虎杖苷对TGF-β1诱导的人类肺泡上皮细胞A549细胞EMT的作用研究

【摘要】目的研究虎杖苷对TGF-β1诱导的A549细胞生长及E-cad、Vimentin表达的影响,探讨虎杖苷抑制TGF-β1诱导EMT过程的作用机制,为临床用药提供依据。方法将体外培养的A549细胞用无血清培养基饥饿24h后随机分成5组,取1组作为空白组加入培养液,另取1组为对照组加入只含有TGF-β1(终浓度为5ng/ml)的培养液,其余3组为低剂量组、中剂量组、高剂量组,分别加入同体积含有不同浓度的虎杖苷(50、100、150umol/ml)和TGF-β1(终浓度为5ng/ml)的培养液。①通过倒置相差显微镜观察24h、48h后细胞形态,记录细胞形态变化。②MTT法检测不同浓度虎杖苷在24h、48h对TGF-β1诱导的A549细胞EMT过程的影响,得出最佳药物浓度。③Western-blot法检测空白组、对照组、低剂量组、中剂量组上皮细胞标志物E-cad,间质细胞标志物Vimentin在24h、48h的蛋白表达水平；RT-PCR法检测空白组、对照组、低剂量组、中剂量组上皮细胞标志物E-cad,间质细胞标志物Vimentin在24h、48h的mRNA表达水平。结果在TGF-β1的作用下,A549细胞由原来的鹅卵石状上皮形态转变成梭形,且细胞间隙变大,细胞间的连接也变得松散；虎杖苷对TGF-β1诱导的A549细胞抑制率：第24h：低剂量组、中剂量组、高剂量组的抑制率分别为：37.72%、46.44%、47.69%；第48h：低剂量组、中剂量组、高剂量组的抑制率分别为：38.73%、49.35%、49.52%。在虎杖苷和TGF-β1作用下,上皮标志物E-cad在蛋白和mRNA水平的表达总体呈下调趋势(P<0.05),跟对照组比,各药物组下调幅度较小(P<0.05)。间质标志物Vimemtin在蛋白和mRNA水平的表达总体呈上调趋势(P<0.05),跟对照组比,各药物组上调的幅度较小(P<0.05),48h比24h明显。结论①虎杖苷能维持TGF-β1诱导的A549细胞上皮样细胞形态特征,抑制其向间质样细胞转化；②中剂量组虎杖苷对TGF-β1诱导的A549细胞EMT抑制率最高。③在蛋白水平、mRNA水平上上皮标志物E-cad的下调趋势和间质标志物Vimentin的上调趋势都以48h、中剂量组最明显,体现了虎杖苷抑制EMT的时间和剂量依赖性。
【作者】徐璐；
【导师】宋康；
【作者基本信息】浙江中医药大学，中西医结合临床（专业学位），2014，硕士
【关键词】虎杖苷；TGF-β1；A549细胞；上皮间质转化；肺纤维化；

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