海洋细菌Catenovulum sp. DP03右旋糖苷酶的研究

海洋细菌Catenovulum sp. DP03右旋糖苷酶的研究

作者:师大云端图书馆 时间:2018-08-14 分类:硕士论文 喜欢:10
师大云端图书馆

【摘要】右旋糖苷酶(Dextranase,EC3.2.1.11)是专一性水解α-1,6-糖苷键的一种葡聚糖水解酶,主要用于水解制糖工业中由右旋糖酐,降低糖汁粘度和用于口腔牙菌斑的治疗。本实验从连云港海域筛选鉴定了一株产右旋糖苷酶的海洋细菌,对其产生的右旋糖苷酶进行纯化和性质研究,并研究探讨了该酶对变异链球菌生物膜的作用。1.产右旋糖苷酶海洋细菌DP03的筛选鉴定及产酶条件的研究从连云港海域分离得180株海洋细菌,其中4株产右旋糖苷酶,经复筛选择酶活力较高的菌株DP03进一步研究。菌株DP03呈短杆状,扫描电镜下该菌大小约为0.3~0.5μm×0.7-1.0μm,菌株DP03在4℃不生长,37℃生长,最适生长温度为30℃,无氯化钠不生长,最适生长氯化钠浓度为2%,该菌株尿素酶、接触酶、氧化酶、甲基红反应呈阳性,赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶、V-P、吲哚实验呈阴性,能水解淀粉和油脂,能液化明胶、能利用纤维二糖、葡萄糖、麦芽糖、阿拉伯糖和蔗糖;综合形态学鉴定、生理生化特征和16SrRNA基因的比对,将其鉴定为Catenovulumsp.DP03;Catenovulumsp.DP03细胞中含有34.56%十六碳饱和脂肪酸和1.26%的ω9□-十八碳单不饱和脂肪酸,含量分别为最高和最低;Catenovulumsp.DP03的G+Cmol%为39.53%;将Catenovulumsp.DP03与Catenovulumagarivorans进行核酸杂交,结果显示两者的同源性为17.24%-21.43%,该数据表明Catenovulumsp.DP03可能是Catenovulum属的一个新种;对Catenovulumsp.DP03产右旋糖苷酶的条件展开研究,结果表明其在28h、30℃、pH8.0、25%装液量和1%浓度右旋糖苷T20诱导物下为最佳产酶条件,最佳碳、氮源分别为马铃薯淀粉和蛋白胨。2.海洋细菌DP03右旋糖苷酶的纯化及性质研究Catenovulumsp.DP03发酵上清液经超滤、乙醇沉淀、硫酸铵盐析和离子交换层析纯化得到右旋糖苷酶(Cadex)。该酶的分子量为75kDa;Cadex的最适作用温度和pH值分别为40℃和8.0,30℃以下温度及pH5-11保持稳定;底物特异性研究发现Cadex特异性水解α-1,6-糖苷键,催化产物研究表明Cadex水解右旋糖酐T70的主要产物是异麦芽三糖、异麦芽四糖和异麦芽五糖,因此,Cadex是专一性水解葡聚糖中α-1,6-糖苷键的内切型右旋糖苷酶;Cadex与纯化的Penicillium右旋糖苷酶比较酶活力,在Cadex的最适催化条件时,Cadex的比活力大约是Penicillium右旋糖苷酶的五倍,而在Penicillium右旋糖苷酶的最适催化条件时,Cadex的比活力大约是Penicillium右旋糖苷酶的两倍;Mn2+、Sr2+、0.1%的苯甲酸钠和5%的乙醇对右旋糖苷酶有一定的的激活作用,而Cu2+、Zn2+、Ni2+、Co2+、Fe3+和0.1%的氟化钠酶活性有不同程度地抑制作用;Cadex动力学研究表明Km为0.92mg/mL,vmax为102.8μmolIMO/mL·min;MALDI-TOFMS分析结果表明Cadex与现有报道的右旋糖苷氨基酸序列同源性较低;圆二色谱分析结果表明Cadex是一个良好折叠的蛋白,二级结构中含有较多的α-螺旋和β-折叠。3.海洋细菌DP03右旋糖苷酶Cadex对变异链球菌产生的生物膜的作用结晶紫染色法测量Cadex抑制变异链球菌产生生物膜形成的有效作用浓度(MBIC)和清除成熟生物膜的有效作用浓度(MBRC),结果表明MBIC90和MBRC50所需的Cadex浓度分别为30U/ml和20U/ml。不同浓度的Cadex对变异链球菌的生长没有作用。MBIC90浓度下扫描电镜结果表明Cadex可有效阻止变异链球菌形成生物膜结构。Cadex对已形成的变异链球菌生物膜也有较好的水解效果,干重法测量酶处理前后的生物膜清除情况,结果表明已形成的生物膜在24h内经MBRC50Cadex处理3次(共30min)的清除率接近30%。
【作者】蔡阮鸿;
【导师】王淑军;刘兆普;
【作者基本信息】南京农业大学,海洋生物学,2013,硕士
【关键词】右旋糖苷酶;Catenovulumsp.;海洋细菌;纯化;变异链球菌;生物膜;

