猪流行性腹泻病毒S2基因片段重组猪痘病毒的构建和免疫原性分析

猪流行性腹泻病毒S2基因片段重组猪痘病毒的构建和免疫原性分析

作者:师大云端图书馆 时间:2018-07-11 分类:硕士论文 喜欢:938
师大云端图书馆

【摘要】猪流行性腹泻(Porcineepidemicdiarrhea,PED)是一种猪的肠道传染病,能引起感染猪出现呕吐、水样腹泻等症状,对哺乳仔猪具有较高致死率,给养猪业带来严重的经济损失。在我国,目前已有商品化的PED疫苗在广泛使用,但并未有效控制该病在我国的流行,且免疫效力有待提高。因此,研制一种更安全有效的疫苗十分必要。S蛋白位于PEDV的表面,含有病毒主要的抗原决定簇,在免疫反应中可以识别靶细胞上对应的受体,使病毒粒子结合于受体,通过膜融合使病毒粒子侵入宿主细胞,从而诱导宿主机体产生中和抗体,是研制PED疫苗的靶蛋白。为研制更安全有效的新型PED疫苗,利用RT-PCR方法扩增出PEDVS基因的第1360bp-1914bp基因片段(S1)和第250bp-831bp基因片段(S2),分别将其克隆至转移载体pUSG11/P28中构建重组转移载体pUSG11/P28-S1和pUSG11/P28-S2,脂质体介导重组转移载体与SPV基因组发生同源重组,经eGFP显性基因的筛选分别获得重组病毒rSPV-S1和rSPV-S2,并以rSPV-S1免疫小鼠制备抗体。结果显示,通过病毒中和试验证实小鼠体内产生抗PEDV的中和抗体;利用PCR、Westernblotting和IFA三种方法从rSPV-S2感染的PK-15细胞中均检测到表达的S2蛋白。因此,该重组猪痘病毒今后有望成为PED新型疫苗的候选疫苗。本研究利用RT-PCR方法扩增出PEDVS基因的第250bp-831bp基因片段(S2),将其克隆至转座质粒pFastBacHTA中,构建含S2基因片段的重组转座质粒pFastBacHTA-S2,并转化至E.coliDH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选和PCR方法鉴定得到含S2基因片段的重组穿梭载体(rBacmid-S2)DNA,经脂质体转染至Sf9昆虫细胞中,得到重组杆状病毒vBacmid-S2。利用SDS-PAGE和Westernblotting鉴定vBacmid-S2在Sf9昆虫细胞传3代后的细胞沉淀,结果显示在24kD处出现目的蛋白条带,IFA检测结果显示感染vBacmid-S2勺昆虫细胞出现特异性的绿色荧光。以上结果表明PEDV的S2基因片段通过杆状病毒得到有效表达,为研制PED亚单位疫苗提供了诊断抗原。
【作者】武存霞;
【导师】范红结;
【作者基本信息】南京农业大学,预防兽医学,2013,硕士
【关键词】猪流行性腹泻病毒;纤突蛋白基因;重组杆状病毒;重组痘病毒;疫苗;

