表皮神经嵴干细胞修复大鼠坐骨神经缺损

【摘要】周围神经的缺损修复和功能重建一直是神经外科领域的难题之一。自体神经移植是目前临床上常规的治疗方法,但由于供体神经缺乏、修复长度有限、供体区域功能丧失、神经瘤和自发神经痛等问题,其临床应用受到很大限制。同种异体神经移植除了要面对以上问题外,还要克服免疫排斥反应。因此,应用组织工程种子细胞修复周围神经缺损可以为这一难题的解决提供帮助。神经嵴干细胞是一种多向潜能神经干细胞,它是周围神经系统的原基,也是Schwanncells的祖细胞。毛囊来源的神经嵴干细胞(EpidermalNeuralCrestStemCells,EPI-NCSCs)由于取材方便,具有分化为周围神经系统神经元和胶质细胞的潜能,是一种具有良好应用前景的组织工程种子细胞。目前,在神经损伤修复领域中,EPI-NCSCs主要被应用于脊髓损伤的修复。聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(poly(DL-lactide-co-glycolide),PLGA)是一种人工合成生物可降解性材料,被认为是一种较为理想的人工神经支架材料。为了探讨EPI-NCSCs对周围神经缺损的修复作用,对原代培养的GFP-SD大鼠来源的EPI-NCSCs的体外性质进行了考察,并以其为种子细胞,将其等量与细胞外基质(Extracellularmatrix,ECM)混合后,预置入PLGA导管中,同时,以等量的达尔伯克(氏)改良伊格尔(氏)培养基(Dulbecco’sModifiedEagl’smedium,DMEM)代替EPI-NCSCs作为对照,以用于修复大鼠坐骨神经10mm距离的缺失。噻唑蓝(Methylthiazolyltetrazolium,MTT)试验结果显示,EPI-NCSCs在PLGA膜上的初期粘附率为89.7%。在第1、3、5、7天细胞相对增殖率分别为89.3%、87.6%、85.6%、96.6%。细胞周期与DNA倍体分析表明,与PLGA共培养的EPI-NCSCs与单独培养的EPI-NCSCs相比较,二者的细胞周期变化趋势相同,增殖指数变化趋势也相同。RT-PCR和荧光免疫组化分析表明周围神经组织液可以诱导体外培养的EPI-NCSCs向雪旺氏细胞分化。在神经导管移植4w,术部实现了组织学水平的修复。大鼠手术一侧后肢感觉功能有所恢复,坐骨神经指数有所提高,电生理功能的恢复。EPI-NCSCs移植能够促进腓肠肌湿重的恢复,有利于再生神经对靶组织的再支配。研究结果表明,在PLGA导管中预置EPI-NCSCs,有望实现较好的周围神经缺损的修复效果。
【作者】张路；
【导师】刘彬；李兵仓；
【作者基本信息】西南大学，动物学，2014，硕士
【关键词】表皮神经嵴干细胞；周围神经；细胞外基质；聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物；细胞周期；

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