胰腺癌中OCT4、PTTG1、TAGLN2的表达及TGF-β信号通路对TAGLN2在胰腺癌转移中的作用

【摘要】胰腺癌(Pancreaticcarcinoma)的发病率在世界范围内呈上升趋势,因其恶性程度高,是目前预后最差的消化道肿瘤。尽管医疗诊断水平不断提高,手术技术不断改进及肿瘤靶向药物治疗不断发展,但胰腺癌的治疗效果并没有明显改善,5年生存率没有明显提高。因此,进一步探索胰腺癌的发生、发展、增殖、侵袭转移机制、寻找新的诊断标记物和治疗靶点是提高胰腺癌治疗疗效的关键。目的1.探讨OCT4在胰腺癌组织和癌旁组织(距癌边缘≥2cm)中的表达和临床病理特征之间的关系以及OCT4与胰腺癌细胞的增殖、分化和侵袭的关系；2.研究PTTG1蛋白在胰腺癌组织和癌旁组织(距癌边缘≥2cm)中的表达及其与胰腺癌临床病理特征的关系；3.研究TGF-β1和TAGLN2蛋白在胰腺癌组织和癌旁组织(距癌边缘≥2cm)中的表达及其与临床病理特征的关系和二者之间的相关性；探讨维汉民族胰腺癌中TGF-β1和TAGLN2蛋白表达的差异。方法1.应用免疫组织化学方法半定量检测人胰腺癌的组织芯片中OCT4表达水平；应用Real-timePCR方法定量检测OCT4和AKTmRNA在胰腺癌细胞上的表达水平,用2-△△Ct方法计算AKTmRNA的表达；Westernblot试验定量检测胰腺癌组织中OCT4蛋白表达；并应用MTT法检测感染Lv-shOCT4的细胞的增殖能力、碳酸脂膜侵袭实验测定感染Lv-shOCT4的细胞的侵袭能力。2.应用免疫组织化学方法检测胰腺癌组织中PTTG1蛋白的表达；并对PTTG1蛋白表达水平与患者的临床病理特征关系进行分析。3.应用免疫组织化学染色检测106例石蜡包埋切片胰腺癌组织中TAGLN2、TβRⅡ、p-Smad2/3的表达；对TAGLN2、TβRⅡ、p-Smad2/3的表达与胰腺癌临床病理特征进行分析；对其中46例液氮冷冻的新鲜组织标本-80℃冰箱保存的胰腺癌组织、癌旁组织标本应用Westernblot方法检测‘TAGLN2、TPRⅡ、p-Smad2/3的表达。结果第一部分(1)OCT4在胰腺癌组织和癌旁组织主要位于细胞核中,胰腺癌组织中的表达强于癌周组织,两者间有统计学差异(P<0.05)；(2)应用Real-timePCR和Westernblotassays检测不同分化程度胰腺癌细胞(Bxpc3,Panc-1和MiaPaCa-2)中OCT4的表达,在Panc-1细胞中OCT4的表达显著高于其他两型细胞中；(3)OCT4表达与胰腺癌患者临床病理特征的关系中,与肿瘤的分化程度相关(P<0.05),与肿瘤大小、部位、远处转移、年龄、性别无关(P>0.05);(4)胰腺癌Panc-1细胞经转染成Lv-shOCT4后,应用Real-timePCR和Westernblot试验检测OCT4和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的mRNA和蛋白表达水平。与NC和CON组相比,在Lv-shOCT4组中OCT4和AKT的表达明显下降(P<0.01,每组)；(5)胰腺癌Panc-1细胞经转染成Lv-shOCT4后,使用MTT法连续3天检测细胞增殖能力；发现与NC和CON组比较,Lv-shOCT4组中OCT4以时间依赖的方式明显抑制了Panc-1细胞的增殖活力(P<0.01)；(6)通过Transwell实验,与NC和CON组比较,Lv-shOCT4组Panc-1细胞的侵袭潜能明显减弱(P<0.01),OCT4具有下调细胞侵袭能力的作用。第二部分(1)胰腺癌组织中和癌旁组织中PTTG1蛋白主要在细胞质中有不同程度的阳性表达,胰腺癌组织明显强于癌旁组织,两者间有差异性(P<0.05)；PTTG1表达与胰腺癌患者的性别有相关性,与肿瘤的分化程度、大小、位置、患者年龄、临床分期、远处转移无相关性(P>0.05)。第三部分(1)胰腺癌组织中TAGLN2、TβRⅡ、p-Smad2/3的染色主要位于细胞质中,癌组织表达强于癌旁组织,两者间差别有统计学意义(P<0.05)；(2)免疫组化显示,胰腺癌组织中TAGLN2、TβRⅡ、p-Smad2/3的蛋白表达与肿瘤组织分化程度、神经侵润、肿瘤分期有关(P<0.05);TβRⅡ、p-Smad2/3的蛋白表达还与肿瘤远处转移有关;(3)Western-blot验证了癌组织TAGLN2、TβRⅡ、p-Smad2/3蛋白表达水平与肿瘤组织分化程度、神经侵润、肿瘤分期有关(P<0.05)；(4)并且胰腺癌组织中TAGLN2与TPRⅡ、p-Smad2/3蛋白表达均具有正相关性；维汉民族胰腺癌组织中胶转蛋白2、TβRⅡ和p-Smad2/3表达无差异(P>0.05)；结论第一部分(1)OCT4在胰腺癌中的表达水平与肿瘤的分化程度有关,与肿瘤的大小、淋巴结转移于否无关；下调OCT4表达,可抑制胰腺癌细胞的增殖、分化和侵袭性；OCT4可能通过AKT信号传导通路影响胰腺癌的发生发展；第二部分PTTG1蛋白在人胰腺癌组织中高表达,其表达水平与胰腺癌患者的性别有关,与肿瘤位置、大小、分化程度、神经浸润、远处转移、年龄无关。第三部分(1)TβRⅡ、p-Smad2/3、TAGLN2在胰腺癌组织中存在蛋白的高表达；(2)TβRⅡ、p-Smad2/3、TAGLN2与胰腺癌的局部侵犯、肿瘤分化程度、肿瘤分期相关,与维汉民族、肿瘤大小、部位、性别、年龄无关；(3)TAGLN2和TGF-β有正相关性,在胰腺癌的发生、增殖和转移中,可能具有协同作用；
【作者】林海；
【导师】王喜艳；
【作者基本信息】新疆医科大学，外科学（专业学位），2013，博士
【关键词】胰腺癌；OCT4；PTGG1；TAGLN2；TGF-β1；

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