猪APOA2和SEPW1基因的转录调控分析

猪APOA2和SEPW1基因的转录调控分析

作者:师大云端图书馆 时间:2016-08-08 分类:硕士论文 喜欢:4158
师大云端图书馆

【摘要】猪,是我们获取动物蛋白质的主要来源。猪肉品质好坏直接影响着口感。随着生活水平的提高,人们对猪肉品质的要求也有所提高。因此,通过分子育种的方法改善猪的肉质性状是当前比较热门的一项研究课题。为此,我们在分子水平上对猪的脂肪相关基因APOA2和肌肉相关基因SEPW1进行了相关性研究,主要集中在基因的启动子区域进行转录调控分析。所得的结果如下所述:(1)猪APOA2和SEPW1基因在猪不同组织中表达情况的研究。主要采用实时定量PCR的方法进行检测,并建立了组织表达谱。结果为:猪APOA2基因主要在肝脏中表达,并且表达量很高;在脂肪中也有微量的表达;在其它组织中表达量极低,可忽略不计。猪SEPW1基因在各个组织中均有不同程度的表达,而在心脏和腓肠肌组织中表达量最高,在脾脏中表达量最低。(2)猪APOA2和SEPW1基因5’侧翼调控序列的克隆。我们参照NCBI上提供的基因5’侧翼调控序列进行引物设计,以猪基因组DNA为模板,克隆了猪APOA2基因1919bp和SEPW1基因1993bp的序列。序列克隆结果与NCBI上提供的序列进行比对,相似度均达到99%。(3)猪SEPW1基因启动子CpG岛甲基化情况研究。通过MethPrimer软件预测猪APOA2和SEPW1基因启动子区域的CpG岛,在APOA2基因启动子序列中没有发现CpG岛,而SEPW1基因启动子序列中有3个CpG岛。对位于SEPW1基因启动子的-751–483区域的CpG岛进行了克隆分析,甲基化水平均较低。(4)启动子活性研究。我们构建了APOA2基因启动子区域的7个不同长度的双荧光素酶报告基因载体,以及SEPW1基因启动子区域的6个不同长度的双荧光素酶报告基因载体。转染细胞,检测荧光活性,发现APOA2基因启动子的-208–21、-813–209这两个区域分别能够独立起始转录,SEPW1基因核心启动子位于-443-+27区域内。(5)转录因子结合位点的分析预测。我们对可能含有正调控元件的区域继续进行缺失分析,并结合生物信息学方法,得出在APOA2基因-601–565区域内含有GATA1转录因子结合位点,在SEPW1基因-378–306区域内含有SP1结合位点。(6)我们突变了GATA1结合位点的3个碱基,转染PK细胞,发现突变后的片段活性显著低于未突变片段的活性;转染C2C12细胞时,突变后的片段与原片段相比,活性极显著降低。对于SP1的结合位点,我们突变了单个碱基,转染PK细胞,发现突变载体的活性极显著降低。(7)分别将GATA1和SP1的真核超表达载体和猪APOA2和SEPW1基因启动子缺失载体共同转染PK细胞,得出转录因子超表达后可以显著提高启动子活性。(8)首先,将猪SP1的RNA干扰片段转染PK细胞,定量检测它对转录因子SP1的干扰情况,发现能够显著性的降低SP1的表达量。然后,将小的RNA干扰片段与缺失载体共同转染细胞,检测启动子缺失载体活性,发现SP1的表达量降低均可以显著降低启动子活性。
【作者】李鑫;
【导师】熊远著;
【作者基本信息】华中农业大学,动物遗传育种与繁殖,2014,硕士
【关键词】猪;APOA2;SEPW1;启动子;转录因子;甲基化;

