葡萄黑色芽变品种巴西(Brazil)果皮颜色突变的分子机制初探

葡萄黑色芽变品种巴西(Brazil)果皮颜色突变的分子机制初探

作者:师大云端图书馆 时间:2017-11-24 分类:硕士论文 喜欢:418
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【摘要】本研究以白色品种意大利(Italia)、红色品种红高(Benitaka)和黑色品种巴西(Brazil)为试验材料,检测了VvmybA1的基因型以及VvmybA1和UFGT基因在不同着色时期的表达量,克隆了意大利、红高和巴西中的VvmybA1完整的启动子和编码区序列,并进行功能验证,以期探究黑色芽变品种巴西果皮颜色变化的原因。具体研究结果如下:1.为了鉴定意大利、红高和巴西之间的亲缘关系,筛选了22对多态性较好的SSR引物进行SSR分析。结果表明:22对SSR引物在三种葡萄中扩增出的等位基因条带大小完全一致,表明意大利、红高和巴西之间的亲缘关系极为紧密,从而验证了红高和巴西均为意大利的芽变品种。2.PCR结果发现在VvmybA1位点,意大利含有纯和的VvmybA1a(1559bp)、红高和巴西含有杂合的VvmybA1a和VvmybA1BEN(926bp)。采用荧光定量技术分析VvmybA1和UFGT在三种材料中的相对表达情况,发现二者在白色品种意大利中几乎检测不到,在有色品种中表达模式一致,即从着色后开始表达,并且在黑色品种中表达量高于红色品种。3.从三个品种中克隆了VvmybA1完整的启动子和编码区序列,用BioXM2.6同已知序列进行比对,并且利用PlantCare和Place在线分析软件进行启动子预测,发现在红高和巴西的启动子区域存在一个碱基的差异,且差异位点恰好在3-AF1bindingsite这个光响应原件中。将三种材料的VvmybA1启动子和编码区连接到PYH4215植物表达载体中,并且切除35S启动子,使用农杆菌介导法介导重组载体转化汤普森无核(CentennialSeedless)(葡萄体细胞胚,弱光培养7-10天后,导入巴西与红高VvmybA1的体细胞胚有红色斑点产生,导入意大利VvmybA1的体细胞胚无变化。说明特异性等位基因VvmybA1BEN能够恢复VvmybA1的转录功能。
【作者】江楠;
【导师】陶建敏;
【作者基本信息】南京农业大学,果树学,2013,硕士
【关键词】巴西;红高;颜色突变;VvmybA1BEN;

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