连翘酯苷A对鸡脾和血中炎症细胞因子及抗氧化性能影响

【摘要】连翘酯苷A具有镇痛、解热、抗氧化、抗病毒及抗菌等药理学活性,是连翘的主要有效成分之一,其可介导各种炎症因子,调控机体免疫应答。脂多糖是革兰氏阴性细菌细胞壁的成分之一,引起机体炎症反应,常被用于复制炎症模型。当炎症发生时,除了脾脏作为机体外周免疫器官,产生免疫应答外,血液是各种免疫细胞重要载体,也是各种免疫事件的主要发生场所。故本研究采用LPS诱导鸡和鸡脾淋巴细胞炎症模型,在连翘酯苷A作用下,不仅从体内外模型研究脾脏和鸡脾淋巴细胞炎症因子的变化和相关性、而且探讨鸡脾脏、血液炎症因子与抗氧化酶及自由基的关系,从调控炎症因子角度,阐明连翘酯苷A抗LPS诱导的鸡脾炎症中的机制,为连翘酯苷A在鸡免疫调控中的作用提供理论依据。将80只1日龄健康AA肉鸡随机分成4个组,进行体内试验：正常对照组,LPS组[LPS(200μg·kg-1)]，连翘酯苷A低剂量组[ForsythiasideA(30mg·kg-1)+LPS(200μg·kg-1)]和连翘酯苷A高剂量组[ForsythiasideA(60mg·kg-1)+LPS(200μg·kg-1)],每组20只。所有肉鸡正常饲喂15大,对16日龄连翘酯苷A组肉鸡灌服连翘酯苷A,LPS组和正常对照组肉鸡灌服等量生理盐水；当肉鸡生长到21日龄时,将LPS组和连翘酯苷A组肉鸡以200μg·kg-1·BW剂量翅内静脉注射LPS,2小时后心脏采血后处死肉鸡,用加抗凝剂试管收集血液获得血浆,用不加抗凝剂试管收集血液自然析出血清,4℃保存备用,无菌分离鸡脾脏。一方面观察临床症状、计算脾器官指数,另一方面采用ELISA和Realtime-PCR方法检测脾淋巴细胞、脾脏和血液中一些炎症因子的含量及iNOS,NF-κBmRNA表达量。同时检测脾淋巴细胞、脾脏和血液中一氧化氮(NO)及丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽(GSH)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)。通过选用50日AA肉鸡进行体外实验,将50日龄AA肉鸡心脏采血.处死后,无菌取山脾脏,用配好的淋巴细胞分离液分离脾淋巴细胞,将脾淋巴细胞计数并分为20个组(4剂量×五个时间点),四个剂量组分别为：对照组、LPS组(5μg·mL-1)、连翘酯苷A预防低剂量组(200μg·mL-1连翘酯苷A+5μg·mL-1LPS)、连翘酯苷A预防高剂量组(400μg·mL-1连翘酯苷A+5μg·mL-1LPS)。五个时间点分别为：0h、6h、12h、24h、48h。检测方法和指标同上。临床症状、脾器官指数和病理变化结果表明：LPS可起鸡体温升高、腹泻、食欲下降、饮水增多,脾器官指数增大,白髓淋巴细胞减少,含铁血红素沉着增多,在连翘酯苷A的干预下,可逆转上述现象。ELISA结果显示:与正常组相比,LPS组脾淋巴细胞、脾脏和血液中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、TNF-α、PGE2、COX-2、iNOS、NO、TGF-β1、MIF、STAT-3、NF-κB、INF-γ含量升高;与LPS组比较,连翘酯苷A组脾淋巴细胞、脾脏和血液中上述炎症因子含量下降,表明脾淋巴细胞、脾脏中炎症因子的变化呈止相关性,通过抑制LPS诱导的鸡脾脏和血液中上述炎症因子的升高,减轻炎症反庆。Realtime-PCR结果显示：与正常组相比,LPS组脾淋巴细胞、脾脏和血液中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-23、TNF-α、PGE2、COX-2、iNOS、TGF-β4、MIF、STAT-3、NF-κB、INF-γmRNA表达量升高；与LPS组比较,连翘酯苷A组预防组脾淋巴细胞、脾脏和血液中上述炎症因子表达量下降,变化呈相关性,试验表明连翘酯苷A可以通过转录水平抑制LPS诱导的鸡脾淋巴细胞、脾脏和血液中上述炎症因子表达量的升高,减轻炎症反应。抗氧化功能检测结果显示,与正常组比较,LPS组脾淋巴细胞、脾脏和血液中GSH、T-SOD活性和T-AOC含量显著降低(P<0.05),表明LPS可通过降低机体抗氧化酶含量或活性来发挥抗氧化功能。同LPS组肉鸡比较,连翘酯苷A组肉鸡脾淋巴细胞、脾脏和血液中MDA含量明显降低(P<0.05),GSH、T-SOD活性及T-AOC含量显著升高(P<0.05),表明连翘酯苷A可通过调节抗氧化系统,提高脾淋巴细胞、脾脏和血液中抗氧化能力。由ELISA和Realtime-PCR结果表明,连翘酯苷A可能通过介导NF-κB-COX-2-PGE2和IL-6/STAT-3信号通路引起IL-1β、IL-8、IL-10、IL-17、IL-23、TNF-α、iNOS、INF-γ含量下降,进而通过介导TGF-β4、TGF-β1和MIF影响炎症因子的迁移,最终起到抗炎作用。由抗氧化数据表明,连翘酯苷A可提高机体GSH、T-SOD活性及T-AOC等抗氧化酶含量,降低自由基MDA含量,达到抗炎的目的。综合分析表明,连翘酯苷A抑制鸡脾淋巴细胞、脾脏和血液中炎症发生,影响脾脏的免疫功能,表现在血液和脾脏中炎症因子的mRNA和含量下降,机体的抗氧化酶活力增强,机体自由基含量下降,同时试验发现脾脏和血液炎症因子变化趋势一致,脾脏和血液抗氧化指标与抗炎数据呈正相关,且连翘酯苷A和LPS与应用剂量和作用时间相关,这表明当连翘酯苷A和LPS作用鸡时,鸡体免疫系统被激活,血液和脾脏在机体的免疫机制中发挥重要的生物学效应,以适应鸡体免疫调节机制,最终起到抗氧化和抗炎功能。
【作者】程广东；
【导师】李艳华；
【作者基本信息】东北农业大学，基础兽医学，2014，博士
【关键词】连翘酯苷A；LPS；鸡脾脏和血液；鸡脾淋巴细胞；炎症因子；

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