肿瘤相关巨噬细胞中EGFR活化对上皮性卵巢癌恶性行为的影响及机制研究

【摘要】上皮性卵巢癌(EpithelialOvarianCancer,EOC)是妇科肿瘤中最常见的恶性肿瘤之一,卵巢癌细胞在腹腔内的广泛侵袭转移是导致患者预后差的重要原因。微环境中肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associatedmacrophages,TAMs)在卵巢癌侵袭转移中的作用越来越受到重视。巨噬细胞具有可塑性,不同的环境中,可以分化为不同的亚群(如M1、M2),不同亚群在分子表型及功能上存在显著差异。TAMs表现为M2型,具有促进肿瘤进展的作用。表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)活化在肿瘤细胞侵袭转移中扮演重要角色。近来,巨噬细胞中EGF信号通路的作用也成为关注的热点。为探讨TAMs在上皮性卵巢癌进展中的作用和活化TAMs中EGF/EGFR信号通路对上皮性卵巢癌恶性行为的影响及分子机制,本课题研究分为以下三个部分：第一部分,分析TAMs的数量及比例与EOC患者临床病理特征及预后的关系。收集67例2007年1月至2008年12月期间在我院妇科肿瘤科诊断为EOC且腹水不少于200m1患者的临床病理资料,采用免疫组织化学及流式细胞术方法分析原发卵巢癌组织及腹水中CD163+TAMs的数量及比例,统计分析上述指标与患者临床病理特征及预后的关系。结果显示：癌组织中CD163+TAMs的数量与组织分化程度、FIGO(InternationalFederationofGynaecologyandObstetrics)分期及患者对铂类治疗的反应密切相关；腹水中,TAMs的比例与FIGO分期、淋巴结是否转移、腹水量、患者对化疗及铂类治疗的反应密切相关；并且癌组织中TAMs数量是患者无疾病进展生存期及总生存期的独立预后因素。第二部分,分析EGF在外周血单核细胞向TAMs分化中的作用。分离培养健康志愿者外周血单核细胞(Peripheralbloodmonocytes,MOs)及EOC患者腹水中TAMs,比较EGF处理后的MOs与TAMs分子表型和分泌细胞因子的差异,Transwell侵袭实验、MTT增殖实验及单层伤口愈合实验(Woundhealingassay)检测不同处理后的条件培养基对卵巢癌细胞SKOV3侵袭、增殖及迁移能力的影响。结果表明：EGF在体外可诱导外周血来源单核细胞分化为M2型巨噬细胞样TAMs,其分子表型和分泌型表现为CD163highIL-10highTGF-βhighIL-8high。EGF刺激MOs后收取的条件培养上清可促进卵巢癌细胞的侵袭、增殖及迁移。第三部分,TAMs中EGFR活化促进EOC恶性行为的机制研究。利用EGFR的单克隆抗体西妥昔单抗(Cetuximab),PI3K抑制剂LY294002和ERK抑制剂PD98095检测不同处理后TAMs分泌IL-10的变化。其次,通过Transwell侵袭实验、MTT增殖实验及单层伤口愈合实验检测抑制TAMs培养上清中IL-10作用的条件培养基对卵巢癌细胞SKOV3侵袭、增殖及迁移能力的影响。结果显示：24h时,EGF(0.00μg/ml-1.0μg/ml)刺激TAMs分泌IL-10存在浓度依赖。在TAMs中,EGF与其受体EGFR结合后可能通过其下游PI3K/AKT和ERK两条信号通路促进IL-10的分泌。并且,含有IL-10的TAMs培养上清液可能通过上调卵巢癌细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平促进卵巢癌细胞的侵袭、增殖和迁移。综上所述,得出以下结论：(1)原发EOC癌组织及腹水中CD163+TAMs的数量及比例与EOC的恶性程度密切相关,表达越高,提示患者的疾病恶性程度越高。(2)EGF在体外可诱导外周血来源单核细胞分化为具有M2型巨噬细胞特征(CD163highIL-10highTGF-βhighIL-8high的TAMs,并且EGF刺激MOs后收取的条件培养上清可促进卵巢癌细胞的侵袭、增殖及迁移。(3)EGF与其受体EGFR结合后可能通过其下游PI3K/AKT和ERK两条信号通路促进TAMs分泌IL-10,而且IL-10可能通过上调卵巢癌细胞中VEGF和MMP-9的表达水平促进癌细胞的侵袭、增殖和迁移。
【作者】陈颖；
【导师】任秀宝；
【作者基本信息】天津医科大学，肿瘤学，2014，博士
【关键词】表皮生长因子；巨噬细胞；卵巢癌；白介素-10；磷酸化AKT；磷酸化ERK；

【参考文献】
[1]邹锦玉.L_(n,p)*图的拓扑指标及树的Laplacian系数的刻画[D].青海师范大学,基础数学,2012,硕士.
