HeLa细胞中miR-106a、miR-376a和miR-485-5p对靶基因CDH1调控实验研究

【摘要】细胞的上皮-间质转化(EMT)是指具有极性的上皮细胞向具有运动能力的间质细胞转化的过程。肿瘤的侵袭和迁移与EMT过程密切相关,是生物分子(如蛋白、核酸等)相互作用的复杂过程。大量实验研究表明：microRNA(miRNA)在肿瘤细胞的EMT过程中起着十分重要的作用,是当前研究肿瘤的侵袭和迁移机理的热门课题之一。本文针对宫颈肿瘤HeLa细胞的EMT过程,利用生物信息方法,从理论上筛选出HeLa细胞EMT过程中一些起重要作用的miRNA:miR-106a、miR-376a和miR-485-5p;利用分子生物实验方法,研究了miRNA对关键靶基因CDH1的调控作用机理。主要研究工作和成果如下：(1)首先,用生物信息学方法(miRanda、TargetScan、FindTar、PicTar和miRBase),从理论上预测出一批EMT过程中与关键钙黏蛋白靶基因CDH1碱基互补的miRNA分子；从中筛选出miR-106a、miR-376a和miR-485-5p作为研究对象。这些miRNA对靶基因CDH1具有下调作用,即能抑制钙黏蛋白的表达,对HeLa细胞的侵袭转移能力有重要影响。(2)其次,利用分子生物学实验方法,构建了含有1miR-106a、miR-376a、miR-485-5p和CDH1基因的3’UTR区的质粒；将niRNA质粒和mRNA质粒共转染到HeLa细胞；对细胞进行荧光蛋白表达谱分析检测含有CHD1的3’UTR区的质粒的荧光表达量进行分析。(3)最后,利用分子生物实验数据,分析发现：转染miRNA质粒后,HeLa细胞中CDH1的荧光表达量、钙黏蛋白表达量明显下调,肿瘤细胞的转移能力增强,实验结果与理论预测相符合。本文的理论和实验结果均表明：1miR-106a、miR-376a和miR-485-5p可以调控靶基因CDH1,对肿瘤HeLa细胞的侵袭和转移能力具有促进作用。
【作者】张亚茹；
【导师】贾亚；
【作者基本信息】华中师范大学，理论物理，2014，硕士
【关键词】EMT；钙黏蛋白E-cadherin；生物信息学预测；miNRAs；荧光检测；侵袭和转移；

【参考文献】
[1]赵青,顾学群.非晶制带钢水液位的智能控制[J].冶金自动化,2005,06:61.
[2]艾丹祥.基于本体论的知识检索研究[D].武汉大学,2004.
[3]朱岚.相貌负面身体自我女性对面孔信息的认知偏向研究[D].西南大学,基础心理学,2013,硕士.
[4]罗皓文.有源电力滤波器指定次谐波检测与抑制技术研究[D].湖北工业大学,电力系统及其自动化,2013,硕士.
[5]林静焕,戴勇,林旭焕,许敏界.激光扫描球形偏心引起误差的理论分析[J].激光技术,2014,06:813-816.
[6]黄海清.无锡新区污水处理系统与环境影响研究[D].河海大学,环境工程,2003,硕士.
[7]周振江,王广全,郭成峰,计建炳.折流式旋转床静圈对其性能的影响[J].化工进展,2014,01:25-29.
[8]王建.非回转对称曲面超精密车削刀具路径规划技术研究[D].哈尔滨工业大学,机械工程,2013,硕士.
[9]杨小军,潘泉,张洪才.基于粒子滤波和似然比的联合检测与跟踪[J].控制与决策,2005,07:837-840.
[10]朱媛媛.关于自然形态在有机米包装设计中的参与性研究[D].西南交通大学,艺术设计,2013,硕士.
[11]周畅.在役桥梁状态评估和养护管理方法的研究[D].浙江大学,2008.
[12]王善平.营改增对交通运输业的影响及对策研究[D].首都经济贸易大学,税务（专业学位）,2014,硕士.
[13]李艳飞.Z值评价川崎病患儿冠状动脉损害的研究[D].吉林大学,儿科学,2013,硕士.
[14]刘波.水平荷载作用下群桩的受力机理研究[D].西安建筑科技大学,建筑与土木工程,2004,硕士.
[15]安冉.我国科技创新对区域经济增长的溢出效应分析[D].山东财经大学,统计学,2014,硕士.
[16]刘泽霖.消瘀软膏联合丹参注射液关节腔注射治疗膝关节滑膜炎的临床观察[D].黑龙江中医药大学,中医骨伤学（专业学位）,2013,硕士.
