何首乌饮对过度训练大鼠睾丸组织3β-HSD的影响

【摘要】运动性低血睾酮是影响运动能力和运动后恢复体力的重要因素之一,对体育运动员的体力增强和恢复很重要。运动性低血睾酮长期以来一直备受关注,因此运动性低血睾酮成为运动医学界研究的重点领域。而何首乌饮由《宣明论方》何首乌丸加味而成,在何首乌、肉从蓉、怀牛膝基础上增加淫羊藿补肾助阳以强筋骨,丹参活血化瘀以通心脉,茯苓健脾利湿以宁心神。有文献报道何首乌饮能够提高大鼠血清睾酮含量和SOD活性、恢复下丘脑单胺类神经递质的平衡、降低生精细胞凋亡指数等。3β-HSD分子量为43kd具有Ⅰ型和Ⅱ型两种类型其中Ⅱ型主要存在于睾丸,3β-HSD在类固醇激素的合成中将孕烯醇酮转化为孕酮,后者经羟化、侧链裂解形成睾酮,它是睾酮合成的关键酶之一,是评价睾丸间质细胞功能的经典指标。本实验对大鼠施行高强度力竭游泳训练,并进行何首乌饮灌胃预防、治疗、干预,从生化-组织-蛋白-基因水平等不同层次探讨何首乌饮对过度训练大鼠睾丸组织3β-HSD表达的影响。目的：研究何首乌饮对过度训练雄性大鼠睾丸睾酮分泌的影响,3β-HSD在睾丸组织免疫组织化学法染色和mRNA基因表达,以及在睾丸组织中的蛋白表达。用以探讨何首乌饮对过度训练大鼠睾丸组织3β-HSD的影响。方法：1疲劳模型建立及分组：选用8周龄清洁级雄性SD大鼠(Sprague-Dawleyrats,SD)75只,动物(合格证编号1005050)每只体重为180-200g,自由进食,饮水,室温20℃-25℃,相对湿度45%-55%,每天光照12h,随机分为5组：安静对照组(A组)、安静何首乌饮组(B组)、自然恢复组(C组)、何首乌饮治疗组(D组)和何首乌饮预防组(E组),每组15只。自然恢复组和何首乌饮治疗组可以看作模型组,C组、D和E组大鼠复制力竭运动动物模型,其中的E组每天训练前给何首乌饮20g/kg/d(含生药9.6g/ml)灌胃作为预防,安静对照组(A组)灌胃生理盐水,安静何首乌饮组灌胃何首乌饮。模型成功后各组停训,何首乌饮治疗组给何首乌饮20g/kg/d(含生药9.6g/ml)灌胃治疗42d,自然恢复组灌胃生理盐水,安静何首乌饮组继续灌注何首乌饮。何首乌饮预防组停止灌胃,自由饮食。安静对照组继续灌胃生理盐水。2方法(1)判断疲劳模型是否建立成功：在游泳训练42d后大鼠用10%水合氯醛麻醉,经内眦眶后静脉取血约1.5mL,离心取上清。当大鼠出现运动迟缓,体重下降,食量减少等现象。同时将睾酮降低作为判断疲劳成功的重要指标,血红蛋白和血肌酐作为辅助的判断指标,分别采用生化分析仪检测全血血红蛋白和血清肌酐含量以及血清睾酮含量,血清睾酮含量明显低于正常组,以及血红蛋白低于正常组和血肌酐升高并且明显高于正常组,通过以上生化指标和大鼠的外部特征可以确定造模成功。(2)采用免疫组织化学法检测大鼠睾丸组织间质细胞3β-HSD表达情况。(3)WesternBlot法检测各组大鼠睾丸组织3β-HSD蛋白的表达。(4)RT-PCR检测各组大鼠睾丸组织3β-HSDmRNA的基因表达。结果：1免疫组化染色：各组切片均可见3β-HSD染色,免疫阳性细胞主要是睾丸间质细胞。免疫阳性产物位于细胞间质,通常呈棕黄色颗粒状,小部分呈弥散状。3β-HSD在睾丸间质细胞中为深黄色颗粒为阳性表现,与安静组比较何首乌饮组表达阳性最强,有差异有统计学意义(P<0.05)而自然恢复组表达最弱,治疗组和预防组强于自然恢复组,有差异有统计学意义(P＜0.05)。2WesternBlot检测睾丸组织蛋白的表达：安静何首乌饮组大鼠睾丸3β-HSD蛋白表达明显高于安静对照组,差异有统计学意义(P<0.05),何首乌饮治疗组3β-HSD蛋白表达高于自然恢复组相比,差异有统计学意义(P<0.05),何首乌饮预防组3β-HSD蛋白表达高于自然恢复组(P<0.05),治疗组和预防组之间无显著性差异。3RT-PCR检测睾丸组织3β-HSDmRNA的表达：与安静组相比,3β-HSD基因表达在何首乌饮组里升高明显,有差异有统计学意义(P＜0.05),治疗组和预防组分别于自然恢复组相比升高明显,有差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：1游泳致大鼠疲劳模型的建立是成功的。2何首乌饮能够提高运动性疲劳大鼠睾丸组织3β-HSD的蛋白和基因水平表达,能促进睾丸分泌睾酮。
【作者】王凤威；
【导师】高福禄；
【作者基本信息】承德医学院，人体解剖与组织胚胎学，2011，硕士
【关键词】何首乌饮；运动性疲劳；睾丸；血红蛋白；肌酐；睾酮；3β-HSD；

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