细胞构架蛋白RACK1调控胃癌侵袭转移的机制研究

【摘要】第一部分RACK1在胃癌组织中的表达和临床意义研究目的：胃癌是严重危害人类生命健康的一类恶性肿瘤,目前仍是全球范围内癌症相关的第二大死因。胃癌的侵袭和转移始终是影响胃癌疗效进一步改善的重要因素。蛋白激酶1活化受体(RACK1)是一个参与诸多细胞内信号传导通路的构架蛋白,在多种肿瘤中的表达和意义已有报道。本研究旨在探讨RACK1在胃癌中的表达和和临床意义。研究方法：收集在复旦大学附属中山医院普外科接受手术治疗的胃癌患者癌和癌旁正常组织,及其临床病理资料。其中,84例(2000年2月17日至2005年12月9日)用于构建组织芯片,采用免疫组织化学法检测RACK1蛋白的表达情况；15例(2011年3月21日至4月8日)采用免疫印迹法检测RACK1蛋白的表达情况。将RACK1蛋白的表达情况与患者的临床病理资料进行相关性分析,采用Kaplan-Meier法分析5年生存率,Cox回归进行多因素分析。研究结果：免疫印迹法检测表明,RACK1在胃癌组织和癌旁正常组织中均有表达,而且癌组织中的表达低于癌旁正常组织。免疫组织化学检测表明,RACK1在胃癌组织中51例(60.7%)为低表达,33例(39.3%)为高表达。RACK1在胃癌组织中的低表达与Lauren’s分型(弥漫型)、分化程度(低分化)、肿瘤浸润深度(T3-T4)、淋巴结转移(N1-N3)和TNM分期(Ⅲ～Ⅳ)具有统计学相关性(P<0.05)。RACK1高表达组的5年生存率明显优于低表达组(P=0.022)；对于T2-T4患者而言,RACK1高表达组的5年生存率同样明显优于低表达组(P=0.014)。多因素分析表明,淋巴结转移和远隔转移是胃癌患者术后生存的独立影响因素,而RACK1的表达水平不是独立影响因素。研究结论：RACK1在胃癌组织中表达降低,并与不良预后因素和不佳的5年生存期相关,提示RACK1可能参与了对胃癌发生发展的调控。第二部分RACK1通过抑制IL-8自分泌调节胃癌细胞的侵袭研究目的：肿瘤微环境对于肿瘤发生发展具有重要影响。趋化因子白细胞介素8(IL-8)是肿瘤微环境中的一个重要调节因子,肿瘤细胞可以产生IL-8,以自分泌或旁分泌方式促进其增殖、血管新生,甚至侵袭和转移。本研究旨在探讨细胞构架蛋白RACK1对胃癌细胞IL-8表达的调控和对侵袭性的影响。研究方法：选取人胃癌HGC-27和MGC80-3细胞系,应用RNA干扰技术(shRNA)建立RACK1基因沉默细胞株,并收集不同细胞的条件培养基。通过实时定量PCR和蛋白印迹法检测特定分子转录水平和蛋白水平的变化。通过酶联免疫吸附试验检测细胞上清IL-8的水平。通过细胞迁移实验(细胞划痕实验)和细胞侵袭实验(Transwell实验)观察细胞迁移和侵袭能力的改变。通过细胞因子抗体芯片检测细胞上清细胞因子的变化。通过抗体中和试验检测特定分子对细胞侵袭能力的影响。通过特异性抑制剂检测特定信号通路对IL-8产生的影响。通过非参数Spearman’sp检验分析胃癌组织中RACK1和IL-8表达的相关性。研究结果：(1)RACK1基因沉默后,胃癌细胞的迁移和侵袭能力均有显著增强。来自RACK1基因沉默细胞的条件培养基可以显著增强父代细胞的迁移和侵袭能力；(2)在细胞上清中,RACK1基因沉默细胞的IL-8表达显著升高。IL-8中和抗体显著抑制细胞的侵袭能力。提示胃癌细胞的RACK1下调后,通过上调IL-8增强侵袭能力；(3)NF-κB和c-Src特异性抑制剂(PDTC和PP2)可以显著抑制IL-8的分泌。细胞过表达Src-显性负突变体或经PP2处理后,IκBa的表达水平上调,核蛋白中NF-κB的P65亚基则显著下调。