幽门螺杆菌和甲型流感病毒特异性CD4~+T细胞免疫优势应答研究

幽门螺杆菌和甲型流感病毒特异性CD4~+T细胞免疫优势应答研究

作者:师大云端图书馆 时间:2015-08-02 分类:文献综述 喜欢:2248
师大云端图书馆

【摘要】研究背景目前,由致病微生物引起的感染性疾病仍然属于危害人类生命的主要杀手。宿主抗感染免疫应答是决定感染性疾病发展和转归的关键因素。获得性免疫应答是宿主抵抗致病微生物再次感染的关键,也是疫苗发挥作用的基础。CD4+T细胞应答在获得性免疫应答中发挥中枢作用:首先,其能促进B细胞分化成熟并产生抗体,辅助抗体类型的转换;其次,能促进CD8+T细胞的增殖并辅助记忆CD8+T细胞的形成;还能分泌多种细胞因子直接干扰病毒的复制,或通过招募其他免疫细胞到达感染部位间接对病原体进行清除,甚至可以像CD8+T细胞那样介导对病毒感染靶细胞的直接杀伤。CD4+T细胞应答具有抗原特异性、HLA限制性和免疫优势应答等特性。CD4+T细胞应答的抗原特异性是指其只能识别由13-20个氨基酸组成的表位,而不是整个抗原或整个病原体,使得同一病原体或蛋白抗原诱导的CD4+T细胞应答在表位水平具有不同的特异性。CD4+T细胞应答的HLA限制性是指:不同HLA分子通过递呈不同的表位而诱导产生不同的表位特异性CD4+T细胞应答,使得不同个体之间因HLA分子的差异产生不同表位特异性应答。免疫优势应答即,在针对复杂病原体时,由于HLA的共显性特征,同一个体中的不同HLA分子能同时递呈多个抗原表位诱导产生不同表位特异性应答,各应答之间相互抑制,产生强弱差异,使得主要的应答仅仅聚焦于少数表位,形成优势应答。优势应答能发挥更强的抗感染免疫作用,但病原体可通过突变优势应答表位逃避杀伤。因此,研究CD4+T细胞抗原特异性、HLA限制性以及免疫优势应答特征对揭示机体的抗感染免疫机制,研发有效疫苗等具有重要意义。幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)是定植于人胃粘膜的重要致病菌,是胃炎、胃溃疡等胃部疾病的主要致病因素,与胃癌、粘膜相关淋巴瘤的发生密切相关,目前我国每年因胃癌死亡人数高达20万人。甲型流感病毒(InfluenzaAvirus,IAV)是一种能够导致人类及动物罹患流行性感冒的RNA病毒,其每年会造成全球约50万人的死亡,且常在世界范围内周期性大流行。研究证实,CD4+T细胞应答在宿主抵抗H.pylori和IAV感染的保护性免疫应答中至关重要。但其抗原特异性、HLA限制性及免疫优势应答特征研究甚少,有待深入系统的研究。研究目的1.利用H.pylori与IAV自然感染人体外周血中的记忆细胞,建立H.pylori与IAV抗原特异性CD4+T细胞系,观察其效应分子表达情况,探讨其在抗H.pylori与IAV感染免疫中的可能作用;2.筛选鉴定H.pylori与IAV抗原特异性CD4+T细胞的优势应答抗原及表位,比对表位序列保守性,评价其在H.pylori与IAV疫苗设计中的可能应用;3.明确H.pylori与IAV不同表位特异性优势CD4+T细胞应答的HLA限制性,发掘H.pylori与IAV抗原特异性CD4+T细胞应答在含有相同或者不同HLA基因型个体中的优势应答特征及规律;4.分析H.pylori感染不同个体的优势应答频率及其与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等疾病发生发展的相关性,揭示优势应答对H.pylori感染导致不同类型胃病发生与转归的作用和机制;研究方法1.H.pylori粘附素A亚单位(H.pyloriadhesionAsubunit,HpaA)抗原特异性CD4+T细胞免疫优势应答特性研究利用13C呼气试验、血清抗H.pylori抗体ELISA法及尿素酶试纸法筛选H.pylori感染者;利用重组HpaA蛋白体外刺激H.pylori感染者PBMC扩增建立HpaA特异性CD4+T细胞系;通过ICS技术对HpaA特异性CD4+T细胞效应分子表达谱进行检测;利用步移重叠合成肽对优势抗原表位进行筛选鉴定;利用PCR-SBT法对HLA进行基因分型;利用抗体阻断和BLCL表位递呈实验对表位HLA限制性进行鉴定;通过体外诱导单核细胞来源的树突状细胞及BLCL对表位的自然加工递呈特征进行鉴定;通过MACS技术及ELISPOT技术对优势表位特异性CD4+T细胞的记忆表型及离体频率进行检测;通过比较多个HLA-DRB1*1501阳性个体的优势应答谱系对优势应答规律进行分析;通过分析H.pylori感染所致慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等疾病个体之间优势CD4+T细胞应答频率的差异,揭示优势应答对H.pylori感染导致不同类型胃病发生与转归的作用和机制。