miR-145靶向FSCN1在不同生长方式胃癌中的作用及机制

miR-145靶向FSCN1在不同生长方式胃癌中的作用及机制

作者:师大云端图书馆 时间:2021-06-30 分类:硕士论文 喜欢:1967
师大云端图书馆

【摘要】目的研究miR-145在不同生长方式胃癌中对迁移和侵袭的调节作用及其分子机制,旨在从新的视角探讨胃癌发生发展机制,为寻找新的胃癌目标靶点奠定理论基础。方法1.胃癌组织标本中miR-145与FSCN1的表达收集浸润型和膨胀型胃癌组织标本各40例及其相应的癌旁非肿瘤组织标本,应用RT-PCR检测miR-145与FSCN1的表达水平;应用Westernblot检测FSCN1的蛋白表达水平,统计分析miR-145与FSCN1表达的相关性,结合Ming氏分型比较两种分型中miR-145与FSCN1表达差异。2.检测miR-145对FSCN1的调控作用通过TargetscanmiRNA靶基因预测软件,筛选出miR-145可能的下游靶基因FSCN1。利用双荧光素酶报告基因实验检测miR-145对FSCN1的负调控作用。3.miR-145是否通过靶向调控FSCN1抑制胃癌细胞迁移和侵袭。在胃癌细胞MGC-803和SGC-7901中,过表达或者抑制miR-145,检测miR-145对FSCN1mRNA、蛋白水平的影响。过表达或干扰FSCN1的表达,采用transwell实验,研究改变FSCN1对不同生长方式胃癌迁移和浸润的影响。过表达或miRinhibitor改变miR-145的表达,采用transwell实验,研究改变miR-145对不同生长方式胃癌迁移和浸润的影响。同时过表达或者抑制miR-145与FSCN1,采用transwell实验,研究miR-145对不同生长方式胃癌迁移和浸润的影响是否是通过FSCN1来实现的。结果1.在胃癌组织标本中,与正常组织相比,膨胀型和浸润型两型胃癌组织中miR-145表达水平均有一定程度的降低,然而,在浸润型胃癌组织中,miR-145表达水平下降程度尤为明显(P<0.05)。相应的,在胃癌组织中,与正常组织相比,膨胀型和浸润型两型胃癌组织中FSCN1mRNA和蛋白表达水平均有一定程度的升高;然而,在浸润型胃癌组织中,FSCN1mRNA和蛋白表达水平升高程度尤为明显(P<0.05)。2.通过双荧光素酶实验证明miR-145可以抑制FSCN1的表达水平,而对突变体及对照则没有影响,说明FSCN1受miR-145直接调控。过表达miR-145后,FSCN1mRNA和蛋白水平下降,说明miR-145抑制FSCN1表达。3.在胃癌细胞MGC-803和SGC-7901中,干扰FSCN1表达,干扰后,FSCN1蛋白表达水平显著降低,干扰效果良好。FSCN1表达水平降低后,胃癌细胞MGC-803和SGC-7901的迁移和侵袭能力都明显降低。过表达miR-145,在两株胃癌细胞中,细胞迁移和侵袭能力都明显降低。在过表达miR-145后同时过表达FSCN1,两株胃癌细胞的迁移和侵袭能力均又上升,说明miR-145通过靶向调控FSCN1抑制细胞迁移和侵袭。结论1.miR-145在两型胃癌组织中均表达下调,相对于膨胀型胃癌组织,在浸润型胃癌中,下调更明显,两者之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。相反地,FSCN1在两型胃癌组织中表达升高,相对于膨胀型胃癌组织,在浸润型胃癌中,上升更明显,两者之间的差异存在统计学意义(P<0.05)。提示miR-145可能主要是在浸润型胃癌中下调,而miR-145在浸润型胃癌中的低表达导致胃癌的发生和发展过程。2.miR-145通过抑制其靶基因FSCN1的表达,从而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭,这两者可能成为胃癌治疗的新靶点。
【作者】陈嘉佳;
【导师】蔡建春;
【作者基本信息】厦门大学,外科学,2014,硕士
【关键词】胃癌;miR-145;FSCN1;迁移;侵袭;

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