罗非鱼链球菌病分子流行病学研究及tHSP70在该病的免疫功能探索

【摘要】链球菌病是目前对罗非鱼养殖危害最为严重的病害,呈全球流行,每年给世界罗非鱼养殖造成巨额经济损失,2009-2012年给中国罗非鱼养殖业造成的经济损失累计达16亿美元。近年该病在中国的流行发生了巨大变化,目前还未找到有效的预防控制措施。本论文对中国罗非鱼主要养殖省区广东、广西、海南、福建及云南近7年(2006-2012)链球菌病流行菌株分离鉴定、血清型与基因型分析、菌种更替原因及流行菌株免疫原性进行研究,旨在全面掌握该病病原在我国的流行变化情况；同时,论文通过重组酵母分泌表达获得罗非鱼热休克蛋白70(tHSP70),并在基因、细胞及机体水平探索了tHSP70在该病的免疫学功能。2006-2012年,研究从广西、广东、海南、福建和云南5省罗非鱼集中养殖区共分离到罗非鱼源链球菌临床菌株210株,建立了目前国内菌株来源最广、数量最多、数据最详的罗非鱼链球菌病原库；临床菌株鉴定表明我国罗非鱼链球菌病流行菌种已从过去(2008年前,91.30%)以海豚链球菌为主转变为现在(2009-2012,97.86%)以无乳链球菌为主；2009-2012年流行的无乳链球菌株存在Ia、Ib和Ⅲ型3种血清型,其中Ia(94.67%)为绝对优势血清型,各区域流行菌株血清型和PFGE基因型存在地域差异,并且随时间发生变化；罗非鱼无乳链球菌流行菌株免疫原性与其血清型和PFGE基因型均有关联,很难筛选获得1株疫苗候选菌株可以保护相同血清型内的所有基因型菌株；2008年初南方罕见持续低温天气和菌种致病力差异是我国罗非鱼流行菌种在2008年发生更替的直接原因。研究构建了罗非鱼HSP70蛋白高效、稳定的毕赤酵母分泌表达系统(KM71/pPIC9K/tHSP70),表达量达30mg/L。重组表达的tHSP70具有ATPase和结合蛋白多肽的生物学活性；tHSP70(100μg/mL)可显著增强罗非鱼腹腔巨噬细胞的贴壁和生长、NO释放及吞噬海豚链球菌菌体抗原能力；tHSP70(10μg/mL可极显著提高海豚链球菌菌体诱导罗非鱼淋巴细胞的增殖(P<0.01),并可减轻海豚链球菌胞外产物(ECP)对淋巴细胞增殖的抑制作用；基因表达分析显示,tHSP70可显著增强海豚链球菌体外诱导罗非鱼腹腔巨噬细胞IL-8、HSP70、CXCR4和PGRN四个基因,以及罗非鱼外周血淋巴细胞ICER、PGK、MMP9和MHCII四个基因的表达(P<0.01)；研究采用微粒包裹技术制备的罗非鱼海豚链球菌tHSP70-肽微粒疫苗口服免疫罗非鱼,第10d和20d的免疫保护率分别为76.78%和69.09%,极显著高于其它口服免疫对照组(P<0.01)。本研究全面掌握了近7年我国罗非鱼链球菌病发病规律及其病原分布与变化特征,并阐明了2008年流行菌种更替原因,为该病科学防控和疫苗研发应用提供了直接依据；研究从基因、细胞和机体水平探索了tHSP70在罗非鱼链球菌病中的免疫学功能,初步证实tHSP70且有很好的免疫佐剂功能,为今后利用HSP70开发新型口服鱼类疫苗奠定了基础。
【作者】陈明；
【导师】黄维义；
【作者基本信息】广西大学，预防兽医学，2013，博士
【关键词】罗非鱼；海豚链球菌；无乳链球菌；热休克蛋白70；疫苗；

【参考文献】
[1]刘卉.都市农业园区景观设计研究[D].西安建筑科技大学,设计艺术学,2013,硕士.
[2]王希.斜纹夜蛾的抗药性监测与混剂开发[D].南京农业大学,植物保护,2013,硕士.
[3]郭亚男.岚河流域径流变化规律及其影响因素分析[D].郑州大学,水文学及水资源,2013,硕士.
[4]任晓丽.中国传统“太阳纹”视觉艺术符号探究[D].西安美术学院,设计艺术学,2014,硕士.
[5]杜艺.陈逸飞油画风格演变与影响[D].江苏师范大学,美术学,2013,硕士.
[6]宋广林.不同来源玉米自交系的籽粒品质研究[D].西北农林科技大学,作物栽培学与耕作学,2011,硕士.
[7]张楠.阿德福韦酯致低磷性骨软化症6例分析并文献综述[D].郑州大学,内科学,2013,硕士.
[8]邹霞.基于多元识读教学法的大学英语课程设计[D].湖南科技大学,外国语言文学,2013,硕士.
[9]贾霁.TMV拮抗菌的筛选与初步鉴定[D].湖南农业大学,植物病理学,2012,硕士.
[10]蒋宜睿.反向凹形垫对髋臼假体安放准确性的影响[D].吉林大学,临床医学,2014,硕士.
[11]桂现才,林嘉宜,彭宏.基于概率的有效时间不确定的时态数据库挖掘[J].计算机工程,2005,12:84-86.
