榄香烯对肝癌细胞株中抑癌基因甲基化影响的实验研究

【摘要】目的：研究榄香烯对肝癌细胞株HepG2和QGY7703细胞增殖、凋亡、周期的影响，明确榄香烯对两种肝癌细胞抗肿瘤作用；检测榄香烯处理前后的两种细胞中抑癌基因GSTP1、RIZ1、HAI-2、SLIT2甲基化状态，探讨榄香烯是否具有逆转异常甲基化作用，并以期筛选出具有肝癌特异性的抑癌基因。方法：采用不同浓度的榄香烯处理肝癌细胞株HepG2和QGY7703细胞，用MTT法检测榄香烯对两种细胞抑制增殖的作用，流式细胞术检测榄香烯诱导细胞凋亡的作用及对细胞周期的影响，用MSP法检测榄香烯对处理前后的两种细胞中抑癌基因GSTP1、RIZ1、HAI-2、SLIT2甲基化的影响。结果：不同浓度的榄香烯作用肝癌细胞株HepG2和QGY7703细胞48h后，显示出对两种肝癌细胞明显抑制增殖作用，对两种肝癌细胞的IC50分别为（69±6.3）μg/ml和（63±2.1）μg/ml；与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）；两种肝癌细胞未经榄香烯处理时自然凋亡率分别为（6.37±0.15）%和（7.40±0.66）%，榄香烯在10、20、30μg/ml浓度下对两种肝癌细胞的凋亡率分别为（20.83±0.25）%和（12.50±0.61）%、（27.7±0.75）%和（32.77±2.30）%、（37.1±0.46）%和（48.27±1.23）%，各组间差异有明显统计学意义（P<0.05）；在10、20、30μg/ml浓度下，榄香烯能使两种肝癌细胞阻滞于S期，G1期细胞百分比分别由（68.71±0.69）%和（65.56±0.41）%下降到（60.81±0.38）%和（53.00±0.15）%，S期细胞百分比分别由（28.85±0.18）%和（27.04±0.45）%增加到（36.81±0.36）%和（38.43±0.60）%，与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）；GSTP1、RIZ1、HAI-2基因在肝癌细胞株HepG2和QGY7703两种细胞中均呈完全甲基化表达，SLIT2基因呈部分甲基化表达，其中经过浓度40μg/ml和160μg/ml榄香烯和5-Aza-dc处理，GSTP1基因在QGY7703细胞中出现了未甲基化状态。结论：1.榄香烯对肝癌细胞株HepG2和QGY7703细胞有明显的抑制增殖作用，诱导其凋亡，并且阻滞两种肝癌细胞从S期进入G2/M期，呈浓度依赖性。2.榄香烯具有逆转抑癌基因异常甲基化作用，但具有基因和细胞特异性。3.GSTP1、RIZ1、HAI-2基因甲基化状态具有很好的肝癌特异性，可建立甲基化谱，可较好的区分肝癌与非肝癌。
【作者】黄洪军；
【导师】江勇；
【作者基本信息】苏州大学，普通外科学（专业学位），2014，硕士
【关键词】榄香烯；抑癌基因；甲基化；

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