新疆鼠尾草抗血栓作用物质基础及其作用机制研究

【摘要】唯独生长在新疆的多年生草本植物—新疆鼠尾草(SalviadesertaSchang)与我国传统活血化瘀中药丹参(SalviamiltiorrhizaBge.)同属于唇形科(Labiatae)鼠尾草属(Salvia)植物,具有清热解毒、止咳祛痰、消肿利尿的作用。本课题组前期基础研究发现其中的脂溶性成分6,7-去氢罗列酮具有保护心肌缺血和抗血小板聚集的作用,而对其抗血栓作用物质基础及其作用机制的研究还是一个空白,为进一步开发新疆鼠尾草这一特有资源,本文对其进行了抗血栓作用部位筛选、物质基础的研究及其抗血栓作用机制探讨。目的：1)筛选新疆鼠尾草(Salviadesertaschang)(SDS)抗血栓作用部位；2)分析新疆鼠尾草抗血栓作用部位的物质基础；3)建立新疆鼠尾草药材和有效部位质量控制的方法;4)探讨新疆鼠尾草抗血栓作用机制。方法：1)采用比浊法测定新疆鼠尾草根、茎、叶、花四个部位不同极性提取物体外抗ADP诱导的血小板聚集作用,以血小板最大聚集率为指标筛选最佳抗血小板聚集部位；采用FeCl3诱导大鼠颈总动脉血栓形成模型,比较新疆鼠尾草根不同极性溶剂提取物抗血栓形成作用,以不同组血栓形态学改变、血栓重量、血栓形成抑制率、放射免疫法检测大鼠血浆中TXB2、6-Keto-PGF1α和ET水平为指标观察不同极性提取物抗血栓作用；2)采用系统溶剂提取、硅胶分离色谱技术对抗血栓作用部位进行分离纯化,根据化学反应和光谱分析技术(MS、1-NMR、13C-NMR和二维核磁共振等)进行化合物结构鉴定；3)通过方法学考察建立药材及其有效部位的质量控制方法；4)采用FeCl3诱导大鼠颈总动脉血栓形成模型,比较有效部位低、中、高剂量组血栓形态学的改变情况、血栓重量、血栓形成抑制率、放射免疫法检测大鼠血浆中TXB2、6-Keto-PGF1α和ET的含量、双抗体夹心ABC-ELISA法测定大鼠血浆中AT-Ⅲ、PC、PLG、PAI-1、vWF和t-PA的水平,探讨新疆鼠尾草有效部位抗血栓作用的机制。结果：1)新疆鼠尾草根部乙酸乙酯提取部位表现出明显抑制ADP诱导的大白兔血小板聚集作用(P<0.01)；新疆鼠尾草根乙酸乙酯提取物组血栓形成最少(P<0.01)；明显降低血浆中TXB2水平(P<0.05)和升高6-keto-PGF1α水平(P<0.05),TXB2/6-keto-PGF1α比值也明显降低(P<0.05)；2)新疆鼠尾草根乙酸乙酯提取物中分离得到10个单体化合物,通过理化性质分析和波谱数据分析这10个化合物为3个二萜醌类、3个三萜类、2个甾体类、1个酯类和1个有机酸类,其中1个化合物是首次从该科该属植物中得到；3)建立的HPLC法可在30min内同时完成3个有效成分的色谱分析,且各成分色谱峰之间具有良好的分离度；Horminone、7-O-acetylhorminoe、6,7-Dehydroroy-leanone的线性范围分别为0.31～4.56μg(r=0.9996)、0.01～0.24μg(r=0.9994)、0.40～6.00μg(r=0.9995)；平均加样回收率(n=9)分别为100.3%、100.6%、102.5%；4)新疆鼠尾草乙酸乙酯低、中、高剂量组血栓重量都有不同程度的减少(P<0.01,P<0.01,P<0.01),其中高剂量组的血栓形成最少,且对血栓形成抑制率明显强于复方丹参滴丸组；低、中、高剂量组均能降低血浆中TXB2水平；中剂量能明显降低TXB2/6-Keto-PGF1α的比值(P<0.01)；低、中、高剂量组vWF浓度均显著性降低(P<0.01,P<0.01,P<0.01),且表现出随着剂量的增大,vWF浓度降低的越明显；中剂量和高剂量组t-PA的浓度均有显著性升高(P<0.05,P<0.01),各剂量组t-PA/PAI-1比值均显著性升高(P<0.05,P<0.01,P<0.01),PAI-1浓度均显著性降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。但各剂量组血浆PLG浓度均未见升高,AT-Ⅲ浓度均未见降低,也没有提高PC的浓度；结论：1)新疆鼠尾草根乙酸乙酯部位具有抗血栓的作用；2)新疆鼠尾草根乙酸乙酯部位抗栓作用物质基础主要为含二萜醌类和三萜类化合物的总萜类物质;3)新疆鼠尾草根总萜类抑制血小板黏附和聚集,是其抗血栓作用的机制之一；4)新疆鼠尾草根总萜类抗血栓作用可能与增强纤溶系统活性有一定关系；5)新疆鼠尾草根总萜类抗血栓作用与抗凝系统活性无关。6)建立的HPLC法同时检测3个二萜醌类化合物,简便快速,结果准确可靠,重复性好,可用于新疆鼠尾草药材及其有效部位的质量控制与评价。
【作者】王新玲；
【导师】热娜·卡斯木；
【作者基本信息】新疆医科大学，药理学，2014，博士
【关键词】新疆鼠尾草；抗血栓；抗血小板聚集；6,7-去氢罗列酮；组织型纤溶酶原激活物；

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