2.IAV抗原特异性CD4+T细胞免疫优势应答特性研究利用IAV感染P815细胞裂解物全抗原体外刺激扩增建立IAV特异性CD4+T细胞系;通过重组痘病毒感染P815细胞裂解物制作的IAV单个抗原对免疫优势蛋白抗原进行筛选;利用步移重叠合成肽对优势抗原表位进行鉴定;利用PCR-SBT基因分型、抗体阻断和BLCL表位递呈实验对表位HLA限制性进行鉴定;利用ICS技术对IAV表位特异性CD4+T细胞效应分子表达谱进行检测;利用多序列比对对表位序列保守性进行评价。主要结果1.HpaA抗原特异性CD4+T细胞免疫优势应答特性研究1.1成功创立HpaA特异性CD4+T细胞系培养方法。该方法能从H.pylori感染阳性者PBMC特异性扩增出HpaA特异性CD4+T细胞系,而H.pylori感染阴性者PBMC不能扩增出HpaA特异性CD4+T细胞系。1.2研究发现HpaA特异性CD4+T细胞系主要分泌IFN-γ,不分泌IL-4、IL-10和IL-17A,属于Th1型CD4+T细胞应答。1.3首次筛选鉴定出HpaA192-204,HpaA88-100和HpaA200-212三个H.pylori抗原的功能性免疫优势CD4+T细胞表位。1.4研究确定了HpaA192-204、HpaA88-100和HpaA200-212三个免疫优势表位特异性CD4+T细胞应答的HLA限制性分别是DRB1*0406、DRB1*1501和DQB1*0301。1.5研究证实了上述优势表位特异性CD4+T细胞具有记忆表型,且体外扩增过程不会改变免疫优势应答谱系。1.6研究证实了上述优势表位均能够被抗原递呈细胞自然加工递呈,且部分表位氨基酸序列在H.pylori不同菌株之间高度保守,可作为H.pylori表位疫苗的候选抗原。1.7从1115例胃部疾病患者筛选出59例HLA-DRB1*1501阳性的H.pylori感染患者,研究发现HpaA88-100特异性CD4+T细胞应答在携带HLA-DRB1*1501基因的H.pylori感染阳性个体中处于免疫优势地位。1.8首次证实HLA-DRB1*1501介导的HpaA88-100特异性CD4+T细胞应答频率与H.pylori感染所致慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等胃部疾病的严重程度呈负相关关系,提示HLA-DRB1*1501对胃部疾病的保护作用是通过介导优势CD4+T细胞应答来实现的,也表明HpaA88-100为H.pylori特异的保护性表位。2.IAV抗原特异性CD4+T细胞免疫优势应答特性研究2.1成功制备出可溶性IAV感染P815细胞全抗原,并以此成功创立IAV全抗原特异性CD4+T细胞系培养方法。2.2研究发现IAV全抗原特异性CD4+T细胞系主要分泌分泌IFN-γ和TNF-α,不分泌IL-2,但上调表达CD107分子。表明IAV抗原特异性CD4+T细胞主要通过IFN-γ和TNF-α直接干扰病毒复制和直接的细胞毒性作用介导抗病毒保护性免疫。2.3成功制备出可溶性IAV单个抗原,研究证实了M1与NP是IAV特异性CD4+T细胞应答的优势抗原靶标。2.4筛选鉴定出M1129-141、M1209-221、NP404-416和NP463-475等四个免疫优势IAV特异性CD4+T细胞表位以及M143-55、M194-106、M1103-115、M1105-117、NP102-114和NP115-127等六个亚优势IAV特异性CD4+T细胞表位。2.5研究明确了M1129-141、M1209-221、NP404-416和NP463-475四个免疫优势IAV特异性CD4+T细胞应答的HLA限制性分别是DRB1*0101、DPB1*0301、DRB1*0404和DRB1*0901;M143-55、M194-106、M1103-115、M1105-117、NP102-114和NP115-127等六个亚优势IAV特异性CD4+T细胞应答的HLA限制性分别是DRB1*0701、DRB1*1302、DRB1*0404、DRB1*0901、DPB1*0101和DPB1*0601。