鲨鱼再生肝脏中TBC1D15基因的表达和蛋白结晶条件的筛选

鲨鱼再生肝脏中TBC1D15基因的表达和蛋白结晶条件的筛选

作者:师大云端图书馆 时间:2020-03-25 分类:硕士论文 喜欢:1873
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【摘要】鲨肝活性肽(activepeptidefromsharkliver,APSL)是从条纹斑竹鲨的肝脏中分离纯化到的一种肝细胞刺激因子(HepaticStimulatorSubstance,HSS),对糖尿病有潜在的治疗作用。研究表明APSL对糖尿病小鼠具有保肝护胰岛并改善其并发症的作用。这为将其开发为新型抗2型糖尿病药物提供了实验依据。但是其作用机制以及发挥作用的靶点仍属未知,这对新型药物的开发带来难度。通过结构生物学解析APSL的三维结构,有助于理解其作用机制,找到发挥作用的靶点。本实验成功纯化获得了APSL和融合蛋白MBP-APSL,晶体形成条件筛选实验显示目的蛋白均发生沉淀未获得晶体,结合二级结构预测,我们推测APSL蛋白不是完整蛋白。因此,需要找到APSL的全基因序列。通过建立鲨鱼1/3肝脏切除再生模型,构建鲨鱼再生肝脏cDNA文库,以APSL基因为模板筛选得到一个长度为2133bp的ORF框。生物信息学分析发现其具有TBC1D15蛋白家族成员的特征序列结构,推测其为鲨鱼肝脏中的TBC1D15基因,APSL蛋白位于TBC1D15蛋白N端的未知功能的结构域DUF3548内。通过大肠杆菌表达系统和昆虫细胞表达系统成功获得鲨鱼TBC1D15蛋白及其他物种的同源TBC1D15蛋白并开展了重组蛋白结晶条件筛选。目前蛋白晶体条件筛选仍在进行中。为了进一步确定纯化所得的蛋白为TBC1D15蛋白,进行Rab-GAP活性实验。由于TBC1D15蛋白能特异性识别Rab7a蛋白,所以以野生型Rab7a-wt基因为模板,通过OverlapPCR技术,获得激活型Rab7a-Q67L和抑制型Rab7a-T22N基因并原核表达纯化获得融合蛋白Biotin-MBP-Rab7a-wt/Q67L/T22N。AlphaScreen实验检测TBC1D15蛋白与Rab7a蛋白的相互作用。结果显示该TBC1D15蛋白具有Rab-GAP活性。目前仍未有TBC1D15蛋白晶体及结构的报导。本研究首次发现鲨鱼再生肝中的TBC1D15蛋白并提供了一种纯化及活性检测的方法,对后续的TBC1D15蛋白的结晶及结构解析具有一定的指导意义。
【作者】王涛;
【导师】吕正兵;徐华强;
【作者基本信息】浙江理工大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士
【关键词】APSL;TBC1D15蛋白;Rab-GAP活性;Rab7a蛋白;

