TOLL样受体4在小鼠肺部衣原体感染过程中作用的研究

TOLL样受体4在小鼠肺部衣原体感染过程中作用的研究

作者:师大云端图书馆 时间:2016-10-22 分类:硕士论文 喜欢:3546
师大云端图书馆

【摘要】沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis,C.trachomatis)所引起的疾病是当前全世界严重公共卫生问题之一,但是其感染的免疫机制仍然没有阐明。Toll样受体4作为被人类首个发现的哺乳动物体内的Toll样蛋白,是Toll样受体家族最重要的蛋白之一,人们对TLR4的研究大多是关注其在先天免疫方面所发挥的作用。但是在衣原体感染过程中Toll样受体4所发挥的作用却尚不清楚。本研究拟在建立沙眼衣原体肺部呼吸道感染模型的基础上,对沙眼衣原体在C3H/HeN小鼠,C3H/HeJ小鼠(TLR4基因位点突变)肺感染过程中肺部衣原体载量,肺部炎症反应,体重变化,存活率等各个方面进行研究,以及免疫机制的初步探讨,结果如下:1.C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠巨噬细胞体外刺激实验研究。显示C3H/HeN小鼠巨噬细胞由于Toll样受体4通路完整产生了更多的促炎症细胞因子TL-6。2.C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原体之后体重变化的研究。取6-8周龄的C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠,滴鼻感染5×103IFU的沙眼衣原体鼠肺炎菌株(Chlamydiamuridarum,Cm)。监测两种不同小鼠在感染后不同天数的体重变化,发现C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原体后体重下降幅度明显大于正常小鼠,并且只有极少数C3H/HeJ小鼠能恢复至正常体重。3.C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原体之后存活率研究。发现C3H/HeN小鼠在感染相同量衣原体之后存活率显著高于基因突变小鼠,并且大部分C3H/HeN小鼠能在感染后第10天开始逐渐恢复健康。4.C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原体之后肺部衣原体载量的研究。结果显示C3H/HeJ小鼠含有更高载量的衣原体,并且正常小鼠衣原体在感染后第12天出现下降趋势。5.C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原体之后肺组织病理变化的研究。通过小鼠肺组织H&E染色显示,两种不同小鼠在感染衣原体之后相同时间,C3H/HeJ小鼠出现了更加严重的炎症浸润。6.C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原体之后肺组织中髓过氧化物酶(MPO)的研究。通过化学发光免疫分析法结果显示,Toll样受体4基因突变小鼠在感染沙眼衣原体之后的第3天和第7天肺组织中显著的嗜中性粒细胞的渗透。7.C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原体之后肺泡灌洗液中性粒细胞研究。实验结果表明,Toll样受体4基因突变小鼠在感染后第3天和第7天肺泡灌洗液中都含有更高的中性粒细胞百分比,在感染后第7天尤其显著。8.C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原体之后CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)动态变化研究。实验结果显示,两种不同小鼠在感染沙眼衣原体后Treg细胞所占百分比没有显著变化,但是C3H/HeJ小鼠Treg细胞的绝对细胞数却在第3天显著下降。9.C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠Th-1免疫反应的研究。结果两种小鼠IFN-γ蛋白水平在感染之后各天也没有显著差异,说明两种不同小鼠在感染沙眼衣原体后Th-1免疫反应并没有起关键作用。10.C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠Th-2免疫反应的研究。结果显示两种小鼠感染沙眼衣原体之后Th-2免疫反应并没有差异。11.C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠IL-17/Th-17免疫反应的研究。通过RT-PCR的方法检测两种小鼠肺组织中IL-6mRNA,IL-17mRNA水平的表达,通过流式细胞仪检测脾脏CD4+CD44+IL-17+在淋巴细胞所占比重,以及CD4+CD44+IL-17+的平均荧光强度(MFI),最后进一步通过ELISA方法检测IL-17在两种不同小鼠蛋白质水平的表达情况。实验结果显示,Toll样受体4基因突变小鼠IL-6mRNA,IL-17mRNA水平,CD4+CD44+IL-17+在淋巴细胞所占比重以及CD4+CD44+IL-17+的平均荧光强度都低于正常小鼠,并且蛋白水平同样低于正常小鼠。说明了IL-17/Th-17的免疫反应需要TLR4信号通路。12.C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原体之后Th-17相关趋化因子表达研究。通过RT-PCR的方法检测两种小鼠肺组织中KC,MIP-2mRNA水平的表达。结果显示,C3H/HeN小鼠KC的mRNA的表达水平在感染之后第3天显著高于C3H/HeJ小鼠,并且C3H/HeN小鼠的MIP-2mRNA的表达水平在感染之后第7天也高于C3H/HeJ小鼠,说明IL-17下游的的炎症相关趋化因子的表达趋势与IL-17/Th-17免疫反应趋势基本吻合。综上所述:C3H/HeN小鼠和C3H/HeJ小鼠在肺部感染沙眼衣原体之后,Toll样受体4基因突变小鼠体重下降显著,存活率低,并且肺组织中衣原体载量显著高于正常小鼠,肺部出现严重的炎症反应,大量中性粒细胞渗透肺组织和肺泡中,并且尽管CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在所占百分比未变化的前提下,绝对细胞数发生了显著的降低,同时Toll样受体4基因突变抑制小鼠IL-17/Th-17反应的免疫应答,但是并没有抑制小鼠Th-1免疫反应和Th-2免疫反应。揭示了TLR4在小鼠感染沙眼衣原体时发挥着保护的作用,并且与IL-17/Th-17免疫应答受到抑制密切相关。
【作者】杨涛;
【导师】赵秀云;祁高富;周晓辉;
【作者基本信息】华中农业大学,微生物学,2014,硕士
【关键词】沙眼衣原体鼠肺炎菌株;C3H/HeJ小鼠;CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞;IL-17/Th-17;

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