2.6研究发现在新流行的IAV菌株中存在着大量表位突变体,且免疫优势表位的突变频率大于亚优势表位,表明优势表位比亚优势表位面临着更大的选择压力。研究意义1.本课题创立了利用H.pylori自然感染个体PBMC体外扩增培养建立HpaA抗原特异性CD4+T细胞系的方法。筛选鉴定了H.pylori第一个HLA限制的并具有免疫原性的CD4+T细胞表位。首次对H.pylori保护性抗原HpaA特异性CD4+T细胞应答的免疫优势特性进行了系统性分析。并证实HLA-DRB1*1501介导的HpaA88-100特异性优势CD4+T细胞应答对H.pylori所致慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌等疾病具有保护性作用。为H.pylori保护性抗原免疫优势表位的筛选鉴定提供了新的方法,为深入理解抗原特异性CD4+T细胞应答在H.pylori感染免疫中的优势应答特性及其对H.pylori感染导致不同类型胃病发生与转归的作用和机制提供新的认识,也为H.pylori新型疫苗设计提供了新的候选抗原。2.本课题利用IAV感染P815细胞制作的可溶性IAV全抗原创立了IAV多克隆抗原特异性CD4+T细胞系的培养方法。首次从IAV全基因组蛋白水平明确了IAV抗原特异性CD4+T细胞应答所聚焦的优势抗原靶标是M1与NP。筛选鉴定了若干M1与NP来源的新的免疫优势及亚优势CD4+T细胞表位。系统分析比较了优势表位与亚优势表位的序列保守性,证明优势表位面临更强的选择压力。为深入理解抗原特异性CD4+T细胞应答在IAV感染免疫中的优势应答特性及其保护作用机制提供了新的认识,为基于T细胞应答的IAV新型疫苗设计的抗原选择提供了参考依据。
【作者】陈立;
【导师】邹全明;
【作者基本信息】第三军医大学,临床检验诊断学,2014,博士
【关键词】幽门螺杆菌;甲型流感病毒;CD4+T细胞;免疫优势;表位;

【参考文献】
[1]邵恩庆.兰州地区垃圾填埋场腾发盖层研究[D].兰州大学,地质工程,2013,硕士.
[2]黄广平.南海鲈形目鱼类寄生异尖线虫幼虫的分子鉴定及亲缘关系分析[D].河北师范大学,动物学,2013,硕士.
[3]戴钰彬.网络课堂管理系统的设计与实现[D].电子科技大学,软件工程(专业学位),2012,硕士.
[4]刘上楼.胸腰段椎体采用漏斗技术与徒手技术置入椎弓根螺钉的生物力学比较[D].扬州大学,外科学,2012,硕士.
[5]王逵.烯烃类有机不对称小分子的自由基催化环化反应的理论研究[D].山东师范大学,物理化学,2013,硕士.
[6]杨斌.移动通信网中GPRS中Gn接口的信令协议分析[D].重庆大学,电子与信息工程,2003,硕士.
[7]林炜.基于TSP的软件质量控制平台研究与实现[D].河南大学,2005.
[8]林凤翔.基于能馈技术的电机测试平台[D].广东工业大学,电气工程(专业学位),2014,硕士.
[9]陈辉.水溶性聚酯的合成与性能研究[D].青岛大学,纺织化学与染整工程,2004,硕士.
[10]吴念鲁,杨海平,陈颖.论人民币可兑换与国际化[J].国际金融研究,2009,11:4-12.
[11]范桂龄.输煤综合自动化监控系统的设计与实现[D].西安科技大学,计算机技术,2013,硕士.
[12]陈兵.广西电信市场细分标准的探讨及对营销的启示[D].广西大学,2005.
[13]张丽强.全正色散光纤激光器的锁模及调Q特性研究[D].山东大学,光信息科学与技术,2014,博士.
[14]胡跃祥.基于环境动力试验的砖石古塔模态参数识别研究[D].扬州大学,防灾减灾工程及防护工程,2012,硕士.
[15]朱文文.高速公路交工验收试验检测评标方法研究[D].长安大学,道路与铁道工程,2013,硕士.
[16]曹蔚.高校计算机双语教学质量评价体系的探索与实践[D].西南交通大学,教育技术学,2013,硕士.
[17]黄琳.击剑运动员线索化决策特点及ERP研究[D].上海体育学院,体育教育训练学,2014,博士.
[18]郭倩.榆阳煤矿开采对周边地下水水位的影响[D].长安大学,水文学及水资源,2014,硕士.
