线粒体ATP敏感性钾通道和NADPH氧化酶参与血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞自噬

【摘要】目的：探讨线粒体ATP敏感性钾通道和NADPH氧化酶在AngⅡ(ANGⅡ)诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）自噬中的作用。方法：以VSMCs为研究对象，设立组别分别为1.空白组；2.AngⅡ组；3.ARB（AngiotensinⅡtype1receptorblocker,AngⅡI型受体抑制剂）+AngⅡ组；4.Apocycin（NADPH抑制剂，香荚兰乙酮）+AngⅡ组；5.5-HD（线粒体ATP敏感性钾离子通道抑制剂）+AngⅡ组；6.3-MA(自噬抑制剂)+AngⅡ组；7.Rapamycin（自噬促进剂）+AngⅡ组；采用MTT方法检测细胞存活率，用westernblot方法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1、P62表达量的变化,用免疫荧光的方法检测自噬小体数目的变化；用DHE染色法测定ROS含量变化，通过转染敲除自噬基因ATG-5后，用westernblot方法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1、P62表达量的变化。结果：MTT结果显示，相比空白组，加入AngⅡ及其他药物作用72h时对细胞存活率影响不大,表明这些药物作用72h时对细胞的生存活力没有造成显著的影响。Westernblot结果显示加入AngⅡ促进VSMCs的LC3-Ⅱ、Beclin-1表达量增多和P62表达量降低，且呈现时间依赖性和浓度依赖性，同时ROS表达量增多，表明AngⅡ促进VSMCs自噬的发生。自噬抑制剂3-MA对AngⅡ（10-7mol/l，24h）引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表达量增多和P62表达量降低起到抑制作用，自噬促进剂Rrapamycin对AngⅡ（10-7mol/l，24h）引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表达量增多和P62表达量降低起到增强作用；敲除自噬基因ATG-5后，可消除AngⅡ所致的LC-3Ⅱ、Beclin-1表达量增多和P62表达量降低；进一步验证了AngⅡ能够诱导VSMCs自噬的发生。ARB对AngⅡ（10-7mol/l，24h）引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表达量增多和P62表达量降低起到抑制作用,表明自噬是由AngⅡ通过ATI受体引起的。Apocycin对AngⅡ（10-7mol/l，24h）引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表达量增多和P62表达量降低起抑制作用,表明AngⅡ通过NADPH氧化酶引起自噬。5-HD对AngⅡ（10-7mol/l，24h）引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表达量增多和P62表达量降低起到抑制作用,表明线粒体ATP敏感性钾通道介导AngⅡ引起的VSMCs的自噬。同时免疫荧光的结果也与westernblot结果一致。结论：AngⅡ可通过AT1受体介导引起胞内ROS增多，导致血管平滑肌细胞自噬，机制涉及线粒体ATP敏感性钾通道和NADPH氧化酶的参与。
【作者】于康英；
【导师】王国卿；张国兴；
【作者基本信息】苏州大学，生理学，2014，硕士
【关键词】AngⅡ；VSMCs；ROS；自噬；线粒体ATP敏感性钾通道；

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