鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药相关基因的研究

【摘要】目的：了解本地区临床分离的鲍曼不动杆菌对20种临床常用抗菌药物的耐药情况；检测主动外排泵结构基因、D类碳青霉烯酶基因及插入序列ISAba1、外膜蛋白编码基因的分布及部分基因的表达情况，分析其在介导鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药中的作用，为指导临床有效控制鲍曼不动杆菌耐药菌株在院内的感染和传播提供实验室依据。方法：采用琼脂二倍稀释法测定110株鲍曼不动杆菌临床分离株对20种临床常用抗菌药物的最低抑菌浓度（Minimalinhibitoryconcentration,MIC）及外排泵抑制后4种抗菌药物的MICs；用PCR技术扩增3种外排泵基因（adeB、adeJ、abeM），4种D类碳青霉烯酶代表基因及插入序列（OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58及ISAba1）和外膜蛋白编码基因carO；RT-PCR方法检测外排泵基因（adeB、adeJ、abeM）及插入序列ISAba1下游基因（OXA-23、OXA-51）的表达情况，分析碳青霉烯类耐药株和敏感株在基因表达方面的差异和ISAba1对碳青霉烯酶基因表达的影响；SDS-PAGE分析细菌外膜蛋白的表达情况。结果：110株鲍曼不动杆菌对多粘菌素B敏感性最高（100%），其次对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为28.18%和29.09%，对其余17种抗菌药物的耐药率在50.00%～99.09%之间，其中碳青霉烯类耐药菌株多重耐药率达100%，泛耐药率为56.25%。外排泵抑制试验结果显示庆大霉素+CCCP的外排阳性率最高为74.55%（82/110），美罗培南+CCCP共筛选出15株外排阳性菌株，在耐美罗培南菌株中占28.13%。碳青霉烯类敏感菌株中adeB、adeJ、abeM基因的检出率分别为78.2%、79.5%、80.8%，碳青霉烯类耐药菌中，96.9%检出adeB、adeJ及OXA-23基因，93.8%检出abeM，100%菌株检出OXA-51和carO基因，所有菌株均未检测到OXA-24、OXA-58基因；RT-PCR结果显示碳青霉烯类耐药组（R组）和敏感组（S组）adeB基因相对表达水平分别为0.9062±0.1732和0.4856±0.1576，R组明显高于S组；插入序列ISAda1下游的OXA-23和OXA-51基因表达增强。SDS-PAGE分析显示碳青霉烯类耐药菌株与敏感菌株相比在大约50KDa、22KDa等处存在差异蛋白条带。结论：1、本组鲍曼不动杆菌临床分离株对临床常用抗菌药物耐药情况严重，尤其是碳青霉烯类耐药菌株均表现为多重耐药，甚至是泛耐药；2、外排泵基因adeB高检出率及高表达水平与鲍曼不动杆菌的多重耐药有关，AdeABC主动外排系统在介导鲍曼不动杆菌对美罗培南的耐药中具有重要意义；3、OXA-23型和OXA-51型碳青霉烯酶与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药耐药有关，且插入序列ISAba1可能与OXA-23、OXA-51基因的表达调控有一定关系；4、碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌与碳青霉烯类敏感菌相比，外膜蛋白存在差异条带，外膜蛋白的改变可能在对碳青霉烯类耐药中发挥一定作用。
【作者】王同慧；
【导师】凌保东；
【作者基本信息】川北医学院，药理学，2014，硕士
【关键词】鲍曼不动杆菌；多重耐药；主动外排泵；碳青霉烯类抗生素；插入序列ISAba1；外膜蛋白；

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