甲状腺乳头状癌细胞内cAMP浓度测定及其临床意义

【摘要】目的：早在19世纪初期，甲状腺癌在临床被发现，并在文献报道。因甲状腺癌发病率及死亡率均较低，在很长时间内对其诊治并未受到临床上的重视。目前，甲状腺癌是常见的内分泌系统恶性肿瘤，占内分泌恶性肿瘤的95%，同时也是发病率最高的头颈部恶性肿瘤，约占全身各部位恶性肿瘤的0.3%（男性）~1.0%（女性）；甲状腺癌患者死亡率较低，在因癌症死亡的患者病例中约占到0.5%[1]。甲状腺癌的病理类型分为分化型甲状腺癌（differentiatedthyroidcarcinomaDTC）和未分化型甲状腺癌（anaplasticthyroidcarcinomaATC），分化型甲状腺癌包括乳头状癌（papillarythyroidcarcinomaPTC）和滤泡状癌(follicularthyroidcarcinomaFTC)，其中甲状腺乳头状癌占80%以上。国外文献报道，甲状腺癌是近20多年来发病率增长最快的恶性肿瘤之一，每年其发病率平均增长达6.2%。我国的流行病学资料也表明甲状腺癌的发病率呈现增高的趋势，尤其是甲状腺乳头状癌。甲状腺乳头状癌为分化程度较高，生长缓慢的肿瘤，故临床治疗预后较好。临床治疗以手术切除后给予激素治疗的综合治疗为主。甲状腺乳头状癌对促甲状腺激素（thyroidstimulatinghormone，TSH）有一定的依赖性所以又称其为依赖促甲状腺激素癌。甲状腺素制剂对促甲状腺激素的抑制消除了甲状腺乳头状癌细胞的重要生长因子，从而减缓或阻止了癌再生，干扰甲状腺癌的生长和发展。NTCTCSG研究显示[29]，促甲状腺激素抑制治疗显著提高甲状腺乳头状癌患者总体生存率。甲状腺乳头状癌的细胞膜表面表达促甲状腺激素受体，并且对促甲状腺激素刺激发生反应，使甲状腺癌组织复发和增生。临床以此为基础，给予患者超生理剂量的甲状腺素，反馈性抑制促甲状腺激素分泌，降低促甲状腺激素血清水平，进而减少甲状腺乳头状癌的复发风险。因此，甲状腺乳头状癌患者术后给予长期左甲状腺素替代治疗的目的有二：一是供应机体正常生长发育所需的甲状腺激素水平，二是抑制甲状腺乳头状癌的复发。拟实现这两个目的，左甲状腺素的剂量要大于治疗甲状腺功能低下的替代剂量。指南中指出，促甲状腺激素抑制治疗的目标是：①带瘤生存者如甲状腺微癌，在没有特殊禁忌证情况下，血清促甲状腺激素应当维持在<0.1mU/L；②临床无症状的高危型患者，血清促甲状腺激素应当维持在0.1～0.5mU/L，治疗时间为5～10年；③临床无症状的低危型患者，促甲状腺激素应当维持在0.3～2.0mU/L，治疗时间为5～10年。但上述理论缺乏充分的实验数据支持。同时，超生理剂量的左甲状腺素治疗会给患者带来很多副作用，包括导致亚临床甲状腺机能亢进症发生，缺血性心脏病症状加重、心房纤颤以及闭经后妇女的骨质疏松。为降低促甲状腺激素抑制治疗副作用的发生，实施个体化治疗具有重要意义，笔者认为，尤其是对于促甲状腺激素受体表达或功能异常的甲状腺乳头状癌患者，术后个体化促甲状腺激素抑制治疗更为重要。而目前，对于甲状腺癌细胞促甲状腺激素受体的表达或功能是否异常的研究鲜有报道。促甲状腺激素受体与促甲状腺激素结合后，通过活化腺苷酸环化酶(AC)—环磷酸腺苷（cAMP）-蛋白激酶途径进而发挥生理作用。