Caspr4通过LNX2调节神经前体细胞的增殖和分化

【摘要】目的：神经前体细胞（NPCs）是存在于中枢神经系统，具有自我更新和多种分化潜能的始祖细胞。在一定条件下，神经前体细胞可以保持增殖能力，并能够向神经元、少突胶质细胞和星型胶质细胞分化。本课题研究Caspr（Contactinassociatedprotein）家族中的Caspr4与LNX2（LigandofNumbproteinX2）之间的相互关系及对神经前体细胞的增殖和分化的影响。方法：利用免疫荧光染色（Immunofluorescencestaining）、PCR（PolymeraseChainReaction）及蛋白免疫印迹（Westernblot）等技术检测Caspr4及LNX2在小鼠神经前体细胞上的表达；分离、培养来源于C57BL/6小鼠胚胎发育期14天的神经前体细胞，利用电转的方法，在神经前体细胞上电转SiRNA，并用BrdU嵌合实验分析Caspr4或LNX2对神经前体细胞增殖的影响；在离体培养的神经前体细胞上电转Caspr4、Caspr4sh、LNX2、LNX2sh及C4ICD等质粒，并诱导神经前体细胞的分化，分析Caspr4及LNX2对神经前体细胞分化的影响以及两者之间的相互联系；利用免疫荧光染色观察Caspr4与LNX2在神经前体细胞中的共定位情况；在COS7细胞中转染质粒Caspr4和myc-LNX2，并利用免疫共沉淀法（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）研究Caspr4和LNX2的相互作用关系。结果：1）免疫荧光染色显示：Caspr4在神经前体细胞中表达；2）Caspr4能够抑制离体培养的神经前体细胞的增殖并能促进神经前体细胞向神经元分化；3）Caspr4通过其胞内段C4ICD促进离体培养的神经前体细胞向神经元分化；4）免疫荧光染色显示：在细胞系中，Caspr4和LNX2共定位于细胞膜上，并且Co-IP证实它们是有相互作用的；5）免疫荧光染色显示，LNX2在神经前体细胞中是表达的，并且与Caspr4共定位在细胞膜上；6）体外实验显示，LNX2同样能够抑制神经前体细胞增殖并能促进神经前体细胞向神经元分化；7）电转质粒LNX2sh使LNX2干扰后，C4ICD不能促进神经前体细胞向神经元分化；8）电转质粒Caspr4sh使Caspr4被干扰后，LNX2仍然可以促进神经前体细胞向神经元分化。结论：在神经发生的早期，Caspr4通过其下游LNX2抑制神经前体细胞增殖并促进神经前体细胞向神经元分化。
【作者】尹凤婷；
【导师】曹勇军；马全红；
【作者基本信息】苏州大学，神经病学，2014，硕士
【关键词】Caspr4；LNX2；神经前体细胞；神经分化；

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