提示Src/NF-κB信号通路可能参与RACK1对IL-8的表达调控；(4)IL-8受体CXCR1在MGC80-3细胞中高表达,CXCR2在HGC-27细胞中高表达。CXCR2中和抗体可抑制细胞的侵袭能力,提示IL-8/CXCR2轴可能参与调控胃癌的侵袭；(5)胃癌组织中RACK1和IL-8的表达呈负相关性(r=-0.514,P=0.000)；(6)某些NF-κB抑制剂可快速诱导细胞凋亡和S期阻滞,具有较强的抗肿瘤作用。研究结论：RACK1通过抑制Src/NF-KB信号通路,从而抑制IL-8的自分泌,对胃癌细胞的侵袭和转移起到负调节作用。
【作者】陈凌；
【导师】秦新裕；
【作者基本信息】复旦大学，外科学，2013，博士
【关键词】RACK1；胃癌；预后；免疫组织化学法；免疫印迹法；NF-κB；Src；IL-8；

【参考文献】
[1]臧传真,范玉顺.无线传感器网络中信息获取关键问题的研究[J].传感器技术,2005,09:23-25+29.
[2]孔刚锐.HP／LP-PRRSV二重FQ-PCR诊断方法的建立及其Nsp2和ORF5基因变异分析[D].河南科技大学,兽医（专业学位）,2013,硕士.
[3]梁晨.桥式起重机运行机构模糊可靠性分析[D].太原科技大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[4]俞志群.卫星钟预报关键技术[D].西安电子科技大学,测试计量技术及仪器,2012,硕士.
[5]范磊.中医药综合干预防治高血压病疗效评价研究[D].辽宁中医药大学,中西医结合临床（专业学位）,2012,硕士.
[6]俞梦秋.基于财务报告的上汽集团价值投资分析[D].上海交通大学,工商管理,2013,硕士.
[7]郑辉.企业外包模式演进探讨[D].浙江工业大学,2009.
[8]金素素.生物质炭施用对土壤CO_2释放和碳截留影响的研究[D].陕西科技大学,环境工程,2013,硕士.
[9]王耀平.浅谈饲料添加剂的发展[J].饲料工业.2004(12)
[10]彭霞.基于路面管理系统的高速公路沥青路面养护策略研究[D].华南理工大学,道路与铁道工程,2014,硕士.
[11]徐盟书.家蚕SINE转座子的全基因组鉴定及进化分析[D].西南大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[12]孙美琳.近30年中国电视广告中女性形象的建构[D].中央美术学院,美术学,2013,硕士.
[13]蔡妮娜.路易斯·厄得里克小说中的讲故事手法[D].东北大学,英语语言文学,2010,硕士.
[14]张玉娟,宋朝霞,刘伟,雷敏,刘贵昌.四氧化三钴/氧化石墨烯的合成及电容性能[J].电源技术,2014,10:1875-1878.
[15]王蕾.基于交易成本视角的农户农机投资影响因素研究[D].西南大学,农业经济管理,2014,硕士.
[16]赵瑾.斯图亚特·霍尔“编码与解码”理论的研究[D].广西师范大学,文艺学,2014,硕士.
[17]梁晔,刘宏哲,于剑.BoF扩展模型研究[J].计算机科学,2014,08:281-285.
[18]蔺婕.糖尿病海马神经元损伤及TRPC3通道表达水平的研究[D].第四军医大学,营养与食品卫生学,2014,硕士.
[19]尹治清.明胶海绵颗粒在TACE治疗巨块型肝癌中的应用价值[D].吉林大学,临床医学,2014,硕士.
[20]蒙在桥.在线社交网络的动态消息传播模型研究与应用[D].广东工业大学,计算机软件与理论,2014,硕士.
[21]殷文金.新型碳纳米体系及物性[D].湘潭大学,2013.
