甜瓜嫁接亲和性连锁分子标记研究

【摘要】本试验以与南瓜类型砧木(‘壮士’)嫁接亲和性差异明显的两个甜瓜自交系品种(85-1和B717)为亲本,配制F2和F2：3分离家系群体；利用分离群体分组分析法(BulkedSegregantAnalysis,BSA)构建亲和性优差池,结合SSR(SimpleSequenceRepeat)分子标记技术进行与甜瓜嫁接亲和性相关的分子标记研究。主要研究结果如下：1.甜瓜自交系品种85-1和自交系B717品种杂交产生Fl代,F1代经自交再产生F2代,F2代包括126个单株。将F2单株分别与南瓜砧木‘壮士’嫁接(采用劈接法),嫁接亲和性调查发现：甜瓜接穗85-1与南瓜砧木‘壮士’的亲和性表现优(0级),嫁接株成活率高达99%,坐瓜率为100%,果实甜度无变化,综合各指标与对照相当；而B717嫁接与自根苗相比成活率仅为40%(3级),坐瓜率56%,甜度比对照降低2.8%、整体表现较差。表明甜瓜自交系85-1与南瓜砧木‘壮士’的嫁接亲和性较高,而B717与南瓜砧木‘壮士’的嫁接亲和性较差。F3家系中各接穗得到嫁接苗(F2对应单株作对照),其嫁接亲和性指标(成活率、坐瓜率、果实甜度)表现出一定的分离。2.搜集甜瓜接穗中表现亲和性优(0级)和亲和性差(3级)的对应F2植株DNA各10份,采用改良CTAB法提取甜瓜基因组DNA,经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,提取结果显示DNA均主带清晰,质量较好,可用于PCR反应。并分别随机各取6份高纯度DNA单独等量混合,利用BSA法构建甜瓜嫁接亲和性优、差DNA池各3个,用于引物多态性的筛选。对甜瓜SSR反应体系进行优化选择,确定了SSR最优反应体系为25μL：2×EasyTaqPCRMasterMix12.5μL,DNA模板1μL,上下引物各1μL,9.5μLddH2O补齐；PCR反应程序为：94℃预变性3min,94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环,72℃再延伸5min.PCR扩增结果用1.5%琼脂糖凝胶120V,90min电泳检测,结果稳定可靠。3.使用葫芦科遗传连锁图谱上发表的750对SSR分子标记引物扩增,最终筛选出382对引物在两个甜瓜材料之间具有多态性,其中9对引物分别在嫁接亲和性优差DNA池中扩增出差异性片段。将这些标记用于F2群体的扩增验证,最终获得2个多态性标记M103和CMN-0616;经计算,两个标记与甜瓜嫁接亲和性的遗传连锁距离分别为9.3cM和17.6cM。本试验运用SSR分子标记技术,筛选出两个标记与甜瓜嫁接亲和性基因连锁相关,为嫁接亲和性甜瓜种质资源筛选提供了较为快速有效的方法,对促进甜瓜嫁接亲和性分子植物育种进程具有积极作用。
【作者】陈亚丽；
【导师】朱为民；郭世荣；
【作者基本信息】南京农业大学，蔬菜学，2013，硕士
【关键词】甜瓜；嫁接；亲和性；SSR分子标记；

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