ARF6促进人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖和耐药的分子机制研究

【摘要】慢性粒细胞白血病（Chronicmyeloidleukemia，CML）是一种起源于骨髓多能造血干细胞的恶性克隆增殖性疾病，占成人白血病的15%~20%。在CML病人中，95%是由于BCR-ABL融合基因诱导产生的，BCR-ABL是由9号和22染色体易位而产生的融合基因，编码一个持续活化的酪氨酸激酶，能诱导CML的发生。针对BCR-ABL开发的靶向药物Imatinib取得了较好的临床疗效，使无法进行造血干细胞移植的病人病程得以控制，但Imatinib并不能治愈CML，因为这类药物长期应用易造成BCR-ABL基因突变而产生耐药性，并且也无法清除白血病干细胞（leukemiastemcells,LSCs），进而使疾病缓解后又最终复发，因此寻找BCR-ABL激酶以外的药物新靶点和清除LSCs才是治愈CML的关键。RacGTPs是近年来CML研究的一类热点基因，它位于BCR-ABL的下游，通过调控Ras/MAP、PI3K/Akt、FAK和Stat5等信号传导以及Bcl-XL等基因表达来促进CML细胞的增殖、迁移和耐药等。在RacGTPs基因家族中，与CML关系研究最多的是Rac1，Rac1活化对BCR-ABL诱导的CML发生、白血病细胞耐药和体内维持LSCs微环境都有非常关键的作用。然而BCR-ABL调控Rac1活化的作用机制至今仍然没有阐述清楚。近年来另一种小GTP结合蛋白ARF6，被发现能够通过自身活化与失活状态调节Rac1活性，ARF6是否介导了BCR-ABL-Rac1信号通路以及ARF6在BCR-ABL诱导的CML中是否发挥关键作用，成为本课题研究的出发点。基于这些疑问，本课题将运用分子生物学、细胞生物学和遗传学等实验方法和手段，从分子水平上探讨ARF6在BCR-ABL诱导的CML中的作用及可能的分子机制，对揭示CML的发病机制和寻找新的药物靶点具有重要的意义。为了研究ARF6在BCR-ABL诱导的CML中的作用，本实验首先建立了ARF6沉默的K562细胞系（shARF6），通过与对照组细胞系（ARF6-NC）比较，研究ARF6对K562细胞增殖、生存、分化和耐药的影响，并对其促进K562细胞增殖和耐药的分子机制进行了初步研究。一、ARF6对K562细胞增殖、生存、分化和耐药的影响方法：1.采用CFU检测ARF6沉默对K562细胞克隆形成能力的影响。2.采用CCK8检测ARF6沉默对K562细胞增殖及对药物的敏感性。3.采用AnnexinV染色检测ARF6沉默对K562细胞生存的影响。4.采用CD14表达分析和吉姆萨染色研究ARF6对K562细胞分化的影响。结果：1.CFU结果显示shARF6实验组克隆数量明显少于ARF6-NC对照组。2.CCK8结果显示shARF6实验组细胞增殖速度明显低于对照组的增殖速度；shARF6实验组对Imatinib和Ara-c的敏感性明显高于对照组。3.AnnexinV染色结果显示shARF6实验组凋亡率与对照组相比无明显差异。4.CD14表达分析结果显示shARF6实验组CD14阳性率与ARF6-NC对照组相比无明显差异，吉姆萨染色结果进一步说明shARF6实验组没有出现明显的细胞核分化特征。二、ARF6促进K562细胞增殖和耐药的分子机制研究方法：运用WesternBlot方法检测ARF6沉默对Stat5、ERK和AKT等信号传导的影响及对cyclinB1、c-Myc、p21和A1等基因表达的调控。结果：与对照组相比，ARF6沉默抑制了Stat5和AKT磷酸化，但不影响ERK磷酸化；ARF6沉默上调了p21基因表达，下调了cyclinB1、c-Myc和A1等基因表达。结论ARF6促进K562细胞增殖和克隆形成能力，并增强K562细胞对Imatinib和Ara-c等药物的抗性，初步的研究结果显示这些作用是通过活化STAT5和AKT2条信号通路，调控c-Myc、cyclinB1、p21和A1等基因表达实现的。
【作者】许会静；
【导师】肖业臣；
【作者基本信息】吉林大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】慢性粒细胞白血病；ARF6；增殖；耐药；分子机制；

【参考文献】
[1]倪宏刚.天波超视距雷达多路径数据处理算法研究[D].哈尔滨工业大学,信息与通信工程,2013,硕士.
[2]曹淑瑞.纳米复合材料固载生物氧化酶构建高灵敏电流型酶生物传感器的研究[D].西南大学,2013.
[3]张晓军.面向多学科优化过程的柴油机本体模型建模与应用研究[D].江苏科技大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[4]罗秀.六月青多糖及其皂苷对鸭乙型肝炎的治疗作用及分子作用机制研究[D].广西医科大学,药理学,2013,硕士.
[5]石勇,李银国,陈和平.基于连续型决策表的模糊PID控制方法[J].冶金自动化,2007,01:9-13.
[6]李佳佳.我国政府社会管理职能创新研究[D].燕山大学,思想政治教育,2013,硕士.
[7]赵郁飞.论中国古典诗歌在对外汉语文化教学中的价值[D].吉林大学,汉语国际教育,2012,硕士.
[8]钟智,苏毅娟.关联规则的不确定性度量研究[J].广西师范学院学报(自然科学版),2003,02:78-82.