【参考文献】
[1]刘超男.基于形式概念分析数学理论的《伤寒论》方药知识发现[D].广州中医药大学,中医学(专业学位),2013,硕士.
[2]王帆.L猎头公司福田项目人员激励研究[D].中国地质大学(北京),项目管理,2013,硕士.
[3]杜继霞.新泰市基层医改调研报告[D].郑州大学,公共管理(专业学位),2013,硕士.
[4]秦韶贵.遵义市农村人力资源开发现状及对策研究[D].华中师范大学,农村与区域发展,2014,硕士.
[5]成小云,任咏川.IASB/FASB概念框架联合项目中的资产概念研究述评[J].会计研究,2010,05:25-29.
[6]唐小平.烤烟漂浮育苗技术的研究[D].广西大学,植物营养学,2004,硕士.
[7]刘晓娜.基于VB的生产资料管理系统的研究与设计[D].吉林大学,软件工程,2012,硕士.
[8]付江涛.盐酸沃尼妙林合成及纯化工艺研究[D].河北科技大学,化学工程与技术,2013,硕士.
[9]邵娟.我国海外R&D主体结构及其培育研究[D].南京财经大学,国际贸易学,2012,硕士.
[10]裴苇玲.现代公司中实际控制权的配置与制衡研究[D].武汉理工大学,西方经济学,2012,硕士.
[11]彭彦.IL-18在原核细胞和真核细胞中的表达和纯化[D].重庆医科大学,组织胚胎学,2004,硕士.
[12]刘媛元.乌鲁木齐市少儿体育舞蹈培训班开展现状的调查研究[D].新疆师范大学,体育教育训练学,2013,硕士.
[13]欧阳杰.隧道型钢钢架喷射混凝土支护安全性评价方法研究[D].北京交通大学,2012.
[14]李章民.激光离子源的光束诊断与双束打靶实验方案的实现[D].中国科学院研究生院(近代物理研究所),核能与核技术工程,2014,硕士.
[15]王玉.链式STATCOM在系统电压不平衡环境下控制策略的研究[D].北京交通大学,电气工程,2012,硕士.
[16]姜燕.纳米羟基磷灰石表面阿伦膦酸钠和Ⅰ型胶原蛋白对成骨细胞形态和增殖的影响[D].福建医科大学,口腔修复学,2014,硕士.
[17]谷翠军.基于Modbus与ZigBee的远程冗余过程控制系统开发[D].西南交通大学,机械电子工程,2014,硕士.
[18]侯晓轩.地铁障碍物检测装置的设计及关键技术研究[D].北京交通大学,机械工程(专业学位),2013,硕士.
[19]郑凌冰,孙国峰.常用螺栓紧固一致性的研究及应用[J].科技创新与应用,2013,26:44.
[20]郑升,马连川,胡华,曹源.改进型铁路信号安全计算机平台结构[J].中国铁路,2014,03:30-33.
[21]董芳菲.论我国民事抗诉制度的完善[D].辽宁大学,诉讼法学,2012,硕士.
[22]刘伟伟.面向广义需求的产品模块划分与评价研究[D].上海交通大学,管理科学与工程,2014,硕士.
[23]郑明远.浙江省民营企业出口贸易向对外投资转型研究[D].浙江大学,2014.
[24]魏中青,尹中荣,孙照富,张睿,孔祥伟.电子束熔炼炉过程参数远程监测系统的研发[J].冶金自动化,2014,03:85-88.
[25]王超.文冠果在山西黄土残垣沟壑区引种试验初步研究[D].北京林业大学,工程绿化,2013,硕士.
[26]王志远.锂离子电池高容量富锂层状正极材料制备与包覆改性研究[D].天津大学,2014.
