CTV p20和p23基因原核表达及不同分离株中p25蛋白与病毒含量分析

【摘要】柑橘衰退病毒(Citrustristezavirus,CTV)引起的柑橘衰退病是一种具有经济重要性的病害,广泛分布于世界各柑桔产区,对全世界的柑桔产业造成了严重的威胁。CTV是长线形病毒属(Closterovirus)正义单链RNA(+ssRNA)病毒,具有12个开放读码框(ORF),可以编码19种以上的蛋白质产物。CTV经橘蚜以非循回半持久方式传播。本研究构建基因p20和p23的原核表达载体,并诱导表达蛋白p20和p23。应用大外壳蛋白p25的多克隆抗体,使用ELISA方法分析不同蚜虫传毒率CTV分离株中蛋白含量,并应用实时荧光定量分析不同毒源中病毒粒子相对含量,利用薄膜饲喂法使蚜虫获得重组蛋白p20、p25和p27并在毒源植株上获毒,分析蚜虫获毒量及传毒率的差异。本研究为CTV的流行病学、蚜传机制、蚜虫-CTV-寄主相互作用的研究提供了基础。主要研究结果如下：1.根据pET28a和pET22b多克隆位点及p20和p23核苷酸序列设计引物,进行基因克隆并测序,测序准确的单克隆经酶切连接后转化到BL21(DE3),诱导表达p20和p23融合蛋白。2.应用p25多克隆抗体,使用ELISA方法分析不同蚜虫传毒率CTV分离株中蛋白含量,以毒源CT11A、CT14A、CT16-2、CT77和CT立间的叶片为样品,阴阳结果OD405的比值分别为2.7246、1.6607、1.1093、0.8508、0.8366,表明p25蛋白含量在毒源CT11A、CT14A、CT16-2、CT77和CT立间中依次递减。3.应用相对RT-qPCR分析不同毒源中病毒粒子含量,结果表明CTV不同分离株系CT11A、CT14A和CT16-2的病毒粒子含量依次递减,但毒源中病毒粒子含量与蚜虫传毒能力高低不完全一致,这表明病毒浓度是影响传毒率的因素之一,可能其它因素也影响CTV的蚜虫传播。4.在褐色橘蚜人工饲料中添加原核表达的重组蛋白p25、p27和p20,蚜虫再获毒CT11A、CT16-2和CT立间,应用RT-qPCR分析获毒后蚜虫中的病毒量,与对照相比,除p27使蚜虫获毒CT11A的病毒数量升高外,所有的蚜虫带毒量均有所降低。5.褐色橘蚜人工饲料中添加原核表达的重组蛋白p25和p27,测得5头蚜虫对CT立间的传毒率分别为31.03%和35.71%,只取食人工饲料的蚜虫对CT立间的传毒率为40%。
【作者】田晓；
【导师】刘金香；
【作者基本信息】西南大学，微生物学，2014，硕士
【关键词】柑橘衰退病毒；基因原核表达；p25蛋白含量；病毒数量；

【参考文献】
[1]王文成.三阴性乳腺癌临床特征的研究[D].大连医科大学,外科学,2012,硕士.
[2]李峰.表面活性剂对柠檬酸杆菌SA01和节杆菌SA02降解菲微界面行为的影响[D].浙江大学,环境科学,2014,博士.
[3]申旋成.闸后消力池斜坡连接段渗流和水跃共同作用的分析和对策[D].华南理工大学,水力学及河流动力学,2014,硕士.
[4]苗雪莲.高校学生社团育人功能研究[D].东北石油大学,思想政治教育,2013,硕士.
[5]赵宁.磁气混合轴承中弹性箔片径向动压气体轴承的数值分析研究[D].南京航空航天大学,机械设计与理论,2004,硕士.
[6]马艳娟.7-9年级语文朗读教学有效实现情感教育的探索[D].河北师范大学,学科教学,2014,硕士.
[7]邓自立,刘玉梅.稳态Kalman滤波的一种统一格式[J].控制与决策,1999,01:26-30.
[8]丁宏.结构截断和流场截断对圆柱壳结构振动声辐射的影响分析[D].华中科技大学,船舶与海洋结构物设计制造,2013,硕士.
[9]苏垠平.部分地区X射线诊断照射频度调查及CT所致癌症风险的研究[D].中国疾病预防控制中心,劳动卫生与环境卫生学,2014,博士.
[10]陈源.X线透视辅助徒手法与CT三维图像导航引导胸椎椎弓根螺钉置入的临床对比研究[D].广西医科大学,脊柱骨病外科（专业学位）,2013,硕士.
[11]李玉俊.社会管理创新视角下的流动人口生育服务管理研究[D].云南大学,公共管理,2012,硕士.
[12]许聪慧.基于智能移动平台的汉字教育游戏软件设计[D].广东外语外贸大学,汉语国际教育,2013,硕士.
[13]BEKTENOVAAIDA（灵珊）.汉语与吉尔吉斯语中禁忌习俗与委婉语比较研究[D].西北大学,汉语国际教育（专业学位）,2014,硕士.