[12]李民.行业新闻网站的建设与运作[J].中国新闻科技.2001(01)
[13]韦慧敏.开文章之新体，激民气之暗潮[D].中南民族大学,中国古代文学,2013,硕士.
[14]陈志盛,孙克辉,张泰山,李勇刚.基于LMI的不确定离散模糊时滞系统鲁棒控制[J].控制与决策,2006,03:352-355+360.
[15]刘玉豪.基于GIS的网络实时监控技术研究[D].河北科技大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[16]吕禄明.基于复杂网络的城市轨道交通网络结构特性与抗毁性研究[D].北京交通大学,2015.
[17]曹新亮.基于位置信息的混合多智能体蜂拥控制方法[D].南京邮电大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[18]高新宇.渤海海运有限公司内部控制优化研究[D].燕山大学,工商管理,2013,硕士.
[19]郁焕兵.自锁托槽矫治器对正畸患者龈沟液内IL-1β和TNF-α影响的临床研究[D].河北医科大学,口腔临床医学,2014,硕士.
[20]本报记者周芬棉.多家券商研报失真惹众怒律师代股民欲提侵权之诉[N].法制日报,2011-08-02006.
[21]黄龙玲.基于类图的面向对象软件复杂性度量方法的研究[D].江西财经大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[22]丁平.大型地下互通式立交隧道通风系统研究[D].长安大学,桥梁与隧道工程,2014,硕士.
[23]杜伟,何山,蔡少华,李崇坚,干永革,李向欣.全数字矢量控制系统的实现与工程调试方法[J].冶金自动化,2001,01:39-42.
[24]李存华,孙志挥,陈耿.基于网格上近似的大规模数据集离群点检测算法GROUT[J].计算机应用研究,2003,09:134-136.
[25]吴强.关于非线性双曲型偏微分方程数值解的研究[D].合肥工业大学,计算数学,2003,硕士.
[26]赵波,张雪松,李鹏,汪科,陈健,李逢兵.储能系统在东福山岛独立型微电网中的优化设计和应用[J].电力系统自动化,2013,01:161-167.
[27]谢小兵.湖南天健现代医药物流中心的仓储管理研究[D].湖南大学,工商管理,2013,硕士.
[28]张代楠.高职旅游管理专业“订单式”人才培养模式研究[D].沈阳师范大学,课程与教学论,2013,硕士.
[29]刘放,李伟,陈士军.可调偏心式结晶器振动机构[J].一重技术.2001(Z1)
[30]刘兆琼.重庆保税港区政府管理机制创新研究[D].西南大学,公共管理（专业学位）,2014,硕士.
[31]刘文聪.小半径曲线大跨连续刚构桥受力特性研究[D].西南交通大学,建筑与土木工程,2013,硕士.
[32]张俊兴.整车环境下商用车驾驶室静态拓扑优化设计[D].吉林大学,固体力学,2013,硕士.
[33]戚广武.内部审计质量与内部控制信息披露相关性研究[D].山东财经大学,会计学,2014,硕士.
[34]刘诗滦.自救互救用创面封闭胶的实验研究[D].中国人民解放军医学院,外科学,2013,硕士.
[35]孔令洋.城市轨道交通系统型式选择研究[D].北京交通大学,2009.
[36]张小璐.新世纪“文革”记忆书写研究[D].河北大学,中国现当代文学,2014,硕士.
[37]梅洪萍.健脾利湿中药治疗乳腺癌术后上肢水肿的疗效观察[D].浙江中医药大学,中医外科学,2013,硕士.
[38]刘永芳.遗传算法和BP网络及其在城市系统评价中的应用[D].合肥工业大学,市政工程,2004,硕士.
[39]杨邦湘.宽带接入技术与发展[J].邮电商情.2000(01)
[40]王旭民.城建北苑家园项目营销策略研究[D].对外经济贸易大学,工商管理,2004,硕士.
[41]吴光林.ATM在未来宽带网络中的地位[J].世界电信.1999(03)
[42]田东洋.棉花花粉发育时期高温胁迫耐性相关基因的克隆[D].湖南农业大学,生物化学及分子生物学,2012,硕士.
[43]管敏渊,徐政.模块化多电平换流器子模块故障特性和冗余保护[J].电力系统自动化,2011,16:94-98+104.
[44]白玉陈.周作人与金素云的散文比较研究[D].对外经济贸易大学,外国语言学及应用语言学,2004,硕士.
[45]李斌.OFDM基带系统关键技术及其FPGA设计与实现[D].湖南大学,信息与通信工程,2011,硕士.
[46]金湓.城市污泥与废弃生物质共热解基础研究[D].华侨大学,化学工程,2013,硕士.
[47]陈茜.基于知能课程的研究性学习的设计与实施[D].沈阳师范大学,教育技术学,2014,硕士.
[48]林泽坤.基于交叠概率的风电地区暂态电压稳定评估应用研究[D].广东工业大学,电气工程,2014,硕士.
[49]徐顺才.环境侵权若干问题研究[D].沈阳师范大学,法律,2014,硕士.
[50]张巍.巴托克《第二小提琴协奏曲》的音乐分析与研究[D].中央音乐学院,作品分析,2012,硕士.