[9]唐幸福.几种桥联配体的配合物的研究[D].广西师范大学,无机化学,2003,硕士.
[10]李天媛.初中生功能性阅读能力研究[D].首都师范大学,学科教学,2014,硕士.
[11]王硕.民生新闻的语言研究[D].山西师范大学,语言学及应用语言学,2014,硕士.
[12]李平锭.建筑安装企业施工项目管理的理论与实证分析[D].四川大学,工商管理,2003,硕士.
[13]梁玉春.后冷战时期影响新疆稳定的国际因素及对策[D].华东师范大学,马克思主义理论与思想政治教育,2003,硕士.
[14]徐华.岩溶地区钻孔灌注桩施工工艺及承载能力研究[D].武汉理工大学,船舶与海洋工程,2003,硕士.
[15]齐桂雪.北二东层系调整后剩余油分布规律及开发指标预测研究[D].东北石油大学,油气田开发工程,2013,硕士.
[16]刘丛.金朝前期的事金宋人研究[D].东北师范大学,中国古代史,2012,硕士.
[17]杨雪梅.结合市场经济下医患关系的认识对医德教育的思考[D].华东师范大学,马克思主义理论与思想政治教育,2003,硕士.
[18]孙华.基于鲁棒优化的城市交通网络设计模型与算法研究[D].北京交通大学,系统分析与集成,2014,博士.
[19]郑建军,刘炜,刘琼昕,刘玉树.基于选择性的贝叶斯分类器集成方法[J].北京理工大学学报,2003,06:724-727.
[20]何小娟.前列地尔对体外培养类缺血再灌注模型视网膜神经节细胞的影响[D].广西医科大学,眼科学,2013,硕士.
[21]陈振宇.“七五”期间钢铁工业自动化的发展和展望[J].冶金自动化,1986,03:2-5+63.
[22]谢静静.考虑接缝传荷能力的刚性道面设计计算理论[D].西北工业大学,结构工程,2004,硕士.
[23]刘元艺.未成年人监护制度比较研究[D].吉林财经大学,民商法学,2014,硕士.
[24]文杏梓.基于用户需求的可信软件质量属性评价方法研究[D].中南大学,管理科学与工程,2013,博士.
[25]范才山.社会网络对创业机会识别的影响研究[D].西南交通大学,企业管理,2013,硕士.
[26]袁青燕.价值网的竞争优势形成机理研究[D].江西财经大学,管理理论与企业管理,2013,博士.
[27]李明明.我国药品定价的法律化规制思考[D].山东大学,法律（专业学位）,2012,硕士.
[28]赵影.DLNA数字家庭网络在Ad Hoc组网模式下的研究与实现[D].南京邮电大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[29]段虞峰.面向功能机用户的安卓智能机用户引导系统研究与设计[D].湖南大学,设计艺术学,2012,硕士.
[30]白媛媛.秘密侦查程序控制研究[D].辽宁大学,法律,2012,硕士.
[31]张慧生.自然资源流量测度与经济分析[D].厦门大学,统计学,2014,硕士.
[32]李传智.对优化太原市交通规划的构想[J].山西科技.2003(03)
[33]孔维森.高速切削淬硬钢已加工表面白层和残余应力的预测与实验研究[D].大连理工大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[34]王正文.Genistein与5-FU对人胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901的作用及相关机制研究[D].重庆医科大学,外科学,2004,硕士.
[35]谢永军.内陆港空箱调运问题研究[D].大连海事大学,物流工程,2013,硕士.
[36]王鹤.村民合作行为：乡村公共空间的三种维度[D].兰州大学,行政管理,2013,硕士.
[37]曾佳兴.青少年与中老年腰椎间盘突出相关因素分析[D].广西医科大学,骨科学（专业学位）,2013,硕士.
[38]吴学仪.封闭负压引流技术对大面积创面愈合的影响分析[D].青岛大学,人体解剖与组织胚胎学,2012,硕士.
[39]祁季和.ATG-1/30型安全脱水供电装置的研制[J].油田地面工程.1990(05)
[40]王蓓.马克思的社会主义理论[D].吉林大学,马克思主义哲学,2014,硕士.
[41]林玥,任坚毅,岳明.太白山红桦种群结构与空间分析[J].植物生态学报,2008,06:1335-1345.
[42]高晶.含氟的β-咔啉类生物碱的合成与研究[D].大庆石油学院,化学工艺,2004,硕士.
[43]匡彦军.瑕疵出资股东权利限制问题研究[D].中国社会科学院研究生院,商法（专业学位）,2014,硕士.
[44]张翊孟,郭善力,陈兴国.可控震源地震采集质量监控技术[J].石油地球物理勘探,2008,S2:98-100+177+5+4.
[45]谢颖.从系统科学的角度看经济法的产生和发展[D].中国政法大学,经济法学,2004,硕士.
[46]杨静波,范永强.杭钢高速线材轧机自动控制系统[J].冶金自动化,2003,S1:123-125.
[47]周睿.哥氏振动陀螺的误差分析与建模[D].哈尔滨工业大学,控制工程,2013,硕士.
[48]刘亚帝.冰雪条件下城市主干道车辆跟驰模型及仿真研究[D].哈尔滨工业大学,交通运输工程,2013,硕士.
[49]张道新.“A+的+H”类组合式定中结构的认知分析[D].辽宁师范大学,汉语言文字学,2003,硕士.
[50]张赛.冻融作用对我国东北典型农田黑土重金属Cd迁移转化的影响[D].吉林大学,环境科学,2014,硕士.