栉孔扇贝(Chlamys farreri)性腺发育相关基因的筛选及Cf-phb2在精巢中的表达分析

栉孔扇贝(Chlamys farreri)性腺发育相关基因的筛选及Cf-phb2在精巢中的表达分析

作者:师大云端图书馆 时间:2015-10-22 分类:硕士论文 喜欢:2836
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【摘要】性腺发育是发育生物学研究的重要领域之一,这是一个多基因参与调控的过程。PHB(Prohibitin)被认为参与多种生物过程,包括抑制某些转录因子的转录活性、对细胞周期的负调控作用以及抑制肿瘤和细胞凋亡等。本研究采用半定量RT-PCR技术对栉孔扇贝(Chlamysfarreri)增殖期精、卵巢差异表达谱中的10个两性差异表达序列标签进行了验证;RACE技术获得phb2全长cDNA序列,采用半定量RT-PCR、real-timePCR和原位杂交技术分析了该基因在栉孔扇贝中的空间表达以及各发育阶段精巢中的表达特征。主要结果如下:半定量RT-PCR检测,确定栉孔扇贝10个两性差异表达序列标签中3个为卵巢高表达,4个为精巢高表达,一致率为40%。以其中一个精巢高表达标签(>F0BWI0G01A0M8X)序列为基础,RACE技术获得一个全长为2122bp的cDNA序列,该序列含有开放阅读框882bp,编码293个氨基酸;经过序列比对及同源性分析初步判定其为栉孔扇贝phb2基因,定名为Cf-phb2。栉孔扇贝phb2的半定量RT-PCR检测结果显示,其在各器官中均有表达,以精巢中表达量最高。实时定量RT-PCR检测发现,Cf-phb2在栉孔扇贝4个发育时期(休止期、增殖期、生长期和成熟期)的精巢中均有表达,其表达量随着精巢的发育逐渐增加。其中休止期精巢表达量最低,成熟期精巢表达量最高,成熟期精巢的表达量约是生长期的3倍,增殖期的15倍。原位杂交检测发现,栉孔扇贝phb2在精巢的各种生殖细胞(精原细胞、精母细胞、精细胞和精子)中均有阳性信号,且信号的强度随着精子发生(精原细胞-精母细胞-精细胞)而增强,但精子中的表达极微,暗示phb2可能参与栉孔扇贝精子发生过程。并推测其在精子发生过程中可能与抑制细胞增殖有关。
【作者】韩田田;
【导师】张志峰;
【作者基本信息】中国海洋大学,细胞生物学,2014,硕士
【关键词】栉孔扇贝;phb2;组织分布;精巢;精子发生;

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