表达TIPE2腺病毒载体的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响

【摘要】目的结肠癌的发生与结肠慢性炎症密切相关。TIPE2(Tumornecrosisfactor-α-inducedprotein8-like2)是一种炎症和免疫平衡的调节因子。本实验旨在构建表达TIPE2的腺病毒载体，并初步观察其对结肠癌细胞增殖的影响。方法HEK293细胞中Trizol法提取RNA、逆转录、Primerstar程序扩增出目的片段TIPE2-cDNA后，将TIPE2-cDNA定向克隆至转移质粒pShuttle-CMV多克隆位点，然后与病毒骨架质粒pAdc68重组，在HEK293细胞中包装成完整病毒并复制扩增、纯化，获得表达TIPE2的重组腺病毒载体，命名为Adc68-TIPE2。实时荧光定量PCR及Westernblot检测病毒感染后TIPE2在结肠癌细胞系HT29及SW620中的表达，MTT法检测TIPE2对结肠癌细胞增殖的影响。结果重组腺病毒载体Adc68-TIPE2构建成功。病毒感染后TIPE2可在结肠癌细胞系HT29及SW620中高效表达。以不同浓度Adc68-TIPE2（分别为108vp/ml,109vp/ml,1010vp/ml）感染HT29及SW620细胞48小时后，HT29细胞的增值率分别为93%，71%，14%,与空载体相比病毒浓度为109vp/ml、1010vp/ml差异有统计学意义（P<0.05),病毒浓度为108vp/ml差异无统计学意义（P>0.05）；SW620增殖率分别为89%，53%，10%,与空载体相比病毒浓度为108vp/ml,109vp/ml差异有统计学意义（P<0.05）,病毒浓度为1010vp/ml差异无统计学意义（P>0.05）。结论本研究成功构建表达TIPE2的腺病毒载体Adc68-TIPE2，Adc68-TIPE2可抑制结肠癌细胞增殖，为后续研究其抗肿瘤机制奠定基础。
【作者】慈雪萍；
【导师】常树建；周东明；
【作者基本信息】苏州大学，肿瘤学，2014，硕士
【关键词】TIPE2；腺病毒载体；结肠癌；

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