【参考文献】
[1]张跃飞.中国城镇化建设中宏观问题与对策研究[D].中共陕西省委党校,科学社会主义与国际共产主义运动,2014,硕士.
[2]朱杨.方宗诚教育实践与教育思想研究[D].安徽大学,专门史,2014,硕士.
[3]李二敏.探析中美贸易差额—原因及理性对策[D].安徽大学,国际贸易学,2004,硕士.
[4]信静,张人杰.抑制氧化石墨烯纳米片在聚电解质溶液中的聚集[A].中国化学会.中国化学会第29届学术年会摘要集——第26分会:胶体与界面[C].中国化学会:,2014:1.
[5]张江,李学伟.基于混沌边缘的决策行为分析[J].控制与决策,2005,10:1147-1151+1156.
[6]白鑫鑫,范玉顺.企业业务过程性能实时管理技术研究[J].计算机集成制造系统,2005,04:507-514.
[7]葛凤.酿酒废酵母吸附城市污水中低浓度重金属离子机理研究[D].新疆农业大学,食品科学,2012,硕士.
[8]赵莉莉.樟脑磺酸掺杂聚苯胺薄膜制备及其电致变色性能研究[D].哈尔滨工业大学,材料工程,2013,硕士.
[9]刘晓峰,米常焕,张文庆.3Dα-Fe_2O_3/掺氮石墨烯/碳纳米管复合材料及其储锂性能[J].无机化学学报,2014,02:242-250.
[10]李元行.KNN外延薄膜的制备与性能研究[D].中国科学技术大学,凝聚态物理,2014,硕士.
[11]李鹏飞.HPV38 E6/E7对角质形成细胞自噬的影响及机制探讨[D].第四军医大学,皮肤病与性病学,2014,硕士.
[12]傅小利.永磁同步电机伺服系统参数辨识及控制技术的研究[D].华东理工大学,控制科学与工程,2013,硕士.
[13]赵玉春.先秦时期覆面研究[D].河北师范大学,中国古代史,2013,硕士.
[14]侯嘉亮.居室环境污染防治与人体健康[J].中国机关后勤.2002(09)
[15]邹常海.混合梁刚构桥钢混结合段构造分析[D].西南交通大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[16]郭小燕.幼师女生厌学心理分析[D].内蒙古师范大学,心理健康教育(专业学位),2013,硕士.
[17]方继嗣.电子地图在车载导航系统中的应用[D].西北工业大学,精密仪器及机械,2004,硕士.
[18]张峰.深圳市警务人员工作压力、社会支持与职业倦怠关系研究[D].浙江大学,2008.
[19]赤常春.企业员工不安全行为研究及防范对策[D].南华大学,安全工程,2012,硕士.
[20]王强.新型药物载体LyP-1-MWNTs应用于胰腺癌淋巴转移靶向治疗的实验研究[D].复旦大学,外科学(专业学位),2012,博士.
[21]李瑞玲.从个人所得税流失论我国个人所得税税制改革[D].北京交通大学,2013.
[22]欧涛.知识社会视野中的学位制度[D].南京师范大学,高等教育学,2012,硕士.
[23]俞列红.若干系统环境因子的统计推断[D].浙江工商大学,统计学,2012,硕士.
[24]徐博,白金磊,郝燕玲,高伟,刘亚龙.多AUV协同导航问题的研究现状与进展[J].自动化学报,2015,03:445-461.
[25]金秀龙.8-羟基喹啉、邻羟基苯乙酮类席夫碱衍生物的光学性质研究[D].兰州大学,2013.
[26]郇兴建.利用猪骨制备天然肉味香精的研究[D].南京农业大学,食品科学,2012,硕士.
[27]赵田欣.美洲黑杨与大青杨杂种叶片气孔导度的红外热像测量方法研究[D].北京林业大学,生物物理,2013,硕士.
[28]郭张华.评价舒芬太尼联合丙泊酚和依托咪酯应用于胃镜检查手术的麻醉效果[D].山西医科大学,麻醉学(专业学位),2013,硕士.
[29]邹强鑫.超声数字波束合成方法的研究与优化设计[D].重庆大学,电气工程,2014,硕士.
[30]张山山.尿酸对人骨髓间充质干细胞成骨分化中Cbfα1/Runx2表达的影响[D].青岛大学,老年医学,2013,硕士.
[31]徐志勇.新型高压变频器的研究[D].北京建筑大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[32]张振鲁.村落地方戏的调查与研究[D].新疆师范大学,音乐学,2013,硕士.
[33]刘旭峰.航空轮胎圆形截面钢丝圈缠绕机结构设计及仿真[D].哈尔滨工业大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[34]朱凌.京沪高速铁路CFG桩复合地基路基沉降预测分析[D].西南交通大学,岩土工程,2014,硕士.
[35]聂耘文.两湖水彩画的渊源和发展[D].湖南师范大学,美术学,2013,硕士.
[36]张潇潇.霍山石斛的分子鉴定及其遗传多样性评价[D].南京师范大学,植物学,2012,硕士.
[37]曾毅.基于“源—汇”模型的植被缓冲带构建技术研究[D].华中农业大学,林学,2014,硕士.
[38]李伟光.城市山地公园景观规划设计研究[D].山东建筑大学,园林植物与观赏园艺,2013,硕士.
[39]王海英.爆炸-真空热处理条件下纳米洋葱状富勒烯的形成[D].太原理工大学,材料加工工程,2004,硕士.
[40]穆晓静.供应链上以供应商为运输主体的批量模型研究[D].西安工业大学,物流工程,2014,硕士.
[41]王钰.试论香港基本法解释权的有限性[D].华东政法大学,法律(专业学位),2012,硕士.
[42]邸津.XX修船企业再造与流程优化实践研究[D].大连海事大学,工商管理,2012,硕士.
[43]吴斐.可转换债券融资的理论分析和实践研究[D].对外经济贸易大学,管理学,2004,硕士.
[44]吴雷明.七带石斑鱼(Epinephelus septemfasciatus)人工繁育技术研究[D].上海海洋大学,水产养殖,2013,硕士.
[45]孙景烨.语文分进教学模式下汉字学习策略培训效果的研究[D].中山大学,汉语国际教育,2014,硕士.
[46]封婧超.浅析广告语言中文化价值观的表达[D].河北师范大学,英语语言文学,2004,硕士.
[47]董振虎.热轧带钢板形缺陷的识别[D].济南大学,模式识别与智能系统,2012,硕士.
[48]丁振亭.大化肥德士古渣油气化碳黑洗涤设备的故障分析[J].石油化工设备.1993(06)
[49]汤辰祥.弱者的诗学—王蒙小说简论[D].苏州大学,中国现当代文学,2013,硕士.
[50]苏本利.2010年和2005年济南市20-39岁城镇非体力男性体质的比较研究[D].山东体育学院,体育教学,2012,硕士.

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