【参考文献】
[1]夏瑛.“98年二度梅”暴雨与非线性亚临界对称不稳定诊断分析和数值试验的初步研究[D].南京气象学院,气象学,2004,硕士.
[2]席军良.用人导向及其制度创新研究[D].华中师范大学,国家治理与考选制度,2013,硕士.
[3]胡融.江西省经济发展与教育水平的关系研究[D].南昌大学,教育经济与管理,2012,硕士.
[4]隋林林.中超球队与亚洲其他俱乐部球队亚冠比赛三个重要时刻数据的对比分析[D].扬州大学,体育教育训练学,2012,硕士.
[5]陈翀,谭克虎.法国铁路转换经营机制及多元化经营问题研究[J].经济问题探索,2014,02:131-136.
[6]肖奔.从清朝民国渡志看湖南义渡[D].湖南师范大学,中国古代史,2014,硕士.
[7]史建国,侯宏旭,飞龙.基于词典、规则的斯拉夫蒙古文词切分系统的研究[J].中文信息学报,2015,01:197-202.
[8]娄瑜.论我国食品安全监管模式及法律完善[D].宁波大学,经济法学(专业学位),2013,硕士.
[9]潘乐真,鲁国起,张焰,俞国勤,祝达康.基于风险综合评判的设备状态检修决策优化[J].电力系统自动化,2010,11:28-32+66.
[10]陈兮.论传统中国画的用笔[D].南京师范大学,中国画,2012,硕士.
[11]盈利.创意产业集群网络结构研究[D].北京交通大学,2008.
[12]汪艳瑜.“两边蹲”婚姻形式与家庭内部性别关系研究[D].安徽大学,社会学,2014,硕士.
[13]段萍.ICU护士睡眠质量、工作疲溃及生活质量之间的相关性研究[D].吉林大学,护理学,2013,硕士.
[14]胡永祥.一部服务于山西经济的志书——评《山西通志·气象志》[J].沧桑.2000(Z1)
[15]袁连海,陶宏才.基于数据仓库的数据转移方法[J].电脑开发与应用,2002,02:4-5+8.
[16]李溪.新时期陈云党建思想研究[D].辽宁大学,中共党史,2012,硕士.
[17]王建国,文正秋.计算机网络技术在转炉生产中的应用[J].冶金自动化,2003,02:65-67.
[18]李远钦,牟永光,吴律.Radon变换在VSP波场分离中的应用[J].石油地球物理勘探,1990,06:653-661+761.
[19]王旭.灾难性事件中摄影图片报道的双重生产逻辑[D].安徽大学,新闻学,2013,硕士.
[20]范子果.多核平台下CPU优先级调度算法的研究与模拟[D].华东师范大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[21]王逢娟.基于Petri网的分布式多媒体同步技术研究[D].兰州理工大学,计算机软件与理论,2013,硕士.
[22]张招娣.纳米颗粒复合杂化整体固定化酶反应器的制备及应用[D].华东理工大学,分析化学,2014,硕士.
[23]孟阳.银行信用风险计量模型的分析与借鉴[D].东北财经大学,金融学,2003,硕士.
[24]罗甜萍.湖南广昊会计师事务所非审计服务拓展研究[D].湖南大学,会计,2013,硕士.
[25]冯志平.鄂尔多斯集团公司学习型组织的创建研究[D].内蒙古大学,工商管理,2013,硕士.
[26]李书杰.尼采《悲剧的诞生》的身体维度阐释[D].华东师范大学,外国哲学,2013,硕士.
[27]韩海豹.块体纳米晶金属材料价电子及费米能级研究[D].沈阳理工大学,物理电子学,2012,硕士.
[28]于涛.小学低年级学生学校适应早期预测因素和保护性因素研究[D].东北师范大学,发展与教育心理学,2014,博士.
[29]李鹏.关于高职院校营销策略的研究[D].华中师范大学,工商管理(专业学位),2014,硕士.
[30]满照.平度宗家庄木版年画现状调查与研究[D].鲁东大学,美术学,2013,硕士.
[31]袁国定,陈炜,岳陆游,仲志刚,方禾,朱国璋.基于装配模型的车辆覆盖件拉延模结构变形设计[J].农业机械学报.2003(06)
[32]林济铿,刘露,张闻博,刘劲松,王刚.基于随机模糊聚类的负荷建模与参数辨识[J].电力系统自动化,2013,14:50-58.
[33]李悦.天津市双口生活垃圾卫生填埋场渗沥液处理工程研究[D].天津大学,环境工程,2013,硕士.
[34]刘红.SVCV糖蛋白在昆虫细胞中的表达及SVCV和IHNV抗体库的筛选[D].华中农业大学,水产养殖,2014,硕士.
[35]赛米·吾布力.武汉市城市房屋拆迁补偿政策演变研究(1980-2011)[D].华中科技大学,行政管理,2013,硕士.
[36]严香叶.绒线在椅凳类家具设计中的应用研究[D].中南林业科技大学,设计艺术学,2013,硕士.
[37]董欢欢.小型无人机三维可视化地面监控系统研究[D].大连理工大学,机械电子工程,2013,硕士.
[38]俞悦.民事监护责任与未成年人犯罪[D].上海社会科学院,民商法学,2012,硕士.
[39]张印鹏.流动人口生活满意程度及影响因素的研究——基于中国收入分配研究院2009年的调查数据[J].商,2014,21:55.
[40]赵旭涛.旋转部件动态参数无线测试系统设计[D].中北大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[41]茹婧.基于碳纳米管纳米复合材料的生物电化学传感器研究[D].西北师范大学,分析化学,2013,硕士.
[42]罗莹莹.SUMOylation对SCA3/MJD转基因果蝇表型的影响及机制研究[D].中南大学,临床医学,2014,博士.
[43]张凡.家庭德育对高中生思想品德的影响研究[D].苏州大学,学科教学,2012,硕士.
[44]余欢.基于碳纳米管和ATP催化的有机反应新体系研究[D].湖南大学,2012.
[45]高二平,王文中.石墨烯/Bi_2WO_6可见光催化材料合成及增强的光催化性能[A].中国化学学会、中国太阳能学会.第十三届全国太阳能光化学与光催化学术会议学术论文集[C].中国化学学会、中国太阳能学会:,2012:1.
[46]王晗,邓小军,李珂.高速列车节能运行策略实验验证方法[J].电气应用,2015,04:131-135.
[47]张俊兴.整车环境下商用车驾驶室静态拓扑优化设计[D].吉林大学,固体力学,2013,硕士.
[48]王静.中学生核心自我评价、班级环境和主观幸福感之间的关系研究[D].湖北大学,发展与教育心理学,2011,硕士.
[49]田守明.鹤岗市非法集资问题研究[D].哈尔滨工业大学,高级管理人员工商管理,2013,硕士.
[50]郑渤龙.基于嵌入式多核环境的检查点系统研究与实现[D].华中科技大学,计算机技术,2013,硕士.

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