[2]陈霄凯.有限自动机（FA）在测控程序自动生成中的应用研究[D].华北电力大学（河北）,计算机应用技术,2004,硕士.
[3]张洁.磁性纳米材料在有机染料污染物分析检测及去除中的应用研究[D].西南大学,分析化学,2013,硕士.
[4]孙豫.商丘市质监系统固定资产信息化管理改善研究[D].山东大学,工业工程（专业学位）,2012,硕士.
[5]祝福.金纳米棒的可控组装及其在生物检测中的应用[D].哈尔滨工业大学,生物医学工程,2014,硕士.
[6]李先林.电力推进船舶电网谐波分析[D].大连海事大学,电力电子与电力传动,2004,硕士.
[7]高小泽.Rho激酶抑制剂在冠脉无复流中的临床疗效观察[D].延安大学,内科学,2014,硕士.
[8]彭滔.统计方法新动向——数掘挖据[J].统计与决策,2001,08:28.
[9]刘青.病理和生理状态对嗅球功能活动和连接的影响[D].中国科学院研究生院（武汉物理与数学研究所）,无线电物理,2013,博士.
[10]余建桥.基于云理论与数据场的空间孤立点挖掘研究[D].西南农业大学,2005.
[11]高为炳.关于非线性控制系统的稳定性问题[J].自动化学报,1964,01:16-27.
[12]蒲忠,刘险峰.谈客户关系管理认识上的误区及应对措施[J].现代管理科学,2005,10:92-93+113.
[13]肖楚丽.NOD1-NF-κB信号通路在幽门螺杆菌感染小鼠胃组织中的激活[D].南华大学,病原生物学,2012,硕士.
[14]陈兵辉.数据挖掘在书号管理中的应用与研究[D].北方工业大学,计算机技术,2013,硕士.
[15]王龙,张振洲,于海泓.黄河水利委员会信息化建设中的关键技术[J].人民黄河,2002,05:36-37+46.
[16]金哲熙.韩国跆拳道段位制和中国武术段位制对比研究[D].湖北大学,体育教育训练学,2011,硕士.
[17]金琳._IgA肾病不同病理病变的血管内皮生长因子表达[D].浙江大学,肾脏内科,2003,硕士.
[18]王永超.第三方回收努力的逆向供应链协调性研究[D].燕山大学,物流工程,2013,硕士.
[19]高进涛.基于相图的语音干扰效果评估测度技术研究[D].电子科技大学,电子与通信工程（专业学位）,2012,硕士.
[20]吴利利.“国培计划”农村小学语文骨干教师教学能力培训研究[D].西南大学,课程与教学论,2014,硕士.
[21]陈飞,裴丽,刘超.全光纤串联双环谐振器的滤波特性研究[J].光电技术应用,2014,02:46-50.
[22]刘泉君.创业板公司股权集中度及股权制衡度对业绩的影响[D].北京交通大学,会计（专业学位）,2013,硕士.
