大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞多向分化潜能的鉴定

【摘要】目的：应用大鼠阴茎海绵体分离、纯化肌源性干细胞（musclederivedstemcells,MDSCs）,检测干细胞标志物的表达，并将分离得到的细胞进行传代培养；检测分离细胞在特定条件下向成脂细胞及成骨细胞分化的潜能；检测分离细胞在特定条件下向内皮细胞分化的潜能。方法：取2月龄SD雄性大鼠为实验对象，用酶消化法结合percoll密度梯度离心法及改良的Preplate差速贴壁法，分离、纯化大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞。利用免疫荧光细胞化学法检测肌源性干细胞标记物干细胞抗原1（Sca-1）和结蛋白（Desmin）在PP6细胞中的表达，并对PP6细胞进行传代培养。将第3代PP6细胞在成脂及成骨诱导分化培养基中培养21d，同时对照组采用干细胞培养基培养；分别于诱导0d、7d、14d、21d通过油红“O”染色，观察是否有脂滴形成；通过茜素红染色，观察是否有成骨细胞形成的钙结节。将第3代PP6细胞在血管内皮细胞生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（Basicfibroblastgrowthfactor,bFGF）共同诱导21d后，免疫荧光细胞化学法鉴定内皮细胞标志物CD31及胎肝激酶-1（Flk-1）的表达；分别在诱导0d、5d、10d、15d、21d，通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测干细胞标志物（Oct-4）和内皮细胞标志物CD31、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、Flk-1的mRNA表达量；通过Dil-Ac-LDL摄取实验检测细胞吞噬低密度脂蛋白的能力；划痕24h后观察划痕空白处的距离，评估细胞的迁移能力。结果：分离、纯化的PP6细胞表达肌源性干细胞标志物Sca-1和Desmin。在成脂诱导分化过程中，诱导前3d可见细胞的形状由长梭形变为圆形或者三角形，排列紧密，呈叠瓦样，细胞核清晰，细胞分裂增殖明显减慢，油红O染色诱导组与对照组均未见细胞红染；7d左右在相差显微镜下可观察到胞质内有少量的高折光性小脂滴出现，大小均匀，主要集中在细胞核周围，油红O染成红色；14d左右细胞内脂滴逐渐增多并融合成大脂滴，细胞核被挤到一边或者消失；诱导21d细胞分化达高峰，细胞体积达到最大，胞质内脂滴数量最多，继续诱导，细胞内未见空泡增多。而对照组细胞形态未发生变化，且油红O染色阴性。在成骨诱导分化过程中，诱导前7d可见细胞的形状由长梭形变为圆形或者三角形，排列紧密，细胞核清晰，细胞分裂增殖明显减慢，茜素红染色两组均未见钙结节形成；诱导14d后，细胞出现层叠、聚集生长态势，融合的细胞呈现“叠瓦样”改变，细胞体积变大、形态呈多边形，核大，核仁清晰，细胞内颗粒增多，细胞外有少量基质分泌，茜素红染色可见散在分布的钙结节形成；诱导21d时镜下可见细胞内颗粒增多，细胞外基质分泌旺盛，茜素红染色显示细胞间红色矿化基质沉淀，钙结节形成。在内皮细胞诱导分化过程中，PP6诱导21d后表达内皮细胞标志物（CD31和Flk-1）；诱导21d后与诱导0d比较，干细胞标志物Oct-4的mRNA表达量下降（下降倍数为0.445±0.025），而内皮细胞标志物mRNA表达量升高（CD31、eNOS、Flk-1升高倍数分别为2.541±0.146、2.364±0.175、2.538±0.100），差异均有统计学意义（P<0.05）；Dil-Ac-LDL摄取实验提示诱导后的细胞具有吞噬低密度脂蛋白的能力；划痕实验观察到诱导组空白处距离为282.01±3.84，未诱导组空白处距离为450.35±1.86，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：大鼠阴茎海绵体中分离纯化的细胞表达肌源性干细胞标记物，并且在特定条件下可分化为成脂细胞、成骨细胞及内皮细胞，进一步证实了阴茎海绵体中存在肌源性干细胞。
【作者】邓新喜；
【导师】单玉喜；
【作者基本信息】苏州大学，外科学，2014，硕士
【关键词】肌源性干细胞；诱导分化；成脂细胞；成骨细胞；内皮细胞；

【参考文献】
[1]李俊哲.煤与瓦斯突出和天然地震相关性研究[D].辽宁工程技术大学,采矿工程,2012,硕士.
[2]郭利伟.自媒体传播的表达自由与规制[D].河北经贸大学,伦理学,2014,硕士.
[3]刘静.中国利用外国直接投资的现状以及对策研究[D].武汉理工大学,产业经济学,2003,硕士.
[4]敬希泠.企业人力资本投资的博弈分析[D].重庆大学,会计学,2003,硕士.
[5]李冬.税收客体归属认定法律问题研究[D].中国政法大学,经济法学,2013,硕士.
[6]徐冰.独立学院电化教学管理及录播系统的设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2012,硕士.
[7]于越.PEP小学英语教材调查及评价[D].内蒙古师范大学,小学教育（专业学位）,2013,硕士.
[8]李玉艳.高出生体重和超重肥胖对儿童青少年血压影响的队列研究[D].复旦大学,流行病与卫生统计学,2013,博士.
