核黄素及其转运基因变异与新疆哈萨克族食管鳞状细胞癌发病相关性研究

核黄素及其转运基因变异与新疆哈萨克族食管鳞状细胞癌发病相关性研究

作者:师大云端图书馆 时间:2015-10-20 分类:期刊论文 喜欢:2944
师大云端图书馆

【摘要】目的:新疆是我国食管癌的集中高发区,其中以哈萨克族食管癌发病率最高,维吾尔族、汉族次之。核黄素缺乏是目前已知的食管癌主要危险因素,研究表明膳食补充核黄素能显著降低食管癌发病风险,但膳食补充核黄素干预效果存在个体差异。提示环境和遗传因素在食管癌发生中存在交互作用。我们在前期GWAS研究中发现:核黄素转运基因(C20orf54)是食管癌易感基因,其主要功能为促进核黄素转运及吸收利用,现有研究仅认识了该基因可能是食管癌环境与遗传因素交互作用的关键靶点,但对于其导致核黄素利用率下降及核黄素干预实验差异机制尚不明确。为深入了解C20orf54对核黄素调控机制,本项目拟采用MassARRAY,PCR-RFLP及免疫组化等方法,从基因转录(mRNA)、蛋白表达及基因组表观遗传学修饰(启动子甲基化)水平等三种基因表达调控层次分析食管癌发生与C20orf54表达调控关系。以此进一步认识环境与遗传因素在食管癌发病和种族差异中交互作用分子机制,为食管癌的高危人群筛查和个体化预防的特异性新靶点提供实验依据。方法:1)收集新疆哈萨克族、维吾尔族和汉族食管癌患者癌组织及癌旁正常组织标本,制备组织切片,选择C20orf54特异性单克隆抗体,利用免疫组织化学方法,分析C20orf54的蛋白质表达水平与食管癌进程的相互关系。提取新鲜食管病变组织总RNA,经合成cDNA,设计和合成C20orf54特异性引物,应用定量RT-PCR方法检测该基因mRNA表达水平,确定其对食管癌进程的标记作用及临床应用价值;2)高效液相色谱法(HPLC)测定以上食管病变患者外周血液中核黄素水平,同时开展“以人群为基础的病例对照研究”,随即选取与食管癌患者所在地区相对应的正常人群,分析不同民族食管癌患者与健康对照人群血液中核黄素水平的差异,并分析同一患者核黄素转运基因C20orf54蛋白表达与血液核黄素水平的关系;3)从Genbank数据库获取基因信息,利用专业软件扫描基因启动子区,设计出CpG岛片段特异性引物,对亚硫酸氢盐修饰的食管癌细胞DNA进行PCR扩增、载体克隆和测序分析,获得基因甲基化相关的序列和CpG位点信息。依托SequenomMassARRAY技术,选择确认的CpG岛片段及其特异性引物,对食管病变组织DNA进行CpG岛片段甲基化水平定量分析,确定不同组织甲基化片段及其CpG位点之差异以及不同民族食管癌组织C20orf54基因甲基化状态差异。结果:1)通过对C20orf54蛋白表达免疫组化分析,发现在哈萨克族食管癌组织中C20orf54蛋白缺失表达率为42.6%,显著高于癌旁正常组织13.1%,C20orf54蛋白在食管癌组织较癌旁正常组织呈显著低表达状态。随着肿瘤分化程度上升,食管癌组织内C20orf54蛋白质表达水平呈现由正常强表达、中度表达到弱表达和或表达缺失的转变,而在淋巴结转移、侵润深度两项临床病理参数食管癌组织与癌旁组织无差异。RT-PCR结果表明C20orf54基因mRNA在食管癌组织中表达降低、而在正常食管组织中表达上调。其表达下调趋势与蛋白表达相一致;2)通过使用高效液相色谱法对食管癌患者及正常对照组外周血核黄素水平检测发现,哈萨克族食管癌患者组外周血核黄素水平(2.6468±1.3474ng/ml)显著低于正常对照组(4.2960±3.2293ng/ml),差异具有统计学意义(P=0.015)。不同分化程度患者外周血核黄素水平分析发现与蛋白表达相一致,高分化食管鳞状细胞癌患者体内核黄素水平较中分化及低分化癌患者明显升高。哈萨克族食管癌患者外周血核黄素水平与核黄素转运基因蛋白表达呈正相关(F=8.626P<0.05);3)根据SequenomMassARRAYDNA甲基化测试和数据分析,C20orf54基因在食管癌组织总甲基化水平高于癌旁正常组织,两者比较具有统计学意义(P<0.05)。单点甲基化率分析显示,在C20orf54基因12CpG位点中,5个CpG位点(CpG2,CpG3,CpG4,CpG7,CpG10)在食管癌组织及癌旁正常组织之间具有“单点”差异,其差异均有统计学意义(P<0.05)。比较分析以上基因的目的片段甲基化水平变化与“第一部分”所述的蛋白质水平表达改变,可以看出C20orf54基因的甲基化水平变化与蛋白质表达变化(阳性)呈负相关。结论:1)核黄素转运基因C20orf54的转录表达下调或蛋白质表达缺失与哈萨克族食管癌病变进程密切相关,可以成为建立肿瘤分子标志物体系重要候选基因;2)食管癌患者体内核黄素水平显著低于正常人群,而不同分化程度肿瘤比较发现随着肿瘤恶性程度上升,食管癌患者体内核黄素水平下降。提示核黄素与哈萨克族食管癌发生及病理演变密切相关;3)哈萨克族食管癌患者C20orf54基因的启动子区甲基化水平显著高于正常组织,而其甲基化与蛋白表达呈负相关,即异常甲基化可能是蛋白表达下调继而影响核黄素代谢的重要分子机制。
【作者】居来提·艾尼瓦尔;
【导师】伊力亚尔·夏合丁(IlyarSheyhidin);
【作者基本信息】新疆医科大学,外科学,2014,博士
【关键词】哈萨克族;食管鳞状细胞癌;核黄素;核黄素转运基因;基因变异;

