辅助性T细胞17(Th17)在结直肠癌发生发展中的作用及机制初探

辅助性T细胞17(Th17)在结直肠癌发生发展中的作用及机制初探

作者:师大云端图书馆 时间:2015-12-17 分类:期刊论文 喜欢:4147
师大云端图书馆

【摘要】近年来,我国结直肠癌(colorectalcancer,CRC)的发病率和死亡率持续上升,尽管以手术+化疗为主的综合治疗措施大大改善了结直肠癌的治疗效果,但由于大多数结直肠癌患者确诊时已属于中晚期,预后效果欠佳。因此,找寻与结直肠癌发生发展密切相关的危险因素并进行早期干预,可望降低结直肠癌的发病率,并达到早期诊断及个体化治疗的目的。关于肿瘤的发生与发展,近年来,有学者提出了“组织结构场学说”,该学说强调,组织微结构和细胞微环境的改变,导致了细胞与细胞、细胞与间质信号交流的异常,成为了细胞失控性增殖的原因。作为“组织结构场”的重要组成,炎症免疫微环境中抗瘤免疫和促瘤免疫反应之间的平衡决定了肿瘤发生发展的方向,现代研究表明,肿瘤的起始、促进和进展三个阶段均与免疫系统的发育或功能状态密切相关。辅助性T细胞17(Th17)是近年来新定义的一类CD4+细胞亚群,其主要分泌的细胞因子为IL-17A(即IL-17)。作为肿瘤炎症免疫微环境的重要组成部分,Th17细胞在肿瘤发生发展中作用的研究是目前的热点;在不同的免疫背景及不同肿瘤类型中,Th17所起的抑瘤或促瘤作用不尽相同。上皮间质转化(Epithelial-mesenchymaltransition,EMT)是结直肠癌发生及进展过程中的关键步骤,研究发现,炎症免疫微环境与肿瘤EMT行为之间关系十分密切。而关于Th17细胞与肿瘤EMT行为间关系的研究,目前国内外尚处于空白。本研究通过检测Th17细胞及其主要细胞因子IL-17在结直肠癌发生发展过程中的动态变化趋势,分析Th17细胞在结直肠癌患者术后生存情况的预后价值,探讨Th17细胞在结直肠癌发生发展中的作用;并通过构建IL-17过表达的肠癌细胞,从细胞和分子学角度,初步探究Thl7细胞促瘤作用的与肠癌EMT行为的潜在联系,并为下一步的体外实验打下基础。第一部分辅助性T细胞(Th17)在结直肠癌发展过程中的变化趋势目的:阐明Th17细胞在各阶段结直肠肿瘤中的动态变化趋势。方法:分别采集20例经结肠镜检查确认无结直肠新生物的健康对照人群以及20例经病理确诊的结直肠患者的外周血,通过酶联免疫吸附法(ELISA)和流式细胞技术测定两组人群外周血中Th17细胞在CD4+细胞中所占比例及其主要细胞因子IL-17在外周血中的浓度。将分别经病理学确认的正常上皮、腺瘤组织、早期癌组织、进展期癌组织各20例进行免疫组织化学染色,测定其组织中浸润的Th17细胞密度。结果:在结直肠癌患者外周血中,Th17细胞在CD4+细胞中所占比例及其主要细胞因子IL-17浓度明显升高(p<0.05);在“正常上皮-腺瘤-早期癌-进展期癌“这一经典的结直肠癌发展进程中,组织中浸润的Th17细胞数量动态上升,癌组织中的Th17细胞密度显著性高于正常上皮组织及腺瘤组织,且进展期癌组织中Th17细胞密度显著性高于早期癌组织(p<0.05)。结论:Th17细胞及其主要细胞因子IL-17与结直肠癌的发生发展密切相关。第二部分辅助性T细胞17(Th17)与结直肠癌预后的相关性研究目的:探讨组织中浸润的Th17细胞密度与结直肠癌患者的临床病理特征之间的关系及患者术后生存预后的价值。方法:通过制作组织芯片和免疫组化检测90例从2007年5月至2008年4月在复旦大学附属中山医院普外科行肠癌根治切除术患者肠癌组织中浸润的Th17细胞密度,根据细胞个数分为高Th17细胞密度组和低Th17细胞密度组,分析Th17细胞密度与结直肠癌患者的临床病理特征及预后的关系。结果:在发生脉管侵犯的病例中,组织中浸润的Th17细胞明显增多(p=0.031)。生存曲线分析显示,Th17high组术后总生存率明显低于Th17low组术后总生存率(P=0.001)。高TNM分期(p=0.009)、肿瘤低分化(p=0.036)组织中高Th17细胞密度(p=0.017)均是影响患者术后生存的独立预后因素。结论:癌组织中Th17细胞密度是影响患者术后生存的独立预后因素,Th17细胞在结直肠癌中起促瘤作用。第三部分辅助性T细胞17(Th17)在结直肠癌发生发展中作用机制的初步探究目的:构建IL-17过表达稳定转染肠癌细胞,进一步验证IL-17(Th17细胞主要细胞因子)对肠癌发生发展的作用及初步探讨其作用机制。方法:通过慢病毒感染的方法,构建IL-17过表达稳定转染肠癌细胞;通过流式凋亡检测、CCK8细胞增殖实验和Transwell细胞侵袭试验,检测IL-17过表达肠癌细胞的抗凋亡、增殖和侵袭能力的变化;通过生存分析,探讨肠癌组织中E-cad表达水平与结直肠癌患者术后预后及组织中Th17细胞密度之间的关系,探讨Th17细胞与肠癌EMT之间的潜在关系;进一步利用RT-PCR技术,验证IL-17过表达细胞中,与EMT相关标志物的表达水平变化。结果:经过慢病毒感染,获得了IL-17过表达稳定转染SW480肠癌细胞;流式凋亡检测、CCK8细胞增殖试验和Transwell细胞侵袭试验结果显示,过表达的IL-17可明显促进人结肠癌SW480细胞增殖和侵袭能力,并抑制细胞凋亡;生存分析发现,肠癌组织中E-cad表达水平与患者术后总生存率明显正相关(p=0.006),且肠癌组织中E-cad表达水平是影响患者术后生存的独立预后因素(p=0.033);相关性分析显示,癌组织中Thl7细胞密度与肿瘤细胞E-cad表达水平呈明显负相关(r=-0.267,p=0.011),提示Th17细胞与结直肠癌EMT过程密切相关。通过RT-PCR检测,进一步验证了IL-17过表达SW480细胞中EMT相关标志物的表达水平变化,E-cadherin表达明显下调,而Snail、β-catenin和Vimentin这3个间皮化标志的表达明显上调(p<0.05):与对照组细胞相比,IL-17过表达对N-cadherin和Twist的表达无明显影响(p>0.05)结论:Th17细胞的主要细胞因子IL-17在结直肠癌的发生发展中起到了促瘤作用,其促瘤作用可能通过促进肠癌细胞的EMT行为而实现。
【作者】何梦江;
【导师】姚礼庆;
【作者基本信息】复旦大学,临床医学(专业学位),2013,博士
【关键词】辅助性T细胞17;结直肠癌;上皮间质转化;肿瘤免疫;

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