[27]杨勇.三氧化二锑复合颗粒的制备、表征及应用[D].北京化工大学,化学工程与技术,2013,硕士.
[28]王双.当代中国文化生态失衡问题研究[D].北京交通大学,2014.
[29]夏英.激素对人子宫内膜β1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ表达的影响及与EGFR信号通路相关性研究[D].大连医科大学,生物化学与分子生物学,2012,硕士.
[30]高鹏,王建全,甘德强,韩祯祥.电力系统失步解列综述[J].电力系统自动化,2005,19:90-96.
[31]谭姝.书画印元素在视觉传达设计中的应用与发展[D].燕山大学,设计艺术学,2014,硕士.
[32]李乔.融合型内容分发网络关键技术研究[D].哈尔滨工业大学,2014.
[33]钱海燕.高校学生公寓“物”的功能性与“人”的审美取向初探[D].大连工业大学,设计艺术学,2009,硕士.
[34]罗名海.城市规划数字化及其综合研究框架[J].武汉大学学报(工学版),2003,03:26-30.
[35]李洋.工作中即时信息沟通开放度研究[D].首都经济贸易大学,企业管理,2014,硕士.
[36]胡浩.小商品批发市场选址及交通条件研究[D].重庆交通大学,交通运输工程,2011,硕士.
[37]颜智敏.现行小学语文教科书城市偏向研究[D].湖南师范大学,课程与教学论,2014,硕士.
[38]田露.纳米催化介质阻挡放电对X-BR染料废水的降解机理研究[D].东华大学,环境工程(专业学位),2014,硕士.
[39]谢菲菲.城市交通碳排放量影响因素与低碳交通发展研究[D].北京交通大学,产业经济学,2013,硕士.
[40]高成南.基于ARM的激光粒度仪嵌入式控制系统[D].济南大学,信号与信息处理,2012,硕士.
[41]宁静.一类生物模型分歧解的存在性和稳定性分析[D].陕西师范大学,应用数学,2004,硕士.
[42]钱荣超.复合笼条感应电动机三维热应力场与起动性能计算与分析[D].哈尔滨理工大学,电机与电器,2012,硕士.
[43]李广军.东江湖区域公益林主要生态功能研究[D].中南林业科技大学,林业(专业学位),2013,硕士.
[44]李彦.现代散打与泰拳拳腿技术运用情况对比研究[D].西安体育学院,民族传统体育,2013,硕士.
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[46]金亚楠.改革开放以来中国特色社会主义生态文明建设研究[D].内蒙古大学,马克思主义理论,2014,硕士.
[47]侯俊国.土地整治对农村主要资源要素整合的影响[D].西南大学,土地资源管理,2013,硕士.
[48]李志雄.新型ZnO基薄膜晶体管的研制及其性能优化[D].湖北大学,微电子学与固体电子学,2012,硕士.
[49]任钦正.动车组主动运维服务状态监测与故障诊断技术研究与应用[D].北京交通大学,2014.
[50]王潇童.大连市农村社区建设的现状与对策研究[D].大连理工大学,公共管理(专业学位),2012,硕士.

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