MMP-2、9和TIMP-1、2在食管鳞状细胞癌中的表达及其与HPV16E6、E7和E6/E7之间相互关系的研究

【摘要】目的：探讨MMP-2、9和TIMP-1、2mRNA在食管鳞状细胞癌及对应癌旁组织中的表达差异及其相关性,探讨MMP-2、9和TIMP-1、2mRNA在食管鳞状细胞癌中的表达是否存在名族差异,探讨HPV16E6、E7及E6/E7与MMP-2、9和TIMP-1、2mRNA表达之间是否存在调控关系以及HDAC是否参与了MMP-2、9和TIMP-1、2mRNA的表达调控。方法：选取新鲜手术切除的食管癌标本100例,每例分别取癌组织和对应的癌旁组织各一份,分为癌组织组和癌旁组织组,采用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测MMP-2、9和TIMP-1、2mRNA在癌组织组及其对应癌旁组织组中的表达：随机选取部分标本行Western-blot检测,验证这4种基因在蛋白水平的表达是否与转录水平一致；构建HPV16E6真核表达载体、HPV16E7真核表达载体及HPV16E6/E7融合基因真核表达载体,运用瞬时转染技术将上述三种真核表达载体分别转染到HPV16阴性的食管癌细胞株KYSE450中,然后通过RT-PCR法分别检测转染后食管癌细胞株KYSE450中MMP-2mRNA、MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA及TIMP-2mRNA的表达情况；通过向KYSE450细胞培养基中加入HDAC抑制剂TSA,然后通过RT-PCR法分别检测加TSA后食管癌细胞株KYSE450中MMP-2mRNA、MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA及TIMP-2mRNA的表达情况。结果：MMP-2、9mRNA和TIMP-1、2mRNA在食管癌组织中的表达高于相应正常组织中的表达；MMP-2、9mRNA和TIMP-1、2mRNA在汉族食管癌组织中的表达高于其在哈族食管癌组织中的表达；MMP-2、9mRNA和TIMP-1、2mRNA在浸润深度为T3+T4的癌组织中的表达高于其在浸润深度为T1+T2的癌组织中的表达；MMP-2、9mRNA和TIMP-1、2mRNA在有无淋巴结转移的癌组织中的表达差别无统计学意义；MMP-2、9mRNA和TIMP-1、2mRNA在不同性别、不同年龄、不同分化程度之间的表达差别均无统计学意义；MMP-2mRNA与MMP-9mRNA之间呈正相关,而与与TIMP-1mRNA和TIMP-2mRNA之间均无相关性：MMP-9mRNA与TIMP-1mRNA和TIMP-2mRNA之间均呈正相关；TIMP-1mRNA口TIMP-2mRNA之间呈正相关；MMP-2mRNA在各pEGFP-N1转染组中的表达均极低,且无统计学差异,MMP-9mRNA在空白对照组和pEGFP-N1转染组中均有表达,且表达量相对较高,但在pEGFP-N1-E6转染组、pEGFP-N1-E7转染组及pEGFP-N1-E6/E7转染组中表达均极低,E6组、E7组及E6/E7组与阴性对照组之间均存在差异；TIMP-1mRNA在pEGFP-N1-E6转染组中表达与阴性对照组之间无差异,在pEGFP-N1-E7转染组中的表达显著降低,与阴性对照组之间差异有差异；在pEGFP-N1-E6/E7转染组中的表达也增高,与阴性对照组之间有差异；TIMP-2mRNA在pEGFP-N1-E6转染组中表达增高,与阴性对照组之间有差异；在pEGFP-N1-E7转染组中的表达降低,与阴性对照组之间无差异；在pEGFP-N1-E6/E7转染组中的表达增高,与阴性对照组之间有差异。MMP-2mRNA在TSA实验组中的平均表达量与对照组相比无差异,MMP-9mRNA在TSA实验组中的平均表达量与对照组相比无差异,TIMP-1mRNA在TSA实验组中的平均表达量与对照组相比无差异,TIMP-2mRNA在TSA实验组中的平均表达量与对照组相比有差别,差异有统计学意义。结论：MMP-2、9和TIMP-1、2在食管癌组织中的表达高于相应正常组织中的表达,说明它们可能参与了食管鳞状细胞癌的发生及进展；MMP-2、9和TIMP-1、2的表达可能与食管鳞状细胞癌浸润有关,但可能与淋巴结转移无关,与患者年龄、性别及肿瘤分化程度均无关；MMP-2、9和TIMP-1、2在食管鳞状细胞癌中的表达可能存在名族差异；MMP-2mRNA与MMP-9mRNA在食管癌中的表达呈正相关关系,MMP-2mRNA与TIMP-1mRNA和TIMP-2mRNA在食管癌中的表达之间均无相关性；MMP-9mRNA与TIMP-1mRNA和TIMP-2mRNA在食管癌中的表达之间均呈正相关；TIMP-1mRNA口TIMP-2mRNA在食管癌中的表达呈正相关关系：本研究成功构建了HVP16-E6、HPV16-E7基因及HPV16-E6/E7融合基因的真核表达载体,并成功转染了食管癌KYSE450细胞；HPV16E6和HPV16E7基因与MMP-2的表达可能不存在调控关系,可能对MMP-9的表达起抑制作用；HPV16E6/E7的协同作用可能对TIMP-1和TIMP-2的表达起促进作用；HDAC可能与TIMP-2的表达之间存在调控关系；与MMP-2、MMP-9及TIMP-1的表达之间可能不存在调控关系。
【作者】孙晓宏；
【导师】庞作良；
【作者基本信息】新疆医科大学，外科学（专业学位），2013，博士
【关键词】食管鳞状细胞癌；基质金属蛋白酶；基质金属蛋白酶组织抑制剂；人乳头状病毒16；组蛋白去乙酰化酶；

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