[23]胡勃.母语为韩语的学习者汉语易混淆虚词使用情况考察[D].吉林大学,汉语国际教育,2013,硕士.
[24]徐宏来.清代金陵甘氏家族研究[D].南京大学,中国古代史,2013,硕士.
[25]朱传柏,郭创新,曹一家.基于调度综合数据平台的大规模电网分层故障诊断[J].电力系统自动化,2009,01:51-55+65.
[26]史运宝.氧化铈基复合稀土抛光粉的合成及性能研究[D].华东理工大学,化学工程,2013,硕士.
[27]唐红迎.鄄城县50岁及以上农村居民白内障致盲与中重度视力损伤现况研究[D].山东大学,公共卫生（专业学位）,2012,硕士.
[28]陈庆国.大超联赛CUBS（北区）中锋队员进攻能力研究[D].东北师范大学,体育教育训练学,2012,硕士.
[29]张蕊蕊.基于溶液方法的有机场效应晶体管研究[D].海南大学,材料物理与化学,2014,硕士.
[30]周彦超.基于Android平台的微博系统设计与开发[D].燕山大学,计算机技术,2014,硕士.
[31]张欢欢.基于Copula-GARCH的沪深300股指期货套期保值比率研究[D].河北工程大学,管理科学与工程,2012,硕士.
[32]黄敏.基于改进粒子群算法的微电网多目标优化运行研究[D].重庆大学,电气工程,2014,硕士.
[33]张颖,冯纯伯.闭环系统辨识的偏差最小二乘法[J].自动化学报,1997,03:22-27.
[34]王珏.粗糙集理论及其应用研究[D].西安电子科技大学,2005.
[35]严瑶.用户创造内容（UGC）的受众角色研究[D].华中师范大学,新闻学,2014,硕士.
[36]吴琼,孙静.哥特女巫风格服装的流行与发展[J].南宁职业技术学院学报,2014,05:23-26.
[37]刘首娟.线粒体DNA D-LOOP区单核苷酸多态性联合CA125诊断早期上皮性卵巢癌的相关性研究[D].河北医科大学,妇产科学（专业学位）,2014,硕士.
[38]郑彩凤.《玉篇校释》引用古文字材料之研究[D].渤海大学,汉语言文字学,2014,硕士.
[39]黄龙.贵州贫困大学生资助体系建设研究[D].贵州财经大学,行政管理,2013,硕士.
[40]吴敏亚.基于标准的高中物理合作探究学习的策略研究[D].苏州大学,学科教学（专业学位）,2013,硕士.
[41]路慧萍,童学锋.保持隐私的决策树的生成过程研究[J].计算机应用,2005,06:1382-1384.
[42]李美琴.初中生物理自主学习现状调查研究[D].西北师范大学,教育,2014,硕士.
[43]冯松涛.发展哲学视野中的自由[D].中共中央党校,马克思主义哲学,2004,硕士.
[44]丁凌霄.金桥煤矿孤岛综放工作面应力时空演化规律研究[D].中国矿业大学,采矿工程,2014,硕士.
[45]唐斌.ID3算法在地质灾害易发性评价中的应用[D].长安大学,地质工程,2013,硕士.
[46]李乐勤.越南、泰国学生对汉语普通话声调的范畴感知研究[D].广西师范大学,语言学及应用语言学,2014,硕士.
[47]陈太明.哈贝马斯“道德证立”逻辑研究[D].山东大学,外国哲学,2014,博士.
[48]于海防,解福.基于Agent的数据挖掘在CRM中的应用[J].山东师大学报(自然科学版),2004,01:82-85.
[49]张慎明,刘国定.IEC61970标准系列简介[J].电力系统自动化,2002,14:1-6.
[50]廖光辉.湖南对外贸易的财经支持体系研究[D].湖南大学,工商管理,2003,硕士.