表达TIPE2腺病毒载体的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响

表达TIPE2腺病毒载体的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响

作者:师大云端图书馆 时间:2018-05-06 分类:参考文献 喜欢:531
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【摘要】目的结肠癌的发生与结肠慢性炎症密切相关。TIPE2(Tumornecrosisfactor-α-inducedprotein8-like2)是一种炎症和免疫平衡的调节因子。本实验旨在构建表达TIPE2的腺病毒载体,并初步观察其对结肠癌细胞增殖的影响。方法HEK293细胞中Trizol法提取RNA、逆转录、Primerstar程序扩增出目的片段TIPE2-cDNA后,将TIPE2-cDNA定向克隆至转移质粒pShuttle-CMV多克隆位点,然后与病毒骨架质粒pAdc68重组,在HEK293细胞中包装成完整病毒并复制扩增、纯化,获得表达TIPE2的重组腺病毒载体,命名为Adc68-TIPE2。实时荧光定量PCR及Westernblot检测病毒感染后TIPE2在结肠癌细胞系HT29及SW620中的表达,MTT法检测TIPE2对结肠癌细胞增殖的影响。结果重组腺病毒载体Adc68-TIPE2构建成功。病毒感染后TIPE2可在结肠癌细胞系HT29及SW620中高效表达。以不同浓度Adc68-TIPE2(分别为108vp/ml,109vp/ml,1010vp/ml)感染HT29及SW620细胞48小时后,HT29细胞的增值率分别为93%,71%,14%,与空载体相比病毒浓度为109vp/ml、1010vp/ml差异有统计学意义(P<0.05),病毒浓度为108vp/ml差异无统计学意义(P>0.05);SW620增殖率分别为89%,53%,10%,与空载体相比病毒浓度为108vp/ml,109vp/ml差异有统计学意义(P<0.05),病毒浓度为1010vp/ml差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究成功构建表达TIPE2的腺病毒载体Adc68-TIPE2,Adc68-TIPE2可抑制结肠癌细胞增殖,为后续研究其抗肿瘤机制奠定基础。
【作者】慈雪萍;
【导师】常树建;周东明;
【作者基本信息】苏州大学,肿瘤学,2014,硕士
【关键词】TIPE2;腺病毒载体;结肠癌;

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