家蚕储存蛋白Storage protein（SP3）基因克隆及调节黑化作用的研究

【摘要】Storageprotein（SP），是家蚕的储存蛋白，由幼虫的脂肪体合成，然后释放到血淋巴中并积累。本文以家蚕为材料，克隆了家蚕的储存蛋白（Bmsp3）基因序列，根据基因序列推测了其氨基酸序列，并与昆虫其他储存蛋白的氨基酸序列进行了比对分析，检测了sp3在家蚕幼虫4龄及5龄3天时精巢、卵巢、表皮、脂肪体、血液、中肠、丝腺、马氏管的表达，研究还发现，sp3参与外源siRNA诱导的黑化作用。主要研究结果如下：1）家蚕储存蛋白基因sp3的克隆和序列分析本文以家蚕脂肪体cDNA为模板，扩增并克隆了家蚕储存蛋白sp3基因。家蚕sp3基因开放阅读框2091bp，编码696个氨基酸。预测蛋白质分子量约为82.10kDa，等电点约5.90，信号肽是前27-74位。家蚕sp3与烟草天蛾β-芳基储存蛋白亚基，苏托斯凤蝶芳基储存蛋白，铃夜蛾幼虫血清蛋白1的核酸序列及氨基酸进行序列比对，核酸序列比对同源性达75%以上，氨基酸序列同源性也很高，如与β-芳基储存蛋白亚基同源性为62.5%，芳基储存蛋白同源性53.4%，幼虫血清蛋白1同源性达60.6%。2）Bmsp3组织特异性表达家蚕4龄及5龄幼虫3天时精巢、卵巢、表皮、脂肪体、血液、中肠、丝腺、马氏管中Bmsp3的转录水平，结果显示sp3在上述组织均有表达，其中在血液与脂肪体中含量最多，且5龄高于4龄。3）sp3参与外源siRNA诱导的家蚕黑化作用siRNA片段转染家蚕，处理后0h，12h，24h，48h检测家蚕幼虫血淋巴的PPO活性，结果显示，在siRNA片段处理后一定时间后PPO活性上升，在处理后24h时活性最高。检测了家蚕血液黑化作用相关基因（BmPPAE，Bmserpin-3，BmBGRP1，BmBGRPB2，BmPPO2，BmDDC）在siRNA片段干扰后的表达水平，结果显示，BmPPAE，Bmserpin-3的表达量增加，BmBGRP1，BmBGRPB2的表达则下降，BmPPO2，BmDDC的表达量略下降。
【作者】何渐鸣；
【导师】许雅香；
【作者基本信息】苏州大学，农业推广（专业学位），2014，硕士
【关键词】家蚕；sp3基因；黑化作用；RNAi；

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