LGR5在宫颈癌组织表达的临床意义及其对宫颈癌细胞生物学行为的影响

【摘要】宫颈癌是世界上女性最常见的三大恶性肿瘤之一，发展中国家女性第二大死亡原因。全球范围内每年大约有53万的新发病例及27.5万的死亡病例。我国每年有约13.7万左右新发病例，约占世界宫颈癌发病率的1/5。复发病例约占35%，复发于首次发病3年内的占90%。近年来发病率不断上升，且呈现年轻化趋势。目前认为，高危型人乳头瘤样病毒是宫颈癌发生的最主要因素。近几十年由于宫颈癌筛查的广泛开展，使许多宫颈癌得以早期发现和及时治疗，治疗方法有手术、放疗、化疗等综合治疗方案。早期宫颈癌的5年生存率约90%以上，但晚期和复发性宫颈癌的5年生存率仅为3.2%-13%，中国每年约2-3万妇女死于宫颈癌。晚期和复发患者生存率低的原因在于宫颈癌的常规治疗手段虽能杀灭大部分肿瘤细胞，但却无法根除耐药的肿瘤干细胞，而成为肿瘤复发的根源。肿瘤组织中的肿瘤细胞是一个异质性的群体。其中肿瘤干细胞是肿瘤组织中少量具有自我更新、分化潜能、侵袭、转移能力的干细胞样细胞。肿瘤干细胞往往在药物治疗时处于休眠状态，在药物治疗后继续产生新的肿瘤细胞，导致癌症复发。因而，如何通过特异性标志物来鉴定肿瘤干细胞具有重要科学意义。LGR5是近年新发现的肿瘤干细胞标志物，LGR5信号能抑制肿瘤细胞凋亡、促进细胞增殖，与肿瘤的发生发展有密切关系。LGR5一度被认为是孤儿受体，新近发现，R-spondin可作为配体与之结合，进而激活Wnt信号通路，调节干细胞分化发育和肿瘤的发生发展过程。本文通过组织芯片和免疫组化法检测LGR5在宫颈癌组织中的表达，进而检测LGR5在宫颈癌细胞系中的表达，并以LGR5+SiHa细胞株为模型，探讨了R-spondin1/LGR5信号对SiHa细胞增殖、细胞周期、细胞因子产生以及裸鼠体内成瘤的影响，阐述了LGR5分子在宫颈癌组织中的表达规律以及对宫颈癌肿瘤细胞生物学行为的影响，这有助于靶向肿瘤干细胞进行宫颈癌的诊断和治疗。一、LGR5分子在宫颈癌组织中的表达情况
【作者】邓云；
【导师】居颂光；
【作者基本信息】苏州大学，免疫学，2014，硕士
【目的】检测人宫颈癌组织及癌旁组织中LGR5分子的表达，分析其表达与宫颈癌临床病理因素的关系。
【方法】采用组织芯片和免疫组化法，对宫颈癌、癌旁鳞状上皮组织中LGR5表达进行检测评分和统计学分析，探讨LGR5在宫颈癌中表达规律及临床意义。
【结果】LGR5的表达在宫颈癌、癌旁组织中鳞状上皮有显著性差异，在宫颈癌中呈高表达且随着病理级别的增加表达逐渐增强，与病理分级密切相关。
【结论】LGR5在宫颈鳞状上皮癌组织中异常高表达，与肿瘤的恶性程度密切相关。有望为宫颈癌的检测和治疗提供新思路。二、R-spondin1/LGR5信号对宫颈癌细胞株SiHa生物学行为的影响
【目的】研究R-spondin1/LGR5信号对宫颈癌细胞株SiHa体外增殖、细胞因子产生和裸鼠体内成瘤等生物学行为的影响。
【方法】采用FCM检测SiHa细胞膜LGR5的表达；采用细胞计数和FCM法检测R-spondin1/LGR5信号对SiHa细胞增殖和细胞周期的影响；ICC法检测SiHa细胞内IL-6、TGF-β的产生；采用裸鼠成瘤实验验证R-spondin1/LGR5信号对SiHa细胞裸鼠体内成瘤及肿瘤生长的影响。
【结果】①FCM显示SiHa细胞高表达LGR5分子。②细胞增殖实验结果证实R-spondin1/LGR5信号能促进SiHa细胞体外增殖。③细胞周期检测结果提示R-spondin1/LGR5信号刺激可增加SiHa细胞S期细胞比例，减少G1/G0期细胞比例。④细胞内染色结果显示R-spondin1/LGR5信号能刺激促进SiHa细胞IL-6产生，效应呈剂量依赖性，但不影响SiHa细胞TGF-β合成。⑤裸鼠体内成瘤实验显示：与对照组相比，R-spondin1处理组宫颈癌细胞株SiHa在裸鼠体内成瘤时间短、成瘤数量多、肿瘤生长速度快。
【结论】宫颈癌细胞株SiHa高表达LGR5分子。这提示了肿瘤干细胞表面标记分子LGR5及其信号能促进宫颈癌细胞SiHa体外增殖、IL-6产生和裸鼠体内肿瘤形成等恶性生物学行为，这为靶向宫颈癌干细胞生物治疗提供了潜在靶点。
【关键词】宫颈癌；LGR5；R-spondin1；

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