Sonic hedgehog信号通路对胎盘滋养层11β-HSD2表达调控

【摘要】背景和目的：糖皮质激素(GCs)对促进胎儿器官的发育成熟有着重要作用,但孕期过度暴露于糖皮质激素,会导致胎儿生长发育迟缓以及成年后代谢性疾病的发生率增加。11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅱ型(11β-HSD2)是一种糖皮质激素代谢酶,能将有活性的皮质醇代谢为无活性的皮质酮,它主要在胎盘的合体滋养层细胞中表达,起着胎盘糖皮质激素屏障的作用。SonicHedgehog(Shh)信号通路对细胞定向分化具有重要作用,并且作为形态生成素参与了多脏器组织的发育,如在胚胎发育中的四肢和大脑的形成。有研究表明,过量糖皮质激素可导致新生胎鼠脑损伤,Shh信号通路通过11β-HSD2降低糖皮质激素引起的新生儿小脑损伤的风险,但Shh只能抑制11β-HSD2敏感的糖皮质激素(可的松、皮质醇、泼尼松)的活性,这提示我们Shh可能参与11β-HSD2活性调节,然而未见Shh调控11β-HSD2表达的报道。因此,本课题主要研究Shh信号通路对胎盘11β-HSD2表达的调控和分子机制,为胎儿生长受限以及胎源性成年疾病的发生提供新的理论依据。研究方法：取正常足月妊娠的胎盘组织,即排除孕妇患有妊娠期高血压、糖尿病、肥胖等,在胎盘娩出后1h内取材,通过percoll密度梯度法分离细胞滋养层细胞。通过荧光素酶报道基因检测Shh条件培养基的活性；用具有活性的Shh条件性培养基,重组蛋白粉末以及Shh信号通路的特异性抑制剂环巴胺,Smo受体激动剂Purmorphamine等处理从胎盘中分离出细胞滋养层细胞,通过荧光实时定量PCR和WesternBlotting等实验手段检测11β-HSD2的mRNA及蛋白表达水平。研究结果：1.Shh条件培养基活性：Gli-荧光素酶报道基因结果显示,Shh条件性培养基的活性与对照培养基相比明显增高；用条件性培养基处理细胞滋养层细胞,Glil的蛋白表达水平升高。2.Shh信号通路途径对11β-HSD2表达的作用：Shh促进11β-HSD2mRNA和蛋白水平的表达,环巴胺可有效抑制Shh信号途径对11β-HSD2的促进作用。Smo受体激动剂的浓度为10μM时,11β-HSD2的mRNA水平和蛋白水平均显著增加。通过Gli-shRNA敲降细胞滋养层细胞中的Gli基因,再用Shh条件培养基处理,与对照组相比,Gli-shRNA作用后,11β-HSD2的表达下降。结论：实验结果表明,制备的Shh条件性培养基具有活性；Shh和膜受体蛋白Smo促进胎盘11β-HSD2的mRNA及蛋白水平的表达；转录因子Glil、Gli2和Gli3对11P-HSD2具有正向调控作用。
【作者】熊文依；
【导师】邹朝春；
【作者基本信息】浙江大学，儿科学，2014，硕士
【关键词】糖皮质激素；11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅱ型；Shh信号通路；胎盘滋养层细胞；

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