高通量抗菌活性筛选模型的构建及两株海洋真菌次级代谢产物的研究

【摘要】海洋是地球万物的生命之源,海洋中生存着地球上80%以上的生物资源,海洋生物的生态环境和陆地生物有很大的差别。海洋微生物具有极为丰富的生物多样性及功能多样性,由于其特殊的生存环境,在适应环境的进化过程中形成了独特的遗传代谢机制和化学防御机制,是目前新结构或新活性天然产物的主要来源。海洋真菌作为海洋微生物的主要组成部分成为近年来国内外学者研究的焦点,国内外学者已经从海洋真菌的次级代谢产物中分离得到大量的活性物质。本论文以抗菌活性作为生物活性筛选的靶向目标,采用刃天青显色法,对刃天青显色法的实验条件进行优化,选取已上市的抗菌药物评价刃天青显色法在测定MIC中的适用性,建立了受试菌株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,黑曲霉的两种高通量抗菌筛选模型。克服了传统抗菌活性筛选方法如：琼脂稀释法,纸片法,E-test等方法费时费力,浪费实验材料,不适用于所有筛选样品的缺点,实现了对海洋真菌初级馏分的高通量筛选,具有经济,准确,省时省力等优点。以上述海洋真菌初级馏分的筛选结果为参考,选取了其中两株真菌(白色侧齿霉MCCC3A00236,黄曲霉MCCC3A00246)对其的次级代谢产物进行研究,采用硅胶柱层析,反相柱层析,制备型HPLC,凝胶柱色谱(SephadexLH20)等分离方法,刃天青显色法进行活性跟踪,共分离得到了39个化合物,采用质谱、紫外、核磁共振(NMR)、2DNMR等现代波谱学手段和理化性质确定化合物的结构,截止目前,一共鉴定了13个单体化合物(化合物1～13),其中化合物1为新化合物,其他为已知化合物。在200μg/mL的供试浓度下,化合物1表现出对黑曲霉,MRSA,轮虫弧菌,坎氏弧菌,创伤弧菌良好的抗菌活性,抑制率都在70%以上,其中对弧菌的抑制率达到100%,对本实验中受试菌株的MIC在128μg/mL～256μg/mL范围内。其他的已知化合物中也有一定比例的化合物表现出良好的抗菌活性：化合物2,3对黑曲霉,轮虫弧菌,坎氏弧菌有抗菌活性(抑制率在90%以上和60%以上),化合物6对黑曲霉有良好的抗菌活性,化合物10,13对MRSA,黑曲霉,轮虫弧菌,坎氏弧菌具有良好的抗菌活性,抑制率均在90%以上。
【作者】陈卓；
【导师】陈建明；陶懿；
【作者基本信息】厦门大学，遗传学，2014，硕士
【关键词】海洋真菌；化合物；抗菌；高通量筛选；

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