与兔出血症病毒相互作用的兔肝脏截短膜突蛋白的鉴定

【摘要】兔出血症病毒(Rabbithemorrhagicdiseasevirus,RHDV)属于嵌杯状病毒科（Caliciviridae）兔病毒属（Lagovirus），它可引起兔出血症(Rabbithemorrhagicdisease,RHD)。1984年RHD在我国江苏省首次爆发，全世界地方性流行，给养兔行业造成巨大的经济损失。目前为止，RHDV致病机理尚不明确，且缺乏稳定繁殖的细胞系，这在较大程度上阻碍了RHDV的研究。膜突蛋白（Moesin，MSN）表达于细胞膜内面，是细胞骨架与细胞膜之间的连接蛋白，在结构和功能上调控细胞膜区域的整合和稳定性，从而对细胞黏附、形态、分化、运动等起到重要调节作用。Moesin是与RHDV相互作用的蛋白，是病毒致病机理研究的重要蛋白之一，但RHDV相互作用的Moesin作用位点尚不清楚。本研究通过截短表达Moesin蛋白，进行ELISA和血凝试验验证，以进一步揭示与RHDV相互作用的Moesin蛋白位点，进而为RHDV的感染机制研究奠定基础。本研究经过两次引物设计将Moesin（1470bp）截短成26个基因片段，进行PCR扩增，双酶切后亚克隆至pGEX-6p-1载体，转化BL21Star(DE3)plysS表达菌株，诱导截短蛋白的可溶性表达，纯化得到19个连续的截短蛋白，其大小在23-75aa之间。以8HAURHDV与纯化的截短蛋白共孵育为包被抗原，以抗RHDV阳性血清为一抗，以山羊抗兔酶标抗体为二抗，进行ELISA验证截短的Moesin蛋白与RHDV的相互作用，统计分析结果显示包被的rMII-2(21-50位氨基酸)、rMII-12(263-290位氨基酸)抗原的OD450nm值与其他截短蛋白差异显著，表明Moesin蛋白的rMII-2截短蛋白和rMII-12截短蛋白与RHDV有相互作用；纯化的截短蛋白与8HAURHDV中和后进行血凝试验，结果表明10μg截短蛋白rMII-2及5μg截短蛋白rMII-12可以中和8HAURHDV的血凝活性，验证了Moesin蛋白的rMII-2截短蛋白和rMII-12截短蛋白与RHDV有相互作用。本试验通过截短表达得到了19个截短可溶的Moesin蛋白，ELISA及血凝试验验证了Moesin的rMII-2(21-50位氨基酸)及rMII-12(263-290位氨基酸)与RHDV存在相互作用，精确定位了与RHDV相互作用的Moesin蛋白位点是Moesin蛋白21-50位氨基酸和263-290位氨基酸，为进一步研究RHDV的感染机制奠定了基础。
【作者】陈淑慧；
【导师】曲连东；崔玉东；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，预防兽医学，2014，硕士
【关键词】兔出血症病毒；截短蛋白；酶联免疫吸附试验；血凝试验；相互作用；

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