[19]戴先中,臧强,张凯锋.非线性微分-代数子系统的逆系统的构造[J].自动化学报,2009,08:1094-1100.
[20]杨彤.半刚性基层沥青路面设计参数结构效应研究[D].长安大学,交通运输工程(专业学位),2013,硕士.
[21]田继武.桑枝皮中果胶的提取及应用研究[D].安徽农业大学,特种经济动物饲养,2011,硕士.
[22]陈凌霄.福建省水稻机械化育插秧技术推广现状与发展对策研究[D].福建农林大学,农业推广,2012,硕士.
[23]周琪.独立学院双语教学的问题与对策研究[D].西南大学,课程与教学论,2013,硕士.
[24]李莹芳.地西他滨缓解葡萄糖毒性对胰岛β细胞株NIT-1细胞的作用[D].广西医科大学,内分泌代谢,2013,硕士.
[25]蔡霞,张森.自然语言理解在Web数据挖掘中的应用[J].计算机工程与设计,2003,11:1-3.
[26]朱弘珊.库阿高速公路EPC总承包项目成本管理研究[D].天津大学,项目管理,2013,硕士.
[27]朱天清,王先培,熊平.IDS中的模糊关联规则挖掘与响应[J].计算机工程与应用,2004,15:148-150.
[28]袁妍.噪声相关高斯双天线中继信道的可达速率和容量研究[D].南京邮电大学,应用数学,2013,硕士.
[29]邵雪晶,齐晓甜,刘宇佳,鲜苗,应美丹,杨波,何俏军.白藓碱单用及联合全反式维甲酸对急性髓性白血病细胞的分化治疗作用[J].中国现代应用药学,2015,03:268-273.
[30]庞瑾.猪Pit-1基因分子遗传多态性研究[D].中国农业科学院,动物遗传育种与繁殖,2004,硕士.
[31]沈昌盛.针对泰国大学生的《三国演义》文化教学内容和教材设计[D].厦门大学,汉语国际教育,2014,硕士.
[32]郭雨春,董大明.下一代互联网技术展望[J].冶金自动化,2005,04:10-12.
[33]赵娟.金属硫化物纳米结构的制备及光催化性能研究[D].湖南大学,2013.
[34]陈姝.晚清上海的医药文化与社会生活[D].青岛大学,专门史,2013,硕士.
[35]包昌火,李艳,包琰.论竞争情报学科的构建[J].情报理论与实践,2012,01:1-9.
[36]刘蕊石.近期美元贬值的成因及对中国经济发展的影响[D].吉林大学,世界经济,2004,硕士.
[37]郑倩.新型甘蓝型油菜氮高效DH系的筛选及其F_1代氮效率和品质的分析[D].华中农业大学,植物营养学,2014,硕士.
[38]魏勤香.HfO_2高介电常数栅介质薄膜的制备及其电学性能的研究[D].湖北大学,微电子学与固体电子学,2011,硕士.
[39]李晓.我国政府信息公开制度问题研究[D].江西财经大学,行政管理,2013,硕士.
[40]谢鸿宇.丰富环境对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用研究[D].复旦大学,康复医学与理疗学,2012,硕士.
[41]张海波.不同辣椒品种镉积累差异及外源物质对镉富集的调控效应[D].西南大学,植物营养学,2013,硕士.
[42]孙即超.工程地质量化分区及岩土工程勘察信息管理系统的研制[D].河北工业大学,结构工程,2004,硕士.
[43]莫尘.桂中地区壮族生育习俗研究[D].广西民族大学,中国少数民族语言文学,2013,硕士.
[44]黎明,张化光,王成红.基于T-S模糊性能评估器的非线性系统跟踪控制器设计[J].自动化学报,2004,04:578-582.
[45]杨梦竹.ZX银行中小企业信贷风险管理研究[D].电子科技大学,高级管理人员工商管理(EMBA)(专业学位),2012,硕士.
[46]刘玉.基于MSP430的实时健康监测系统设计[D].曲阜师范大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[47]齐倩.我国公共资本存量的区域差异及其优化对策研究[D].重庆大学,公共管理,2014,硕士.
[48]王莺.典型钢种高温疲劳裂纹扩展的规律研究[D].浙江工业大学,化工过程机械,2004,硕士.
[49]蔡智超.雅安市雨城区TD-SCDMA网络覆盖设计[D].电子科技大学,电子与通信工程(专业学位),2012,硕士.
[50]曹仁康.体外受精—胚胎移植中非优质胚胎移植价值的评价[D].遵义医学院,妇产科学(专业学位),2014,硕士.

相关推荐
更多