【参考文献】
[1]李廷辉,梁惠兰,胡永军,王津,常德双,赵春段,岳跃龙,孔凡东.大港南部滩海区的勘探技术[J].石油地球物理勘探,2005,S1:51-55+138.
[2]李林.关中红色文化视野下高校思想政治教育的研究[D].西安工业大学,思想政治教育,2014,硕士.
[3]唐寅.痰湿体质高血压病人动脉粥样硬化程度及相关危险因素的临床研究[D].黑龙江中医药大学,中西医结合临床(专业学位),2013,硕士.
[4]张岳.多传感器信息融合技术在电机故障诊断中的应用研究[D].兰州理工大学,电力系统及其自动化,2014,硕士.
[5]路文革,黄红,雷剑.啤酒生产中发酵液厌氧菌的增殖及其机理探讨[J].食品与发酵工业.2005(12)
[6]徐光宪.第六次科技革命的内涵[J].功能材料信息,2013,03:8-13.
[7]张王俊,唐跃中,顾立新.上海电网调度二次系统安全防护策略分析[J].上海电力,2004,01:11-16.
[8]邓璞.儿童钢琴初级教程比较研究[D].湖南师范大学,音乐学,2014,硕士.
[9]唐亚辉1,赵宏林1,常迎春2.基于Unity3D平台的篮球游戏三维动漫设计与实现[J].计算机与现代化,2015,02:73.
[10]蔡恒冰.美国信息高速公路[J].今日电子.1994(06)
[11]张云娇.水下冲击波数据处理系统的设计与实现[D].西安工业大学,通信与信息系统,2014,硕士.
[12]刘涛.农信社审计信息管理系统的设计与实现[D].山东大学,软件工程(专业学位),2013,硕士.
[13]边晨晖.我国上市公司综合收益质量特征与权益资本成本[D].华东交通大学,会计学,2013,硕士.
[14]张首玉1,周婧琦2,李少华1,孙艳2,高愿军3.秋葵多糖与淀粉酶的相互作用及光谱学分析[J].食品工业科技.
[15]袁俊.美国、日本、韩国及欧盟的合格评定[J].质量与可靠性.2006(02)
[16]叶雯.基于损伤理论的横观各向同性层状路面结构破坏过程的数值模拟研究[D].西安建筑科技大学,工程力学,2013,硕士.
[17]黄健.MONI商用清洁产品分销渠道优化的研究[D].苏州大学,工商管理(专业学位),2012,硕士.
[18]王铭悦.新时期财经网站品牌经营研究[D].重庆大学,新闻学,2014,硕士.
[19]张晶.翻译硕士教学质量满意度评估[D].山东大学,英语语言文学,2013,硕士.
[20]孟倩.磁共振功能成像在慢性肾病中的临床应用研究[D].苏州大学,影像医学与核医学,2014,硕士.
[21]王石.促进学生进行有效性学习的生物学教学研究[D].华东师范大学,生物教育,2004,硕士.
[22]朱评.急性脑血管病患者血浆一氧化氮、垂体加压素、泌乳素的变化研究[D].重庆医科大学,急诊医学,2004,硕士.
[23]刘大祥.我国建筑业海外派遣劳务人员情绪管理研究[D].安徽大学,工商管理,2013,硕士.
[24]高玮.“第一位英国小说家”——试论丹尼尔·笛福的小说创作[D].吉林大学,比较文学与世界文学,2004,硕士.
[25]李秀平.收费公路行业行政垄断研究[D].长安大学,道路经济与管理,2014,硕士.
[26]刘奕晴.混合式海洋温差能利用系统的理论研究[D].天津大学,工程热物理,2004,硕士.