[17]罗家涛.逻辑脉冲宽度调制光伏逆变器研究[D].内蒙古科技大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[18]孙新娥.转YHem1基因油菜植株耐盐性及其生理机制的研究[D].南京农业大学,蔬菜学,2012,硕士.
[19]周华锋,胡荣,李晓露,柳一兵.基于态势感知技术的电力系统运行驾驶舱设计[J].电力系统自动化,2015,07:130-137.
[20]周岳.外资引入对我国信托公司效率的影响研究[D].西北大学,金融学,2013,硕士.
[21]柳国强.深化市校合作共建美丽乡村[J].新农村,2014,01:5-7.
[22]成会明.石墨烯的制备与应用探索[A].中国力学学会、郑州大学.中国力学学会学术大会’2009论文摘要集[C].中国力学学会、郑州大学:,2009:1.
[23]雷阿玥.生物燃料电池型全氟辛烷磺酸传感器的制备及检测[D].大连理工大学,2013.
[24]谢茜.我国农村社会养老保险法律制度研究[D].首都经济贸易大学,经济法学,2014,硕士.
[25]胡威.深圳电视台DSNG车传输系统设计与实施[D].河北工程大学,计算机技术,2012,硕士.
[26]王鹏,高伟,张红斌.地震切片演化技术在乍得A区块的应用[J].石油地球物理勘探,2008,S1:115-118+196+11.
[27]连双双.二苯并呋喃和二茂铁基色原酮的合成研究[D].中北大学,应用化学,2014,硕士.
[28]王庆锁,董学军,陈旭东,杨宝珍.油蒿群落不同演替阶段某些群落特征的研究[J].植物生态学报,1997,06:44-51.
[29]张淼.分段进水泥膜工艺处理低碳氮比生活污水[D].扬州大学,市政工程,2012,硕士.
[30]居峰.高校主体间性思想政治教育研究[D].中国矿业大学（北京）,思想政治教育,2014,博士.
[31]夏露.从美国情景喜剧看在字幕翻译中使用网络流行语作为一种归化手段[D].华中师范大学,英语语言文学,2014,硕士.
[32]张吉林.交大房产未来期项目的市场营销策略研究[D].西南交通大学,工商管理,2003,硕士.
[33]郭艳玲.牛蒡低聚果糖诱导拟南芥对Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000的抗性及其作用机制的研究[D].山东大学,生物化学与分子生物学,2014,博士.
[34]廖顺宝.资源环境科学多维信息平台研究[J].地球科学进展,2002,04:502-507.
[35]张琪.非政府组织在煤矿安全生产中的作用研究[D].中国矿业大学,行政管理,2014,硕士.
[36]杨运年.Ku波段VSAT卫星通信系统[J].现代电信科技.1996(09)
[37]姚梦颖.试论自译的忠实[D].南京大学,法语语言文学,2013,硕士.
[38]李家墉.互连以太网的设计与应用[J].冶金自动化,1996,01:21-24.
[39]夏辉.惠州市耕地保护的问题与对策研究[D].中南民族大学,公共管理,2013,硕士.
[40]钟杰昌.高谱效率光调制信号长距离传输性能研究[D].哈尔滨工业大学,物理电子学,2013,硕士.
[41]薛雅茜.新媒体环境下的大学生思想政治教育[D].山西师范大学,思想政治教育,2014,硕士.
[42]朱延河.人力资源管理模式对组织目标最大化的影响[D].吉林大学,工业工程,2014,硕士.
[43]王浩苏.基于多目标决策的城市交通微循环系统功能优化研究[D].西南交通大学,交通工程,2014,硕士.
[44]郭梅佳.沙漠戈壁高速公路安全设计研究[D].长安大学,交通运输工程（专业学位）,2013,硕士.
[45]赵成刚,蔡国庆.非饱和土广义有效应力原理[J].岩土力学,2009,11:3232-3236.
[46]杨啸.社会流动视阈下新生代农民工婚恋问题研究[D].黑龙江大学,社会学,2013,硕士.
[47]周宁,刘玮,严亚兰.虚拟数据库技术的发展和应用[J].情报科学,2002,02:171-174.
[48]王明鹏.枯草芽孢杆菌Bs-412的生防作用及发酵优化的研究[D].西北大学,生物工程（专业学位）,2014,硕士.
[49]周晓路.江户琳派酒井抱一之《四季花卉图卷》摹写与装潢制作[D].中央美术学院,美术学,2013,硕士.
[50]王冠楠.离子液体酸性气体吸收剂的合成、表征及吸收性能研究[D].南京大学,绿色过程化学（专业学位）,2011,博士.