[14]汪军.PDE10A抑制剂的合成方法优化[D].华东理工大学,制药工程,2013,硕士.
[15]贾朝均.丁苯酞对脑小血管病患者认知功能及血流灌注影响的临床研究[D].川北医学院,内科学,2013,硕士.
[16]张奇志.我国艺术品份额化交易机制研究[D].广东外语外贸大学,国际商务,2013,硕士.
[17]王娟,石艳丽,姚立峰,王霞.地震勘探数据存储技术研究与应用[J].石油地球物理勘探,2008,S1:163-167+193+196+13.
[18]王艳霞.我国普通高中现行教育模式转换研究[D].西南大学,教育学原理,2013,硕士.
[19]成福云.关中灌区干旱指标体系的建立与抗旱措施研究[D].西安理工大学,水利工程,2003,硕士.
[20]刘奇.大型汽轮发电机定子损耗及流固耦合场分析[D].哈尔滨理工大学,电机与电器,2012,硕士.
[21]颜艳.政务微博的公信力问题探析[D].南京大学,新闻与传播（专业学位）,2013,硕士.
[22]邵峰.类钙钛矿铌酸盐插层化合物的制备及催化性能研究[D].中国矿业大学,化学工程与技术,2014,硕士.
[23]唐玉姣.工程造价管理信息系统CCMIS的开发[J].中小企业科技,2004,10:29-32.
[24]胡肖.川西平原堰渠体系与城乡空间格局研究[D].西南交通大学,城市规划与设计,2014,硕士.
[25]黄星.基于CIPP模型的广西高等医学院校订单式全科医学人才培养模式评价研究[D].广西医科大学,流行病与卫生统计学,2014,博士.
[26]杨晓霞.多晶型Ga_xFe_(2-x)O_3的化学法制备及性能研究[D].燕山大学,材料学,2013,硕士.
[27]蒋朝霞.《人权本土化》翻译报告[D].四川外国语大学,翻译（专业学位）,2013,硕士.
[28]白嘎力.少数民族骨干基础培训阶段问题研究[D].西北大学,高等教育学,2013,硕士.
[29]毕玉英,杨宝俊.二维粘弹介质中完全波场正演模拟[J].石油地球物理勘探,1995,03:351-362+442.
[30]唐友发.肿瘤细胞表达GRP78的研究[D].华中科技大学,免疫学,2013,硕士.
[31]李雅卓.基于伏安型两电极体系的新型检测仪器研究[D].浙江大学,2013.
[32]严雪.基于气候变化的畜牧业发展影响因素分析[D].南京农业大学,产业经济学,2012,硕士.
[33]刘晓敏.5种植物侧根分支处抗拉力学特性的研究[D].内蒙古农业大学,水土保持与荒漠化防治,2013,硕士.
[34]陈晶.银杏叶，银杏叶提取物及其注射液中化学成分及酚酸含量的研究[D].北京中医药大学,中药化学,2013,硕士.
[35]刘丹羽.基于Hedonic模型的地铁对于住宅价格的影响研究[D].云南财经大学,土地资源管理,2014,硕士.
[36]张粒子,周娜,王楠.大规模风电接入电力系统调度模式的经济性比较[J].电力系统自动化,2011,22:105-110.
[37]范杰.北山金窝子金矿和公婆泉铜矿地球化学异常特征[D].中国地质大学（北京）,地质工程,2013,硕士.
[38]田挺.移动信息化产品的客户需求分析系统设计与优化[D].兰州大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[39]贾虎森,许亦农.生物柴油利用概况及其在中国的发展思路[J].植物生态学报,2006,02:221-230.
[40]盘娟梅.我国高等教育助学贷款研究[D].湖南师范大学,教育经济与管理,2004,硕士.
[41]王文静,惠晓龙,马纪军.高速列车设备舱支架疲劳裂纹机理研究[J].机械工程学报,2015,06:142-147.
[42]孙彦韬.济宁市水资源管理现状分析与对策研究[D].山东大学,公共管理（专业学位）,2013,硕士.
[43]郭蓉.上市公司财务困境预测模型的研究与应用[D].南京航空航天大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[44]张成臣.斜拱支承环形楼板人致振动舒适度研究[D].哈尔滨工业大学,结构工程,2013,硕士.
[45]田寅,董宏辉,贾利民,王蕾云,李思宇.用于车辆分类的多传感器车型特征融合算法[J].华南理工大学学报(自然科学版),2014,03:52-58.
[46]陈佳骊.城市公益性用地问题初探[D].浙江大学,土地资源管理,2004,硕士.
[47]范笑颖.地面综合测试设备[D].河北大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[48]张慧霞.生态女性主义的哲学思考[D].中国矿业大学,科学技术哲学,2014,硕士.
[49]粟勇.氨基酸（ABS，Lys，Gly）组装蒙脱石—水滑石复合插层材料的制备、结构表征及结构模拟[D].北京化工大学,化学工程与技术,2013,硕士.
[50]黄玲.化工工程公司EPC项目管理模式研究[D].西南交通大学,工业工程（专业学位）,2013,硕士.