【参考文献】
[1]韩慧果.吡啶羧酸类添加剂对钒电池正极电解液性能影响研究[D].中南大学,2014.
[2]王淑琴.转型期中国知识分子的政治参与[D].山西大学,马克思主义理论与思想政治教育,2004,硕士.
[3]余军良.金融危机下中国出口贸易波动因素研究[D].浙江工业大学,2013.
[4]王永胜.中小城市可持续发展分析与评价研究[D].天津大学,工商管理,2004,硕士.
[5]程渤芮.高新技术企业员工关系管理影响因素的实证研究[D].成都理工大学,企业管理,2013,硕士.
[6]胡书国.《俄亥俄的温斯堡》中的衔接与连贯现象分析[D].河北大学,英语语言文学,2003,硕士.
[7]许宁.学《决定》谈大都市绿化建设[J].绿色中国.2004(Z1)
[8]杜鹏.核心稳定性与栏架组合练习干预在跨栏跑技术教学课中的实验研究[D].首都体育学院,体育教育训练学,2013,硕士.
[9]李洪阳.降糖1号胶囊的制备工艺及质量标准研究[D].黑龙江中医药大学,药物分析学,2013,硕士.
[10]张蕾.新世纪大学德育环境的互动发展研究[D].华东师范大学,马克思主义理论与思想政治教育,2002,硕士.
[11]章琪.宽带综合数据光同步网吉比特收发器的研究[D].沈阳理工大学,通信与信息系统,2012,硕士.
[12]商萌萌.游憩商业区(RBD)对目的地旅游形象的影响研究[D].山东大学,企业管理,2013,硕士.
[13]赵瑞娟.太阳针状体的形态与波动分析[D].中国科学院研究生院(云南天文台),天体物理,2014,硕士.
[14]秦承群,冯奕钰,封伟.红外光驱动聚氨酯基碳纳米复合薄膜的形状记忆性能的研究[A].中国化学会高分子学科委员会.2013年全国高分子学术论文报告会论文摘要集——主题F:功能高分子[C].中国化学会高分子学科委员会:,2013:1.
[15]王文强.农杆菌介导的四倍体刺槐BADH基因高效转化体系的建立和转基因植株的检测[D].甘肃农业大学,草业科学,2003,硕士.
[16]王军.山东省网络监督监察系统构建研究[D].山东大学,公共管理(专业学位),2012,硕士.
[17]金宗英.完善廉租住房退出制度的路径研究[D].天津财经大学,社会保障,2012,硕士.
[18]高新志.济源电网智能化建设中智能调度的研究[D].郑州大学,电力系统及其自动化,2012,硕士.
[19]刘艳军.我国西部地区产业发展与人才集聚研究[D].重庆大学,产业经济学,2014,硕士.
[20]夏天泉.四川电力走出去战略的具体实践[D].西南财经大学,工商管理,2004,硕士.
[21]王国军.会计信息质量对高管薪酬业绩敏感性的影响研究[D].东北农业大学,会计学,2013,硕士.
[22]格哈特P·多尔.横波的观测[J].石油地球物理勘探,1976,S1:31.
[23]王志珍.物流企业精益物流管理研究[D].大连海事大学,交通运输工程,2012,硕士.
[24]霍延军.基于.NET的配镜管理系统设计与实现[D].西安电子科技大学,软件工程,2012,硕士.
[25]王敬.城市重点地段的建筑群体及空间设计[D].大连理工大学,建筑设计及其理论,2004,硕士.
[26]陈德强.基于C60和酞菁钯有机光敏场效应管的研究[D].兰州大学,微电子与固体电子学,2013,硕士.
[27]孙宝骏,吴凡,许广昀,陈磊,徐志伟,赵亚娣,王航,张斌.氧化石墨烯薄膜的自组装制备与伽玛射线辐照还原[J].辐射研究与辐射工艺学报,2013,06:26-31.
[28]魏菲.基于网站群管理平台的多机发布系统的设计与实现[D].西北大学,电子与通信工程(专业学位),2012,硕士.
[29]高杰.论靳尚谊和安格尔人物油画轮廓线的形式美[D].西安美术学院,美术学,2014,硕士.
[30]赵健伍.抽头电感型单级升压逆变器及其电机驱动应用研究[D].南京航空航天大学,电力电子与电力传动,2013,硕士.
[31]曹子昱.中国移动省级综合监控系统的设计与开发[D].北京交通大学,软件工程(专业学位),2013,硕士.
[32]杨心仪.用人单位规章制度制定程序瑕疵效力判定研究[D].苏州大学,经济法,2014,硕士.
[33]王璇.中国传统礼仪教育及其现代价值[D].兰州商学院,思想政治教育,2014,硕士.
[34]蔡辉森.中学物理探究式教学理论和实践探索[D].福建师范大学,教育,2003,硕士.
[35]本刊记者.热烈祝贺本刊第九届编委会召开[J].石油地球物理勘探,1991,04:548.
[36]冯永铿.云南曲靖宣威烟叶质量风格特色分析[D].湖南农业大学,作物学,2012,硕士.
[37]邓志军,陈冰冰,郑浣琪,魏协宇,高增梁.外压模拟计算中圆筒初始几何偏差描述方法的研究[J].机械工程学报.
[38]宋明宽.陈寅恪文学思想研究[D].辽宁大学,文艺学,2012,硕士.
[39]赵帅.面向弹箭机械加工车间生产调度系统的研究[D].沈阳理工大学,机械制造及其自动化,2012,硕士.
[40]张健沛,刘建东,杨静.基于Web的日志挖掘数据预处理方法的研究[J].计算机工程与应用,2003,10:191-193.
[41]祝年贵.两种价格理论内涵的对比分析[J].经济体制改革.2001(04)
[42]王睿.陕西地区农村钢结构住宅的空间标准化研究[D].西安建筑科技大学,建筑学,2013,硕士.
[43]黄颖.基于网络治理理论的城市基层社会管理创新研究[D].华中师范大学,行政管理,2012,硕士.
[44]王树伦.生物炭和腐植酸对柴油和汽油在黄土上吸附行为影响的研究[D].西北师范大学,分析化学,2013,硕士.
[45]周雨辰.北京平衡力量软件公司发展战略研究[D].首都经济贸易大学,工商管理(专业学位),2014,硕士.
[46]眭建华.室内装饰织物设计的研究与产品开发[D].苏州大学,纺织工程,2003,硕士.
[47]扈本娜.浅层电震非线性反演理论的研究[D].石家庄经济学院,地质工程,2013,硕士.
[48]WellmanKondowe.Political Discourse Analysis:a Systemic Functional Study of Bingu Wa Mutharika’s Inaugural Address[D].华中师范大学,ForeignLinguistics&AppliedLinguistics,2014,硕士.
[49]吴昭谦.建国后群众找矿的回顾[J].江淮文史.1998(01)
[50]赵聪.文献计量学视角下的中国艺术门类国际文献状态研究[D].浙江工业大学,科学技术哲学,2012,硕士.

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