[22]彭圣明.中位—四（邻烷氧基苯基）卟啉及其金属配合物的合成、表征、荧光和液晶性能研究[D].湘潭大学,有机化学,2003,硕士.
[23]郝建文.陕西省府谷县非法采煤催生因素研究[D].中国地质大学（北京）,公共管理,2014,硕士.
[24]秦建红.基于HRRP时频域稀疏表示的SAR目标识别研究[D].重庆大学,信号与信息处理,2014,硕士.
[25]黄健.非成像光学系统设计方法及其在LED道路照明工程中的应用[D].浙江大学,2008.
[26]汪炳柱.用样条函数法求重力异常二阶垂向导数和向上延拓计算[J].石油地球物理勘探,1996,03:415-422+466.
[27]郭丽娜.遗嘱信托法律效力研究[D].北方工业大学,民商法学,2014,硕士.
[28]赵玲.几种瘿蜂体内Wolbachia的PCR检测及其wsp和ftsZ基因分析[D].中南林业科技大学,动物学,2013,硕士.
[29]严义超.基于迭代光谱混合分析的高光谱图像解混技术研究[D].华中科技大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[30]于青艳.未成年人犯罪记录封存问题研究[D].苏州大学,法律（专业学位）,2014,硕士.
[31]田源,徐寿波,宋伯慧,黄少松.物流与经济发展关系研究[J].北京交通大学学报(社会科学版),2008,02:21-26.
[32]聂鹏,陈希卉.聚酰亚胺/氧化石墨烯纳米复合薄膜的制备与性能研究[J].科技风,2014,12:13.
[33]林仁钦.一期后路病灶清除、植骨融合内固定治疗多节段胸腰椎结核[D].福建医科大学,外科学,2014,硕士.
[34]玉海燕.习仲勋对中国特色社会主义理论初创时期的实践探索[D].兰州商学院,马克思主义基本原理,2013,硕士.
[35]许建荣.水陆连片地区高精度重力测量技术探讨[J].石油地球物理勘探,1998,S2:136-139+169-170.
[36]田宪伟.冷轧酸洗-轧机联合机组带钢跟踪系统分析[J].冶金自动化,1998,03:11-15.
[37]文松松.基于SIP协议的语音对讲系统的设计与实现[D].西南交通大学,计算机技术,2013,硕士.
[38]胡家声,郭创新,叶彬,段惠明,曹一家.离散粒子群优化算法在输电网络扩展规划中的应用[J].电力系统自动化,2004,20:31-36.
[39]张漫.农田谷物产量空间分布信息采集、处理与系统集成技术研究[D].中国农业大学,2003.
[40]姜艳萍,樊治平.二元语义信息集结算子的性质分析[J].控制与决策,2003,06:754-757.
[41]刘妍.基于席夫碱的阻燃剂合成及其在EVA中的应用[D].浙江大学,高分子材料,2013,博士.
[42]邱华.水力机械状态检修关键技术研究[D].清华大学,流体机械及工程,2002,硕士.
[43]吴保玉.离婚案件中婚前按揭房产归属问题研究[D].长春工业大学,民商法学,2013,硕士.
[44]覃桃.壮泰熟语比较研究[D].广西民族大学,中国少数民族语言文学,2013,硕士.
[45]邓莎莎.Gh3β-HSD基因在棉花纤维发育中的功能[D].西南大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[46]付耕野.微机调速顶系统及其最新产品[J].中国铁路.1993(09)
[47]苏君鸿.嗜酸乳杆菌对健康及口蹄疫疫苗接种小鼠的免疫调节作用[D].中国农业科学院,预防兽医学,2014,博士.
[48]许广琦.公务员辞退制度存在的问题及对策研究[D].福建师范大学,行政管理,2013,硕士.
[49]施鹏.基于认知无线电的协作感知技术研究[D].扬州大学,信号与信息处理,2012,硕士.
[50]马丽.家庭环境、教养方式与单亲家庭高中生心理健康的关系研究[D].山东师范大学,教育（专业学位）,2013,硕士.