[9]刘宏.预制梁与整体化层结合面剪应力分析[D].长安大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[10]周平.D公司医药代表培训体系的改进[D].云南大学,工商管理,2012,硕士.
[11]李胜.记忆、体验与社交媒介—流行音乐与小康村新生代劳工的主体性[D].南京大学,人类学,2013,硕士.
[12]韩雪婷.药用植物远志的谱系地理学研究[D].西北大学,植物学,2014,硕士.
[13]王慧.天山北坡融雪期季节性冻土下渗机制研究[D].新疆大学,地理学,2013,硕士.
[14]王慧兮.A公司生物组织医疗修补材料在中国疝外科市场的营销策略研究[D].西南交通大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[15]思奇甬.基于J2EE的咸阳机场企业信息门户设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[16]邵青贤.我国FDI区位选择影响因素空间计量研究[D].西南大学,区域经济学,2014,硕士.
[17]马至远.离散制造业生产物流参数设定与仿真优化系统研究[D].山东大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[18]周建华,王加阳,徐联华.计算机犯罪取证技术研究[J].农业网络信息,2005,09:58-61.
[19]朱家翔.TD-SCDMA下行链路匹配支路选择及帧同步技术的研究[D].浙江工业大学,通信与信息系统,2011,硕士.
[20]李宏毅,杨军.建筑照明技术与节能(2)[J].建筑创作.2003(09)
[21]曾海燕.齐家—古龙地区葡萄花油层细分层沉积相研究[D].东北石油大学,矿产普查与勘探,2013,硕士.
[22]周鹏.复合金属硫化物催化剂的表面结构改性及其可见光催化析氢性能的研究[D].兰州大学,2012.
[23]王蕾.右归丸对激素耐药型肾病综合征患者疗效观察及MDR1、P-gp170的影响[D].甘肃中医学院,中西医结合临床,2014,硕士.
[24]郗菲菲.超级电容器氨基蒽醌电极材料的制备及改性[D].大连理工大学,化学工程,2013,硕士.
[25]范高强.《六朝文絜》研究[D].辽宁大学,中国古代文学,2012,硕士.
[26]刘宇.基于数据挖掘方法对当代名中医辨治慢性萎缩性胃炎用药规律研究[D].河北医科大学,中医内科学,2014,硕士.
[27]王春伟,高秀敏,盖洪涛.关于WTO中国公路发展的几点看法[J].交通世界.2003(06)
[28]杨晓宁.XX餐厅薪酬体系再设计[D].山东大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.
[29]刘欢锐.石墨烯/镍/聚环氧乙烷三元复合材料的制备与性能研究[D].西南科技大学,2014.
[30]鲁川.面向信息物理融合系统的实时时空调度算法[D].广东工业大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[31]曾汉东.斯特制版公司ERP应用研究[D].武汉大学,2004.
[32]孔令龙.锂离子电池硅基负极材料制备及改性研究[D].天津理工大学,材料学,2013,硕士.
[33]杨素静.一位民歌手的文化学启示[D].河北师范大学,音乐学,2012,硕士.
[34]周舟.基于多道奇异谱分析方法的地震数据重建[D].中国地质大学（北京）,地球物理学,2014,硕士.
[35]尚婷.电视节目模板知识产权保护研究[D].大连海事大学,法学,2013,硕士.
[36]李德才,韩敏.基于奇异值分解及PRESS统计的模型结构优化方法[J].控制与决策,2012,08:1273-1276.
[37]韩文静,李海峰,阮华斌,马琳.语音情感识别研究进展综述[J].软件学报,2014,01:37-50.
[38]何冬冬.基于UCOS的酒店客房信息终端[D].华侨大学,计算机技术（专业学位）,2014,硕士.
[39]李俭.AR膜的制备及微结构调制的研究[D].燕山大学,材料学,2013,硕士.
[40]朱浩煜.柔性夹具自动化装配技术的研究[D].南昌航空大学,航空宇航制造工程,2013,硕士.
[41]李春旭.膨润土碱法活化制备P型分子筛的研究[D].河北工业大学,化学工艺,2004,硕士.
[42]徐礼贵,夏义平,刘万辉.综合利用地球物理资料解释叠合盆地深层火山岩[J].石油地球物理勘探,2009,01:70-74+97+130+3.
[43]贾国倩.美国文化贸易的成功机制及启示[D].青岛大学,国际贸易学,2013,硕士.
[44]陶佳燕,李银红,石东源,覃松涛,郑发林,蒙亮.EMS与继电保护定值校核系统实时数据匹配新方法[J].电力系统自动化,2012,10:79-85.
[45]于湘丽.松茸菌液体发酵及多糖抗肿瘤活性的研究[D].吉林大学,生物工程,2014,硕士.
[46]李源.满园春色关不住[D].河南大学,中国古代文学,2004,硕士.
[47]李忠献,王虹,吕杨,徐龙河.钢筋混凝土框架结构地震失效模式优化[J].天津大学学报(自然科学与工程技术版),2014,04:364-370.
[48]刘爱波.壳聚糖及壳聚糖—酵母多糖复合微球抗大鼠PCP的研究[D].重庆医科大学,病原生物学,2014,博士.
[49]朱海燕.七自由度仿人机械臂轨迹规划与控制方法研究[D].浙江工业大学,2012.
[50]杨敏生,裴保华,程志鹏.白杨杂种无性系抗寒性生理指标动态分析[J].植物生态学报,1997,04:72-80.