试验知其为甾萜类化合物。4.活性物质的生物活性评价测定了叶用莴苣中分离得到的活性物质β-谷甾醇对朱砂叶螨的触杀、驱避、杀卵和产卵抑制活性以及对柑橘全爪螨和二斑叶螨雌成螨的触杀活性。结果显示,该物质对朱砂叶螨、柑橘全爪螨和二斑叶螨表现出较好的触杀活性,驱避和产卵抑制活性不明显,杀卵活性很微弱。处理48h,对朱砂叶螨雌成螨、若螨和幼螨的LCso分别为0.315mg/mL、0.370mg/mL和0.419mg/mL;对柑橘全爪螨和二斑叶螨雌成螨的LCso分别为0.380mg/mL和0.545mg/mL.对朱砂叶螨雌成螨的驱避活性随处理时间的增加而降低,且降低趋势较明显。处理12h,各浓度驱避率均能达到Ⅲ级,24h后,仅最高浓度1mg/mL的处理能保持在Ⅲ级。此外,其对朱砂叶螨卵的触杀活性较弱,最高浓度4mg/mL处理后,卵的孵化率为88.63%。该物质对朱砂叶螨雌成螨的产卵抑制活性不稳定,表现出先升后降再升趋势,低浓度0.5mg/mL和0.25mg/mL处理下,这种趋势变化波动较大,均未表现出较明显的抑制。上述结果表明,叶用莴苣中存在杀螨活性物质,作用方式多样,其中还有一些活性化合物,有待进一步研究。
【作者】李梦;
【导师】丁伟;
【作者基本信息】西南大学,农药学,2014,硕士
【关键词】朱砂叶螨;叶用莴苣;杀螨活性;β-谷甾醇;

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