在正常生理条件下,促甲状腺激素与促甲状腺激素受体相结合,从而激活G蛋白,使GDP转化为GTP，后者可激活腺苷酸环化酶,使cAMP大量产生,导致促甲状腺激素发挥一系列生物效应，因此，cAMP水平变化与促甲状腺激素受体活性一致，间接反映了促甲状腺激素受体的活性。本实验以甲状腺乳头状癌患者手术切除标本为研究材料，在体外对甲状腺癌细胞进行TSH（牛TSH）活化，通过酶联免疫法检测活化后甲状腺乳头状癌细胞中cAMP浓度，同时选取结节性甲状腺肿患者的甲状腺细胞为对照，以评估甲状腺乳头状癌细胞的促甲状腺激素受体活性水平，为甲状腺乳头状癌术后进行内分泌治疗的个体化实施提供参考依据。方法：共选取河北医科大学第二医院甲状腺外科2013年1月-2013年6月收治的44例甲状腺乳头状癌患者手术切除的组织标本为观察组研究对象，另选取同时期收治44例结节性甲状腺肿患者手术切除的组织标本为对照组研究对象。对每一例标本经两位以上病理科医师确认。用ELISA测定试剂盒进行细胞内cAMP测定。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（值），计算样品浓度，比较两组组织中cAMP浓度。结果：1甲状腺乳头状癌及结节性甲状腺肿细胞培养形态观察甲状腺乳头状癌细胞在24孔培养板中培养24小时后，开始贴壁，贴壁细胞大部分为圆形、椭圆形或梭形；3-4天后，细胞连接成片或聚集成团，以不规则形为主；5-7天后，细胞逐渐向四周扩展贴壁生长，以单层生长，逐渐铺满培养孔底，此时，细胞为上皮样，多为圆形、椭圆形或梭形，细胞质浓，内有丰富的颗粒物质，细胞核位于细胞一侧，可见核仁。结节性甲状腺肿细胞在24孔培养板中培养24小时后，同样开始贴壁，贴壁细胞大部分为圆形或椭圆形细胞；4-5天后，细胞连接成片；7-10天后，细胞逐渐铺满培养孔底，多为圆形、椭圆形或梭形，细胞质较淡，颗粒物质含量较少，细胞中可见细胞核。2甲状腺乳头状癌及结节性甲状腺肿细胞cAMP测定比较根据测定结果，绘制标准曲线图，线性方程为Y=0.0036*X-0.0493，R2=0.9665，提示相关性良好。计算的标准曲线方程为X（cAMP浓度）=277.7778*Y+13.6944。根据以上方程计算所得，甲状腺乳头状癌组培养所得细胞cAMP浓度为（64.8337±7.8349）pmol/ml，结节性甲状腺肿组培养所得细胞cAMP浓度为（72.7295±8.6754）pmol/ml，甲状腺乳头状癌组培养所得细胞cAMP浓度低于结节性甲状腺肿组，比较差异有统计学意义（t=4.4804，P=0.0000<0.05）。结论：1甲状腺乳头状癌细胞cAMP水平低于结节性甲状腺肿细胞，由此推测可能甲状腺乳头状癌细胞促甲状腺激素受体功能低于结节性甲状腺肿细胞。2.甲状腺乳头状癌细胞内cAMP浓度在不同个体间存在差异。3.甲状腺乳头状癌细胞内cAMP浓度测定可做为甲状腺乳头状癌术后个体化内分泌治疗的参考依据。
【作者】李筱雨；
【导师】王树峰；
【作者基本信息】河北医科大学，外科学（专业学位），2014，硕士
【关键词】甲状腺乳头状癌；结节性甲状腺肿；环磷酸腺苷；细胞培养；免疫组织化学染色法；酶联免疫吸附法；

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