[27]曲晓倩.李安“家庭三部曲”中父亲形象的文化探寻[D].河北师范大学,中国现当代文学,2014,硕士.
[28]黄平.“城中村”改造土地法律问题研究[D].西南政法大学,民商法,2012,硕士.
[29]方一鸣,王洪瑞,赵现朝,焦晓红.STD工控机在可逆冷轧机厚控系统中的应用[J].冶金自动化,1998,04:16-18+21.
[30]程陆明.基于双口RAM计数器阵列的设计与实现[D].首都师范大学,计算机应用,2004,硕士.
[31]赵蓓蓓.树脂基固态胺吸附剂对低浓度二氧化碳的室温吸附行为研究[D].华东理工大学,材料化学工程,2014,硕士.
[32]刘国生.单板机与单片机构成的多微机系统[J].冶金自动化,1988,01:32-35.
[33]赵龙舫.河流突发性水污染事件实时预警方法研究及系统实现[D].浙江大学,2013.
[34]郭靖.Cahn-Hilliard方程的二阶有限差分格式研究[D].苏州大学,计算数学,2012,硕士.
[35]刘飞阳.基于可重配置路由器的片上网络研究[D].西安电子科技大学,通信与信息系统,2012,硕士.
[36]郝占庆,张健,李步杭,叶吉,王绪高,姚晓琳.长白山次生杨桦林样地:物种组成与群落结构[J].植物生态学报,2008,02:251-261.
[37]申江涛,孙海洪,阿孜古丽·吾拉木.基于双库协同机制的知识发现结构及其应用[J].计算机工程与应用,2001,11:26-29.
[38]刘斌.“复合水解池-生物滤池”工艺的特性研究与工程实施[D].清华大学,市政工程,2003,硕士.
[39]李占领.职业认同视角下胡道静新闻活动研究[D].安徽大学,传播学,2014,硕士.
[40]吴青.企业所得税避税行为影响因素分析[D].华中科技大学,企业管理,2012,硕士.
[41]李小娟.检察机关民事起诉制度研究[D].华中师范大学,诉讼法学,2013,硕士.
[42]岳春光.放电等离子烧结(BNNT-BNNP)增强ZrB_2基超高温陶瓷复合材料力学性能研究[D].苏州大学,机械电子工程,2013,硕士.
[43]陈炜.玉米须总皂苷提取工艺比较及改善糖尿病并发症的实验研究[D].湖北中医药大学,中药学,2013,硕士.
[44]李俊龙.重污染行业上市公司环境信息披露影响因素的实证检验[D].重庆工商大学,会计学,2014,硕士.
[45]党鑫鹏.基于图像分析的人脸识别方法研究及应用[D].北京林业大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[46]陈东.网络控制技术与虚拟天文台——理论和初步实践[D].中国科学院研究生院(云南天文台),2003.
[47]周瑞彪.克尔凯郭尔论恐惧[D].兰州大学,外国哲学,2014,硕士.
[48]李鑫鑫,王轩,姚霖,关键.基于级联重排序的汉语音字转换[J].自动化学报,2014,04:624-634.
[49]邱洋.济南公交网络状态监控系统的设计与实现[D].山东大学,计算机技术(专业学位),2013,硕士.
[50]邵飞.我国供应链融资中动产质押的法律风险及对策研究[D].湖南师范大学,法律(专业学位),2014,硕士.

相关推荐
更多